3.粘壁細(xì)胞的染色（1）使粘壁的細(xì)胞在無菌實驗室培養(yǎng)。（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。（4）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時間不同。（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

4.顯微鏡檢測（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005

5.流式細(xì)胞儀的檢測DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。 DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）對活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。福建流式細(xì)胞熒光染料

細(xì)胞培養(yǎng)后，需要對其生長情況、形態(tài)甚至生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察。由于細(xì)胞小而復(fù)雜，若不借助適當(dāng)?shù)氖侄?，難以觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu)，更難發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。目前，已有多種研究細(xì)胞的技術(shù)，從光學(xué)顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細(xì)胞化學(xué)法到免疫化學(xué)法。細(xì)胞染色是研究細(xì)胞生物學(xué)特征的一種常用手段，然而，對于細(xì)胞實驗新手來說，想要獲得一張漂亮的細(xì)胞染色圖并不容易。染色試劑不會選、細(xì)胞染色不均勻、染色時切片脫落等都是很常見的問題。

細(xì)胞膜常用染料DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細(xì)胞膜染料（見表2），它們是一族親脂性的熒光染料，用于細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究。該系列染料進(jìn)入細(xì)胞膜后，會在整個細(xì)胞膜上側(cè)向擴(kuò)散，在比較好濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高，染色均一，熒光不易猝滅，無明顯細(xì)胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、造血干祖細(xì)胞等。 陜西生物發(fā)光熒光染料熒光素衍生物具有高吸收率優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中常用的熒光標(biāo)記之一。

琥珀酰亞胺酯（Succinimidylesters）/NHS酯活性熒光染料用于標(biāo)記抗體，蛋白質(zhì)，肽，胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離氨基（-NH2）2、馬來酰亞胺（Maleimides）活性熒光染料用于標(biāo)記抗體，蛋白質(zhì)和肽上的巰基3、疊氮化物(Azides)活性熒光染料通過點擊化學(xué)法（Click）標(biāo)記乙烯基4、炔烴(Alkynes)活性熒光染料通過點擊化學(xué)方法標(biāo)記疊氮化物5、羧酸(Carboxylicacids)活性熒光染料經(jīng)碳二亞胺預(yù)活化后用于標(biāo)記胺或用于醇的Steglich酯化6、氨基(Amines)活性熒光染料具有游離氨基的熒光染料，用于與各種親電子化合物（如活化的酯和環(huán)氧化物）偶聯(lián)。

一：染色液制備1、配制儲液：儲液用無水DMSO或無水EtOH配制，濃度1~5mM。注：未使用的儲液建議分裝后儲存在-20℃，避免反復(fù)凍融。2、工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲液，配制濃度為1~5μM的工作液。注：工作液**終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始比較好濃度的摸索。二：懸浮細(xì)胞染色1、加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106/mL。2、37℃孵育細(xì)胞2~20min，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。3、孵育結(jié)束，1000~1500rpm離心5min。傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。4、重復(fù)步驟3兩次以上。5(6)-FITC (Fluorescein 5(6)-isothiocyanate) 是一種胺活性衍生物的熒光染料.

熒光標(biāo)記技術(shù)是指運用熒光染料與待研究對象結(jié)合，利用它的熒光特性，提供待研究對象相關(guān)信息。熒光標(biāo)記具有操作簡便、高穩(wěn)定性、高靈敏度等優(yōu)勢，使熒光染料在生命科學(xué)研究中應(yīng)用，包括：標(biāo)記活細(xì)胞或固定細(xì)胞中的蛋白質(zhì)、多肽；作為功能性指示劑表征細(xì)胞健康狀況；設(shè)計各種熒光探針，尋找特定蛋白或藥物靶點。應(yīng)用分類：多肽、蛋白、抗體標(biāo)記：氨基標(biāo)記、巰基標(biāo)記、羧基標(biāo)記；***成像：水溶性/脂溶性熒光染料、近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料南京星葉生物科技有限公司提供不同用途的熒光染料，了解更多（包括但不限于）

D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產(chǎn)生典型的黃綠色光。廣東光聲熒光染料

PI是一種可對DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。福建流式細(xì)胞熒光染料

綠色熒光染料ICG的主要作用吲哚菁綠（IndocyanineGreen，簡稱ICG）是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料。它具有獨特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，因此被***用于熒光顯像、光熱***、生物識別和藥物輸送等領(lǐng)域。吲哚菁綠的綠色溶解度是其在水中的溶解度，它是衡量該染料在溶液中的溶解能力的重要指標(biāo)。吲哚菁綠具有較好的水溶性，可以在水中迅速溶解，形成穩(wěn)定的溶液。這一特性使得吲哚菁綠在醫(yī)學(xué)診斷和***中得到廣泛應(yīng)用。吲哚菁綠的主要作用之一是在醫(yī)學(xué)影像學(xué)中作為造影劑。由于其具有強烈的熒光特性，能夠在近紅外光譜范圍內(nèi)吸收和發(fā)射光線，因此被***用于近紅外熒光顯像技術(shù)中。在臨床中，醫(yī)生可以通過注射吲哚菁綠溶液，利用近紅外光源對患者進(jìn)行顯像，以觀察和評估病變部位的血液灌注情況、淋巴引流途徑等。這為醫(yī)生提供了非侵入性、實時性的影像信息，有助于準(zhǔn)確診斷和指導(dǎo)***。此外，吲哚菁綠還在光熱***中發(fā)揮著重要作用。光熱***是一種利用光熱效應(yīng)殺滅腫瘤細(xì)胞的方法。吲哚菁綠可以吸收近紅外光并將其轉(zhuǎn)化為熱能，從而使附近的腫瘤細(xì)胞受熱破壞。這項技術(shù)在*****中具有巨大潛力，因為它可以實現(xiàn)高度精細(xì)的***，同時比較大限度地減少對周圍正常組織的損傷。福建流式細(xì)胞熒光染料