羅丹明屬于呫噸族。與市場(chǎng)上的許多其他染料相比,羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性,使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們?cè)诰酆衔锛{米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測(cè)、活細(xì)胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作:分子開(kāi)關(guān),病毒表面修飾,化學(xué)傳感器,硫醇。不同類型的染料通過(guò)它們各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)來(lái)區(qū)分。由于它們的差異,這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性(例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值)。氨基被剛性化的羅丹明染料無(wú)論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率,而在每個(gè)氮處具有兩個(gè)烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)部轉(zhuǎn)化,量子產(chǎn)率和熒光壽命隨溫度的變化而變化。羅丹明101和羅丹明B是一些**常用的羅丹明染料具有以下特點(diǎn):--羧基傾向于在酸性溶液中質(zhì)子化--染料轉(zhuǎn)化為兩性離子堿性溶液--兩性離子染料在極性較小的有機(jī)溶劑中變?yōu)闊o(wú)色內(nèi)酯要將羅丹明用作熒光探針,必須對(duì)其進(jìn)行修改。這可以通過(guò)(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基環(huán)或羧酸基團(tuán)的修飾來(lái)實(shí)現(xiàn)。與TRITC一樣,羅丹明(NHS-rhodamine)的熒光特性為544nm(比較大吸收波長(zhǎng))和576nm(比較大發(fā)射)。SUPER Green I核酸染料特點(diǎn) 。四川杭州熒光染料
一種發(fā)光雜環(huán)化合物,存在于生物發(fā)光的生物體中,如螢火蟲(chóng)。在含有三磷酸腺苷的情況下,通過(guò)熒光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光??捎糜跓晒馑孛干锇l(fā)光成像和細(xì)胞高通量篩選應(yīng)用。D-熒光素(D-Luciferin)是螢火熒光素酶底物,其量子效率為0.88,是Luminol的20倍。反應(yīng)原理:首先,在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng),接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測(cè)定細(xì)胞活力以及細(xì)菌計(jì)數(shù)。它還用于報(bào)告基因檢測(cè)??膳c小動(dòng)物***成像系統(tǒng)配套使用,用于標(biāo)記LUC基因后的體內(nèi)***熒光檢測(cè)。D-熒光素游離酸(D-Luciferin,freeacid)、D-熒光素鉀鹽(D-Luciferin,potassiumsalt)和D-熒光素鈉鹽(D-Luciferin,sodiumsalt),鉀鹽、鈉鹽的形式是**通用的,因?yàn)樗鼈兌家兹苡谒?。鉀鹽也是***動(dòng)物檢測(cè)使用的主要形式。它們的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為328nm和533nm。四川杭州熒光染料Cy7 DiC18(DiR)是一個(gè)親脂性、近紅外熒光花青染料,這個(gè)染料常用于標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)膜。
異硫氰酸熒光素(FITC)是一種有機(jī)熒光染料,目前,這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)中。在495/517nm處,該染料會(huì)產(chǎn)生激發(fā)/發(fā)射峰值,并可借助異硫氰酸鹽反應(yīng)基團(tuán)與不同抗體結(jié)合,該基團(tuán)可以和蛋白質(zhì)上的氨基、巰基、咪唑、酪氨酰、羰基等基團(tuán)相結(jié)合。而它的基本成分——熒光素,其摩爾質(zhì)量為332g/mol,常被用作熒光示蹤劑。FITC(389g/mol)是用于熒光顯微鏡技術(shù)的首批染料,且其被當(dāng)成AlexaFluor®488等后續(xù)熒光染料的發(fā)端。該染料的熒光活性取決于它的大共軛芳香電子系統(tǒng),而該系統(tǒng)受藍(lán)色光譜中的光所激發(fā)。經(jīng)常與FITC同時(shí)使用的另一種染料是與其相似的TRITC[四甲基羅丹明-5(6)-異硫氰酸]。與FITC相反,TRITC并非熒光素,而是羅丹明家族的衍生物。羅丹明也具有一個(gè)大的共軛芳香電子系統(tǒng),正是該系統(tǒng)引發(fā)了它們的熒光行為。還有一點(diǎn)與FITC相反,TRITC(479g/mol)由比較**長(zhǎng)為550nm的綠色光譜中的光所激發(fā),它的比較大發(fā)射波長(zhǎng)為573nm。與蛋白質(zhì)(例如,抗體)結(jié)合也基于異硫氰酸鹽反應(yīng)基團(tuán)。
異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,F(xiàn)ITC):FITC是應(yīng)用*為***的一種熒光素,經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光,*大發(fā)射波長(zhǎng)為525nm。FITC的熒光強(qiáng)度受PH影響較大,常隨著PH的降低而減弱,因此,在使用FITC時(shí)需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質(zhì)檢測(cè)(b)蛋白質(zhì)和肽的微測(cè)序分析(c)使用毛細(xì)管區(qū)帶電泳進(jìn)行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(cè)(e)細(xì)胞和組織切片中的抗原檢測(cè)(f)通過(guò)標(biāo)記DNA片段進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯(lián)物制備外,異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光(由于偶聯(lián)后的大消光系數(shù)和高量子產(chǎn)率),使其成為許多工藝的優(yōu)先染料。在流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光顯微術(shù)中,染料與各種抗體(一抗或二抗)結(jié)合,以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態(tài)。作為熒光素的衍生物,異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán),這有助于其對(duì)通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。熒光染料可以單獨(dú)使用,也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。
染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族,用于標(biāo)記細(xì)胞膜和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料,當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質(zhì),雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱)結(jié)合時(shí),其熒光強(qiáng)度***增強(qiáng)。它們具有很高的淬滅系數(shù),偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中,這種染料會(huì)在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散,導(dǎo)致在其比較好濃度條件下,將整個(gè)細(xì)胞染色。它們不同的熒光顏色:DiI(橙色熒光)、DiO(綠色熒光)、DiD(紅色熒光)、DiR(深紅色熒光),為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI可以分別與標(biāo)準(zhǔn)的FITC和TRITC濾光器一同使用。其中,DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā),并且具有比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)和發(fā)射光波長(zhǎng),為標(biāo)記細(xì)胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常***的替代品。DiR在***成像或者示蹤中非常有用,因?yàn)樗鼈兯l(fā)射的紅外光可以高效地穿過(guò)細(xì)胞和組織,并且在紅外光范圍內(nèi),其本底熒光水平很低。小動(dòng)物成像熒光染料能夠選擇性地與目標(biāo)細(xì)胞或組織結(jié)合。安徽青島熒光染料
非磺化花青類染料- 該組中的一些染料包括 cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7 和 cy7.5。四川杭州熒光染料
Cy7DiC18(DiR)是一個(gè)親脂性、近紅外熒光花青染料。這個(gè)染料常用于標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)膜。Cy7DiC18(DiR)的兩個(gè)18-碳鏈插入到細(xì)胞膜,從而進(jìn)行特定的、穩(wěn)定的細(xì)胞染色,幾乎不會(huì)發(fā)生細(xì)胞間的染料轉(zhuǎn)移。Cy7DiC18(DiR)(近紅外熒光)和其他細(xì)胞膜熒光染料如DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)配合使用,為多色成像和流式細(xì)胞分析提供了有效的工具。Cy7DiC18(DiR)染色后可進(jìn)行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他試劑)的固定,但不建議在染色后進(jìn)行透化的過(guò)程。此外,在固定透化(室溫下用0.1%TritonX-100透化)后,也可以很好地進(jìn)行質(zhì)膜染色。
1、Cy7DiC18(DiR)染色固定的細(xì)胞或組織樣品時(shí),通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進(jìn)行固定,使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?huì)導(dǎo)致熒光背景較高。
2、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 四川杭州熒光染料