Cy5:激發(fā)波長633/635nm,比較大發(fā)射波長670nm。1)其標記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細胞儀;2)在流式細胞儀的FL4通道檢測;3)適用于熒光顯微鏡技術;4)同樣為小分子染料,非常適合需小分子染料的流式細胞術,熒光強度低于APC。5)與單核和粒細胞非特異性結(jié)合多,易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
5、PE:激發(fā)波長488nm,比較大發(fā)射波長575nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氯離子激光器的流式細胞儀:2)在流式細胞儀的FL2通道檢測;3)其熒光泯滅性強,不適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術,但適用于激光共聚焦顯微鏡技術。
6、PE-TR:激發(fā)波長488nm,比較大發(fā)射波長615nm。1)在BeckmanCoulter流式細胞儀的FL3通道檢測;2)可適用于小功率激光器的流式細胞儀,也可使用于大功率激光器的大流式細胞儀。
7、PE-AlexaFluor610:激發(fā)波長488nm,比較大發(fā)射波長628nm。1)在BeckmanCoulter流式細胞儀的FL3通道檢測;2)熒光強度高;3)可適用于小功率激光器的流式細胞儀,也可使用于大功率激光器的大流式細胞儀。 目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。流式細胞熒光染料Fluor 555
過標記——計算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標記的熒光團大于10mol。雖然過標記的蛋白也可以使用,但可能會引起蛋白的聚集、降低抗體結(jié)合抗原的特異性,這些都會造成非特異性結(jié)合。過標記還會引起熒光淬滅??梢栽黾拥鞍谆驕p少反應時間。3.未結(jié)合染料難以去除——盡管大部分時候用分離柱可以較好的純化蛋白偶聯(lián)物,但仍可能會有痕量的游離染料留在偶聯(lián)物溶液中,會使標記計算的值偏高??捎梅蛛x柱再次分離或透析去除。4.蛋白或蛋白偶聯(lián)物無法洗脫——不要再加緩沖液,只需再次離心一次或幾次。顯微鏡熒光染料DIODiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料,可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。
綠色熒光染料ICG的主要作用吲哚菁綠(IndocyanineGreen,簡稱ICG)是一種廣泛應用于醫(yī)學和生物領域的熒光染料。它具有獨特的化學結(jié)構(gòu)和性質(zhì),因此被***用于熒光顯像、光熱***、生物識別和藥物輸送等領域。吲哚菁綠的綠色溶解度是其在水中的溶解度,它是衡量該染料在溶液中的溶解能力的重要指標。吲哚菁綠具有較好的水溶性,可以在水中迅速溶解,形成穩(wěn)定的溶液。這一特性使得吲哚菁綠在醫(yī)學診斷和***中得到廣泛應用。吲哚菁綠的主要作用之一是在醫(yī)學影像學中作為造影劑。由于其具有強烈的熒光特性,能夠在近紅外光譜范圍內(nèi)吸收和發(fā)射光線,因此被***用于近紅外熒光顯像技術中。在臨床中,醫(yī)生可以通過注射吲哚菁綠溶液,利用近紅外光源對患者進行顯像,以觀察和評估病變部位的血液灌注情況、淋巴引流途徑等。這為醫(yī)生提供了非侵入性、實時性的影像信息,有助于準確診斷和指導***。此外,吲哚菁綠還在光熱***中發(fā)揮著重要作用。光熱***是一種利用光熱效應殺滅腫瘤細胞的方法。吲哚菁綠可以吸收近紅外光并將其轉(zhuǎn)化為熱能,從而使附近的腫瘤細胞受熱破壞。這項技術在*****中具有巨大潛力,因為它可以實現(xiàn)高度精細的***,同時比較大限度地減少對周圍正常組織的損傷。
Hoechst33258是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料,對細胞的毒性較低。用于細胞核染色時,推薦的Hoechst33258工作濃度為0.5-10μg/ml。儲存條件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。注意事項:Hoechst33258對人體有害,請注意適當防護。熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡量當天完成檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液??篃晒獯銣绶馄?P0126)可以向碧云天訂購。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作注意事項:Hoechst33342對人體有一定刺激性,請注意適當防護。熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡量當天完成檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性,使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。
一:染色液制備1、配制儲液:儲液用無水DMSO或無水EtOH配制,濃度1~5mM。注:未使用的儲液建議分裝后儲存在-20℃,避免反復凍融。2、工作液制備:用合適的緩沖液(如:無血清培養(yǎng)基,HBSS或PBS)稀釋儲液,配制濃度為1~5μM的工作液。注:工作液**終濃度建議根據(jù)不同細胞系和實驗體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始比較好濃度的摸索。二:懸浮細胞染色1、加入適當體積的染色工作液重懸細胞,使其密度為1×106/mL。2、37℃孵育細胞2~20min,不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同??梢?0min作為起始孵育時間,之后優(yōu)化體系以得到均一的標記效果。3、孵育結(jié)束,1000~1500rpm離心5min。傾倒上清液,再次緩慢加入37℃預熱的生長培養(yǎng)液重懸細胞。4、重復步驟3兩次以上。Super Fluor 555(效果同Alexa Fluor 555)琥珀酰亞胺酯熒光染料。熒光素鉀鹽熒光染料DAPI
CY7.5熒光染料是一種被廣泛應用于生物分子檢測和熒光成像等領域的高效、穩(wěn)定的熒光標記試劑。流式細胞熒光染料Fluor 555
蛋白熒光標記技術是目前**為常見的蛋白體外標記技術,利用級聯(lián)放大反應原理,將極度敏感性且易于檢測的熒光素通過某個基團吸附或共價結(jié)合后,標記到特異性抗原或抗體分子上,應用熒光顯微鏡觀察熒光標記物因增強放大效應而產(chǎn)生顏色、光譜等變化,以分析示蹤相應抗體或抗原性質(zhì)與含量的方法。該技術在具有高度精確性的熒光顯微鏡下,借助高度靈敏性的熒光檢測,在各種生物過程中對目的蛋白進行可視化,從而通過抗原抗體高度特異性免疫定量表達或在細胞研究中定位。蛋白熒光標記已成為研究蛋白質(zhì)互作、酶活性、***示蹤以及細胞分選重要工具。蛋白標記常用熒光染料隨著蛋白熒光標記技術不斷發(fā)展,各類熒光素廣泛應用于生物實驗中,目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。南京星葉生物科技有限公司提供多種性價比高的各類活化熒光素,其熒光染料覆蓋波長范圍從350nm到790nm,例如Cy系列、SuperFluor系列(效果同AlexaFluor系列)等,用于標記抗體、多肽以及蛋白功能基團,繼而生成分子探針,通過熒光成像進行相應檢測。流式細胞熒光染料Fluor 555