一種發(fā)光雜環(huán)化合物，存在于生物發(fā)光的生物體中，如螢火蟲。在含有三磷酸腺苷的情況下，通過熒光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光?？捎糜跓晒馑孛干锇l(fā)光成像和細(xì)胞高通量篩選應(yīng)用。D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。反應(yīng)原理：首先，在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng)，接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測(cè)定細(xì)胞活力以及細(xì)菌計(jì)數(shù)。它還用于報(bào)告基因檢測(cè)?？膳c小動(dòng)物***成像系統(tǒng)配套使用，用于標(biāo)記LUC基因后的體內(nèi)***熒光檢測(cè)。D-熒光素游離酸（D-Luciferin,freeacid）、D-熒光素鉀鹽（D-Luciferin,potassiumsalt）和D-熒光素鈉鹽（D-Luciferin,sodiumsalt），鉀鹽、鈉鹽的形式是**通用的，因?yàn)樗鼈兌家兹苡谒ｂ淃}也是***動(dòng)物檢測(cè)使用的主要形式。它們的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為328nm和533nm。Super Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）琥珀酰亞胺酯熒光染料。組織熒光染料

InvitrogenCy3染料是一種明亮的橙色熒光染料，可使用532nm激光線激發(fā)，并使用TRITC（四甲基羅丹明）濾光片組進(jìn)行可視化。除了免疫細(xì)胞化學(xué)應(yīng)用，Cy3染料通常用于標(biāo)記核酸。發(fā)光說明：Cy3熒光團(tuán)也是親脂性神經(jīng)元和長(zhǎng)期DiI細(xì)胞追蹤試劑的基礎(chǔ)，該試劑添加烷基尾(≥12個(gè)碳）添加到**熒光團(tuán)上。Cy3染料是用于成像、流式細(xì)胞術(shù)和基因組應(yīng)用的蛋白質(zhì)和核酸結(jié)合物的傳統(tǒng)橙色熒光標(biāo)簽。它也是經(jīng)典親脂性示蹤劑DiI及其變體的基礎(chǔ)。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)，Cy3可分為普通Cy3（常簡(jiǎn)稱Cy3）和磺化Cy3（Sulfo-Cy3）。Cy3水溶性較低，在水相標(biāo)記反應(yīng)時(shí)常常需要使用有機(jī)共溶劑，常用有機(jī)溶劑包括DMF，DMSO和乙腈等?；腔疌y3是在Cy3的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上磺化的產(chǎn)物，附帶2個(gè)或3個(gè)磺酸根離子。由于磺化效應(yīng)，磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮，熒光穩(wěn)定性也提高，可賴受更長(zhǎng)時(shí)間的曝光?；腔疌y3水溶性極高，所以在標(biāo)記反應(yīng)中不需要使用有機(jī)共溶劑，特別適合標(biāo)記蛋白等對(duì)有機(jī)溶劑敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性極好，并且染料分子本身帶電荷，標(biāo)記到蛋白表面后不會(huì)引發(fā)疏水性蛋白聚集，提高熒光標(biāo)記產(chǎn)物的穩(wěn)定性。當(dāng)然，磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇，DMSO，DMF等有機(jī)溶劑，標(biāo)記反應(yīng)也可以在純有機(jī)溶劑中進(jìn)行。內(nèi)蒙古天津熒光染料脂溶性熒光染料cy3、cy5、cy7等。

一：染色液制備1、配制儲(chǔ)液：儲(chǔ)液用無(wú)水DMSO或無(wú)水EtOH配制，濃度1~5mM。注：未使用的儲(chǔ)液建議分裝后儲(chǔ)存在-20℃，避免反復(fù)凍融。2、工作液制備：用合適的緩沖液（如：無(wú)血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲(chǔ)液，配制濃度為1~5μM的工作液。注：工作液**終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來(lái)優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始比較好濃度的摸索。二：懸浮細(xì)胞染色1、加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106/mL。2、37℃孵育細(xì)胞2~20min，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?0min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。3、孵育結(jié)束，1000~1500rpm離心5min。傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長(zhǎng)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。4、重復(fù)步驟3兩次以上。

5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料，具有廣泛的應(yīng)用，作為抗體和其他探針標(biāo)記，用熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實(shí)驗(yàn)。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性，是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中生物檢測(cè)**常用的熒光標(biāo)記之一。**常用的熒光素包括用于標(biāo)記蛋白質(zhì)（特別是抗體）的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)]，5-FITC和用于標(biāo)記肽和寡核苷酸的羧基熒光素（5-FAM和5(6)-FAM）。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物，以及一系列具有針對(duì)細(xì)胞標(biāo)記和檢測(cè)優(yōu)化的特性的質(zhì)量iFluor?熒光標(biāo)記染料。熒光染料可以單獨(dú)使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。

CY7是一種CY染料。CY為花菁(Cyanine)的縮寫，是由奇數(shù)個(gè)甲基單元連接的兩個(gè)氮原子組成的化合物。菁類化合物具有波長(zhǎng)長(zhǎng)、吸收和發(fā)射可調(diào)、消光系數(shù)高的特點(diǎn)CY系染料常被用于蛋白、抗體以及小分子化合物的標(biāo)記，對(duì)于蛋白抗體的標(biāo)記，可以通過簡(jiǎn)單的混合反應(yīng)來(lái)完成結(jié)合，下面我們介紹了蛋白抗體標(biāo)記的標(biāo)記方法，具有一定的參考意義。一、比較好蛋白制備1)為獲得標(biāo)記效果，請(qǐng)制備蛋白(抗體)濃度為2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值為8.5±0.5。如果pH值低于8.0，應(yīng)使用1M3)如果蛋白濃度低于2mg/mL，標(biāo)記效率會(huì)**降低。為獲得比較好標(biāo)記效率，建議**終蛋白濃度范圍為2-10mg/mL。4)蛋白必須在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的緩沖液中，和銨離子，否則會(huì)影響標(biāo)記效率。2.染色制備(以CY3-NHS酯為例)將無(wú)水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中，制備成10mM儲(chǔ)備液。通過移液器或渦旋混合均勻計(jì)算。使用前需先使用縮合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一個(gè)可進(jìn)行后續(xù)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測(cè)和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。光聲熒光染料Cy7.5

D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。組織熒光染料

羅丹明屬于呫噸族。與市場(chǎng)上的許多其他染料相比，羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們?cè)诰酆衔锛{米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測(cè)、活細(xì)胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作：分子開關(guān)，病毒表面修飾，化學(xué)傳感器，硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基（R1、R2、R3、R4和G）來(lái)區(qū)分。由于它們的差異，這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性（例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值）。氨基被剛性化的羅丹明染料無(wú)論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率，而在每個(gè)氮處具有兩個(gè)烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)部轉(zhuǎn)化，量子產(chǎn)率和熒光壽命隨溫度的變化而變化。羅丹明101和羅丹明B是一些**常用的羅丹明染料具有以下特點(diǎn)：--羧基傾向于在酸性溶液中質(zhì)子化--染料轉(zhuǎn)化為兩性離子堿性溶液--兩性離子染料在極性較小的有機(jī)溶劑中變?yōu)闊o(wú)色內(nèi)酯要將羅丹明用作熒光探針，必須對(duì)其進(jìn)行修改。這可以通過(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基環(huán)或羧酸基團(tuán)的修飾來(lái)實(shí)現(xiàn)。與TRITC一樣，羅丹明(NHS-rhodamine)的熒光特性為544nm（比較大吸收波長(zhǎng)）和576nm（比較大發(fā)射）。組織熒光染料