在7種轉(zhuǎn)染試劑(DAC-30、DC-30、Lipofectin、LipofectAMINEPLUS、Effectene、FuGene 6和superect)中，F(xiàn)uGene 6轉(zhuǎn)染HASMCs和α-10 SMCs的效率比較高。在這兩種細(xì)胞系中，superect產(chǎn)生的細(xì)胞毒性作用比較高，其次是DAC-30和Lipofectamine Plus，而FuGene 6被認(rèn)為對(duì)細(xì)胞系相對(duì)安全。在另一項(xiàng)比較人類和動(dòng)物來(lái)源的不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染結(jié)果的研究中，豬氣管上皮細(xì)胞(PTE)被Effectene、Lipofectamine Plus和PEI等轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染的效率高于人類氣管上皮細(xì)胞(HTE)?；瘜W(xué)轉(zhuǎn)染后，轉(zhuǎn)染后的HTE也表現(xiàn)出比PTE更低的活力。兩項(xiàng)被引用研究的綜合結(jié)果認(rèn)為動(dòng)物細(xì)胞系可能比人類細(xì)胞系更有效地轉(zhuǎn)染。懸浮細(xì)胞通常被認(rèn)為比貼壁細(xì)胞更難轉(zhuǎn)染，因?yàn)檗D(zhuǎn)染復(fù)合物對(duì)細(xì)胞的潛在附著減少懸浮細(xì)胞表面。然而，一項(xiàng)比較Xfect、Lipofectamine2000、Nanofectamin、TransIT-X2和TransIT-2020效率的研究表明，除了Xfect之外，所有試劑轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞的效率都高于貼壁細(xì)胞(Tammetal.，2016)。然而，相反觀察結(jié)果背后的原因在很大程度上仍不清楚，未來(lái)可能會(huì)進(jìn)一步探索。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實(shí)驗(yàn)需要。黑龍江polyplus轉(zhuǎn)染試劑

肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強(qiáng)烈的毒性反應(yīng)，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。幾項(xiàng)體內(nèi)研究表明，pDNA載體的肺內(nèi)遞送是促炎th1樣細(xì)胞因子的產(chǎn)生和隨后浸潤(rùn)細(xì)胞涌入肺區(qū)域的原因。在任何情況下，陽(yáng)離子脂質(zhì)本身不會(huì)引起免疫反應(yīng)，而且這種效果不是由于pDNA制備中存在內(nèi)***。在一項(xiàng)囊性纖維化臨床試驗(yàn)中，急性輕度流感樣癥狀被認(rèn)為是由DNA依賴效應(yīng)引起的，而對(duì)照組(*脂質(zhì)組)沒(méi)有觀察到這種效應(yīng)。有幾種方法可以降低載體CpG基序的免疫刺激作用。這些包括這些基序中胞嘧啶堿基的甲基化，中和序列的添加，CpG基序的消除，使用化學(xué)或生物方法的免疫抑制，將載體靶向遠(yuǎn)離網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞，以及抑制內(nèi)粒體酸化。研究表明，系統(tǒng)地消除pDNA載體中約50%的CpG基序，可導(dǎo)致體外小鼠脾細(xì)胞和靜脈注射或鼻內(nèi)滴注小鼠肺中細(xì)胞因子分泌減少。該方案還增加了轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平。利用肌內(nèi)注射等途徑，遠(yuǎn)離網(wǎng)狀上皮系統(tǒng)進(jìn)行被動(dòng)靶向，也能提高轉(zhuǎn)基因表達(dá)水平。貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨超聲輔助轉(zhuǎn)染涉及在宿主細(xì)胞膜上制造微小的孔，以促進(jìn)核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。

除了mRNA疫苗，DNA疫苗也是不錯(cuò)的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹(shù)狀大分子(PAMAM G4)的幫助下，研究人員集中研究了將合成t細(xì)胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進(jìn)了PG和PAMAM G4復(fù)合物的大小、運(yùn)動(dòng)性和表面電荷，然后在BALB/c小鼠中測(cè)試疫苗設(shè)計(jì)的免疫原性。根據(jù)研究結(jié)果，由于同時(shí)包裝在PG和PAMAM G4包膜中，DNA疫苗的免疫原性增加。在給予PG包被的DNA疫苗復(fù)合物的小鼠中，觀察到**強(qiáng)的t細(xì)胞反應(yīng)，并且這些反應(yīng)明顯高于給予裸DNA組合和PAMAM 4G包被的DNA組合的動(dòng)物組。

轉(zhuǎn)染時(shí)通常推薦使用血清減少或無(wú)血清培養(yǎng)基，包括陽(yáng)離子轉(zhuǎn)染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。這種轉(zhuǎn)染活動(dòng)需要形成陽(yáng)離子脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物，這需要帶正電的脂質(zhì)體分子和帶負(fù)電的核酸之間的相互作用。因此，血清中負(fù)電荷分子的存在可能會(huì)影響這種復(fù)雜的相互作用，從而影響轉(zhuǎn)染效率。然而，發(fā)現(xiàn)10%血清的存在導(dǎo)致FuGENE HD、jetPEI、Lipofectamine 2000和Arrest-In轉(zhuǎn)染MCF-7、HeLa、C2C12和MC3T3的轉(zhuǎn)染效率更高。研究表明，轉(zhuǎn)染中少量的血清可以通過(guò)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)染復(fù)合物的zeta電位來(lái)改善轉(zhuǎn)染復(fù)合物與其宿主細(xì)胞表面之間的表面相互作用。共轉(zhuǎn)染是將一種以上類型的核酸引入真核細(xì)胞的過(guò)程。

化學(xué)轉(zhuǎn)染的效率在很大程度上取決于幾個(gè)因素，如使用的試劑類型、靶細(xì)胞的來(lái)源和性質(zhì)，以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸，并將其靶標(biāo)傳遞給非分裂細(xì)胞和分裂細(xì)胞，因此在基因***中非常有用。有幾個(gè)因素已被證明可能影響病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率，如靶細(xì)胞類型、使用的啟動(dòng)子類型、載體濃度和使用的轉(zhuǎn)導(dǎo)介質(zhì)條件。在一項(xiàng)評(píng)估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進(jìn)行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的體外研究中，觀察到這兩種病毒在來(lái)自人類、倉(cāng)鼠、貓、狗、馬和豬的不同細(xì)胞系上的不同程度的效率。在大多數(shù)細(xì)胞類型上，使用HIV的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率普遍優(yōu)于EIAV，而這兩種病毒對(duì)嚙齒動(dòng)物細(xì)胞的***性較弱。在同一項(xiàng)研究中，啟動(dòng)子的類型也被認(rèn)為是可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的一個(gè)因素，因此含有替代CMV啟動(dòng)子的內(nèi)部啟動(dòng)子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細(xì)胞上表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。流式細(xì)胞術(shù)可以更精確地定量表達(dá)特定熒光基因的細(xì)胞，以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨

核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對(duì)轉(zhuǎn)染效率也有影響。黑龍江polyplus轉(zhuǎn)染試劑

在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過(guò)病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主細(xì)胞中。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動(dòng)子、復(fù)制起點(diǎn)、多個(gè)克隆位點(diǎn)、目標(biāo)基因和選擇標(biāo)記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源，而多個(gè)克隆位點(diǎn)包含獨(dú)特的內(nèi)切酶切割位點(diǎn)，用于插入外源基因。適當(dāng)?shù)恼婧藛?dòng)子(如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染。與線性DNA相比，使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會(huì)產(chǎn)生更高的效率，線性DNA更容易被外切酶降解。然而，線性化的DNA更具重組性，因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。黑龍江polyplus轉(zhuǎn)染試劑