細(xì)胞培養(yǎng)后，需要對其生長情況、形態(tài)甚至生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察。由于細(xì)胞小而復(fù)雜，若不借助適當(dāng)?shù)氖侄?，難以觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu)，更難發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。目前，已有多種研究細(xì)胞的技術(shù)，從光學(xué)顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細(xì)胞化學(xué)法到免疫化學(xué)法。細(xì)胞染色是研究細(xì)胞生物學(xué)特征的一種常用手段，然而，對于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)新手來說，想要獲得一張漂亮的細(xì)胞染色圖并不容易。染色試劑不會(huì)選、細(xì)胞染色不均勻、染色時(shí)切片脫落等都是很常見的問題。

細(xì)胞膜常用染料DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細(xì)胞膜染料（見表2），它們是一族親脂性的熒光染料，用于細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究。該系列染料進(jìn)入細(xì)胞膜后，會(huì)在整個(gè)細(xì)胞膜上側(cè)向擴(kuò)散，在比較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高，染色均一，熒光不易猝滅，無明顯細(xì)胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、造血干祖細(xì)胞等。 D-熒光素鉀鹽小動(dòng)物成像。廣西南京熒光染料

使用螢火蟲熒光素酶（Fluc）作為報(bào)告基因和 D-熒光素作為底物的生物發(fā)光成像（BLI）是目前應(yīng)用*****的技術(shù)。將總信號(hào)強(qiáng)度相對于 D-熒光素注射后的時(shí)間進(jìn)行繪制，以生成時(shí)間-強(qiáng)度曲線。除了峰值信號(hào)外，還確定注射 D-熒光素后固定時(shí)間點(diǎn)（5、10、15 和 20 分鐘）的信號(hào)作為峰值信號(hào)的替代。給定時(shí)間-強(qiáng)度曲線中的信號(hào)針對曲線中的峰值信號(hào)進(jìn)行歸一化，以表示 D-熒光素注射后時(shí)間變化的模式[3]。每克體重注射 10 μL D-熒光素（腹膜內(nèi)或靜脈注射）儲(chǔ)備液：對于 20 g 小鼠，標(biāo)準(zhǔn) 150 mg/kg 注射通常約為 200 μL。在室溫下解凍 D-熒光素（鉀鹽或鈉鹽）并溶解在 dPBS（不含鈣或鎂）中，**終濃度為 15 mg/mL。通過吸取 5-10 mL 無菌水來預(yù)濕 0.22 μm 過濾器。浙江合肥熒光染料Super Flour 系列在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。

二、***成像分析：D-熒光素，鉀鹽，D-PBS,不含鈣、鎂1、配制溶液使用無菌D-PBS（w/oCa2+;Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液（15mg/ml），0.22μm濾膜過濾除菌（避光），分裝后于-20℃或-80℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。使用時(shí)4℃融化，實(shí)驗(yàn)前平衡至室溫（避光）2、注射量取決于注射方式，具體如下：注射方式劑量靜脈注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液腹腔注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液肌肉注射（27gauge針頭）50μl，濃度為1-2mg/ml熒光素工作液鼻內(nèi)注射（pipette）50μl，濃度為3mg/ml熒光素工作液3、注射入體內(nèi)10-20min（待光信號(hào)達(dá)到**強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期），再進(jìn)行成像分析

5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料，具有廣泛的應(yīng)用，作為抗體和其他探針標(biāo)記，用熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實(shí)驗(yàn)。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性，是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中生物檢測**常用的熒光標(biāo)記之一。**常用的熒光素包括用于標(biāo)記蛋白質(zhì)（特別是抗體）的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)]，5-FITC和用于標(biāo)記肽和寡核苷酸的羧基熒光素（5-FAM和5(6)-FAM）。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物，以及一系列具有針對細(xì)胞標(biāo)記和檢測優(yōu)化的特性的質(zhì)量iFluor?熒光標(biāo)記染料。DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于細(xì)胞核染色，可將細(xì)胞核染成藍(lán)色。

異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）：FITC是應(yīng)用*為***的一種熒光素，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光，*大發(fā)射波長為525nm。FITC的熒光強(qiáng)度受PH影響較大，常隨著PH的降低而減弱，因此，在使用FITC時(shí)需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質(zhì)檢測(b)蛋白質(zhì)和肽的微測序分析(c)使用毛細(xì)管區(qū)帶電泳進(jìn)行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(e)細(xì)胞和組織切片中的抗原檢測(f)通過標(biāo)記DNA片段進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯(lián)物制備外，異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光（由于偶聯(lián)后的大消光系數(shù)和高量子產(chǎn)率），使其成為許多工藝的優(yōu)先染料。在流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光顯微術(shù)中，染料與各種抗體（一抗或二抗）結(jié)合，以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態(tài)。作為熒光素的衍生物，異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán)，這有助于其對通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。南京星葉生物提供多種性價(jià)比高的各類活化熒光素，例如Cy系列、Super Fluor 系列（效果同Alexa Fluor系列）等。河南熒光染料

動(dòng)物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。廣西南京熒光染料

SUPERGreenI（10,000×DMSO溶液，電泳級）儲(chǔ)存條件及注意事項(xiàng)4℃避光可保存12個(gè)月。本品用DMSO溶解，因DMSO的熔點(diǎn)是18.5℃，使用前請放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點(diǎn)●無毒性：屬花菁類染料，容易生物降解，無致*毒性?！耢`敏度高：至少可檢出20pgDNA，高于EB染色法25～100倍。●信噪比高：樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低?！癫僮骱唵危簾o須脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察。●適用范圍廣：可適用于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場凝膠電泳和毛細(xì)管電泳等。●使用方便：對分子生物學(xué)中常用的酶（如：Taq酶、反轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用。●經(jīng)濟(jì)：價(jià)格比銀染便宜。廣西南京熒光染料