熒光標(biāo)記技術(shù)是指運用熒光染料與待研究對象結(jié)合,利用它的熒光特性,提供待研究對象相關(guān)信息。熒光標(biāo)記具有操作簡便、高穩(wěn)定性、高靈敏度等優(yōu)勢,使熒光染料在生命科學(xué)研究中應(yīng)用,包括:標(biāo)記活細(xì)胞或固定細(xì)胞中的蛋白質(zhì)、多肽;作為功能性指示劑表征細(xì)胞健康狀況;設(shè)計各種熒光探針,尋找特定蛋白或藥物靶點。應(yīng)用分類:多肽、蛋白、抗體標(biāo)記:氨基標(biāo)記、巰基標(biāo)記、羧基標(biāo)記;***成像:水溶性/脂溶性熒光染料、近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料南京星葉生物科技有限公司提供不同用途的熒光染料,了解更多(包括但不限于)
熒光素衍生物具有高吸收率優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中常用的熒光標(biāo)記之一。青島熒光染料luciferin
熒光染料,由于靈敏度高,操作方便,逐漸取代了放射性同位素作為檢測標(biāo)記,其廣泛應(yīng)用于熒光免疫,熒光探針,細(xì)胞染色等。包括特異性的DNA染色,用于染色體分析、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡等相關(guān)研究。另有很多核酸染料在多色染色系統(tǒng)中是非常有用的復(fù)染劑,可作為背景對照,標(biāo)記細(xì)胞核使細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的空間關(guān)系一目了然。熒光標(biāo)記的單克隆抗體技術(shù)為流式細(xì)胞儀在研究細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)各種功能性抗原、**基因蛋白等領(lǐng)域擴(kuò)展了無限的應(yīng)用空間。熒光探針可以通過蛋白質(zhì)交聯(lián)劑共價結(jié)合在單克隆抗體上。免疫熒光標(biāo)記**常用的染料有異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)、藻紅蛋白(PE)以及AlexaFluor系列染料等。核酸熒光染料對細(xì)胞核染色后定量測量細(xì)胞所發(fā)出的熒光強(qiáng)度,就可以確定細(xì)胞核中DNA、RNA的含量,并可以對細(xì)胞周期和細(xì)胞的增殖狀況進(jìn)行分析。有多種熒光染料可以對細(xì)胞中的DNA或RNA染色,常用的DNA染料包括碘化丙啶(PI)、DAPI、Hoechst33342等,RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。福建神經(jīng)熒光染料5(6)-FITC (Fluorescein 5(6)-isothiocyanate) 是一種胺活性衍生物的熒光染料.
藻紅蛋白-藻紅蛋白(PE)是一種紅色蛋白色素復(fù)合物,屬于藻膽蛋白家族。它可以在紅藻和隱植物中找到,它作為葉綠素色素的附屬物。在生物科學(xué)中,熒光團(tuán)可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,例如用于抗原檢測的抗體等,因為它能夠發(fā)出明亮的熒光。由于熒光團(tuán)往往會很快發(fā)生光漂白,因此很少在熒光顯微鏡中使用。它經(jīng)常用于流式細(xì)胞術(shù)?!鶆e藻藍(lán)蛋白(APC)-與藻紅蛋白一樣,別藻藍(lán)蛋白也屬于藻膽蛋白家族,是從紅藻中分離出來的。在594和633nm的激光線激發(fā)下,熒光團(tuán)的比較大吸光度在650nm處,而熒光發(fā)射峰在66nm處。與熒光素偶聯(lián)物相比,熒光團(tuán)的靈敏度已顯示高5至10倍,并具有許多其他有益特性,包括大斯托克斯位移、高水溶性、長波長發(fā)射和耐猝滅。雖然別藻藍(lán)蛋白通常不用于需要光穩(wěn)定性的應(yīng)用,但它***用于流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、微陣列等過程以及各種依賴高靈敏度的應(yīng)用。
與花青和羅丹明染料一樣,熒光素也是一種有機(jī)染料。熒光素的比較大吸收波長為494nm,比較大發(fā)射波長為521nm(通常吸收藍(lán)色范圍內(nèi)的光并發(fā)射綠色范圍內(nèi)的光),熒光素是一種高熒光物質(zhì)。即使在非常少量的情況下也可以檢測到它,并且在與抗體結(jié)合時用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣,熒光素價格低廉且易于使用,使其成為生物學(xué)研究中很受歡迎的染料之一。與大多數(shù)其他染料不同,熒光素在水溶液中是無毒的。因此,它是極少數(shù)用作地下水示蹤劑的染料之一。D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物,存在于多種發(fā)光生物體中。
異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,F(xiàn)ITC):FITC是應(yīng)用*為***的一種熒光素,經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光,*大發(fā)射波長為525nm。FITC的熒光強(qiáng)度受PH影響較大,常隨著PH的降低而減弱,因此,在使用FITC時需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質(zhì)檢測(b)蛋白質(zhì)和肽的微測序分析(c)使用毛細(xì)管區(qū)帶電泳進(jìn)行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(e)細(xì)胞和組織切片中的抗原檢測(f)通過標(biāo)記DNA片段進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯(lián)物制備外,異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光(由于偶聯(lián)后的大消光系數(shù)和高量子產(chǎn)率),使其成為許多工藝的優(yōu)先染料。在流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光顯微術(shù)中,染料與各種抗體(一抗或二抗)結(jié)合,以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態(tài)。作為熒光素的衍生物,異硫氰酸熒光素含有一個異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán),這有助于其對通常存在于生物分子中的動漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖?。水溶熒光染料Fluor 680
D-熒光素鉀鹽小動物成像。青島熒光染料luciferin
本質(zhì)上,有機(jī)染料的特征在于源自在整個生色團(tuán)上離域的光學(xué)躍遷或源自分子間電荷轉(zhuǎn)移躍遷(從激發(fā)電子態(tài)的分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移)的發(fā)射。在這里,表現(xiàn)出源自在整個生色團(tuán)上離域的光學(xué)躍遷的發(fā)射的染料被稱為共振染料(介觀染料),而后者被稱為CT染料(電荷轉(zhuǎn)移染料)?;ㄇ?、羅丹明和熒光素是一些最常見的共振染料,其特點是窄的吸收和發(fā)射帶(略微結(jié)構(gòu)化),往往相互鏡像,以及小的、對溶劑極性不敏感的斯托克斯位移。另一方面,CT染料包括香豆素和丹磺酰熒光團(tuán)等染料,其特點是與共振染料相比,吸收和發(fā)射帶結(jié)構(gòu)無結(jié)構(gòu),分離良好,以及更大的斯托克斯位移。同樣,與共振染料相比,CT染料具有更小的摩爾吸收系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率。對于共振和CT熒光染料,在結(jié)構(gòu)-性質(zhì)關(guān)系眾所周知的情況下,可以通過精心設(shè)計的策略來微調(diào)光譜性質(zhì)。青島熒光染料luciferin