為什么要使用熒光染料?雖然不同的染色技術(shù)(即考馬斯染色、銀染色、熒光染色)可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì),但使用熒光染料具有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。他們提供:高靈敏度:對(duì)于大多數(shù)分析物,熒光測(cè)量的靈敏度比吸光度測(cè)量高1000倍,即使在使用小樣本時(shí)也可以令人滿意地達(dá)到ppt(萬(wàn)億分之一)的檢測(cè)限。寬線性動(dòng)態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾:由于吸收光的材料數(shù)量眾多,分光光度測(cè)量通常會(huì)遇到干擾問(wèn)題。在進(jìn)行熒光測(cè)量時(shí)不會(huì)遇到這個(gè)問(wèn)題,因?yàn)橹挥猩贁?shù)材料具有熒光能力。高通量:熒光測(cè)量具有簡(jiǎn)單而強(qiáng)大的協(xié)議,并且可以自動(dòng)化用于高通量應(yīng)用。吲哚菁綠的主要作用之一是在醫(yī)學(xué)影像學(xué)中作為造影劑。遼寧熒光染料Fluor 555
琥珀酰亞胺酯(Succinimidylesters)/NHS酯活性熒光染料用于標(biāo)記抗體,蛋白質(zhì),肽,胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離氨基(-NH2)2、馬來(lái)酰亞胺(Maleimides)活性熒光染料用于標(biāo)記抗體,蛋白質(zhì)和肽上的巰基3、疊氮化物(Azides)活性熒光染料通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)法(Click)標(biāo)記乙烯基4、炔烴(Alkynes)活性熒光染料通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)方法標(biāo)記疊氮化物5、羧酸(Carboxylicacids)活性熒光染料經(jīng)碳二亞胺預(yù)活化后用于標(biāo)記胺或用于醇的Steglich酯化6、氨基(Amines)活性熒光染料具有游離氨基的熒光染料,用于與各種親電子化合物(如活化的酯和環(huán)氧化物)偶聯(lián)。脂質(zhì)熒光染料發(fā)射花青類熒光染料屬于共振染料,其特征在于具有離域電荷的氮原子(兩個(gè)氮原子)之間的聚甲炔染料。
藻紅蛋白-藻紅蛋白(PE)是一種紅色蛋白色素復(fù)合物,屬于藻膽蛋白家族。它可以在紅藻和隱植物中找到,它作為葉綠素色素的附屬物。在生物科學(xué)中,熒光團(tuán)可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,例如用于抗原檢測(cè)的抗體等,因?yàn)樗軌虬l(fā)出明亮的熒光。由于熒光團(tuán)往往會(huì)很快發(fā)生光漂白,因此很少在熒光顯微鏡中使用。它經(jīng)常用于流式細(xì)胞術(shù)?!鶆e藻藍(lán)蛋白(APC)-與藻紅蛋白一樣,別藻藍(lán)蛋白也屬于藻膽蛋白家族,是從紅藻中分離出來(lái)的。在594和633nm的激光線激發(fā)下,熒光團(tuán)的比較大吸光度在650nm處,而熒光發(fā)射峰在66nm處。與熒光素偶聯(lián)物相比,熒光團(tuán)的靈敏度已顯示高5至10倍,并具有許多其他有益特性,包括大斯托克斯位移、高水溶性、長(zhǎng)波長(zhǎng)發(fā)射和耐猝滅。雖然別藻藍(lán)蛋白通常不用于需要光穩(wěn)定性的應(yīng)用,但它***用于流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、微陣列等過(guò)程以及各種依賴高靈敏度的應(yīng)用。
FITC熒光標(biāo)記蛋白的應(yīng)用及特點(diǎn):活性熒光染料,如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、羅丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料,可用于標(biāo)記抗體或蛋白質(zhì)功能基團(tuán),生成分子探針,并通過(guò)熒光成像進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)用熒光染料化學(xué)標(biāo)記特異性抗體或其他純化生物分子時(shí),它們成為用于檢測(cè)靶抗原或相互作用配偶體的熒光探針,用于細(xì)胞成像、流式細(xì)胞手術(shù)、蛋白質(zhì)痕跡和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。由于熒光標(biāo)記物具有無(wú)放射物污染、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),在蛋白質(zhì)功能研究、藥物篩選等許多研究領(lǐng)域得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。
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且Super Fluor活化酯(與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同) 小動(dòng)物成像熒光染料能夠選擇性地與目標(biāo)細(xì)胞或組織結(jié)合。
注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,從而確定比較高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。保存和操作的過(guò)程中都要避光。另外水溶性儲(chǔ)存液過(guò)濾除菌后,可以-20℃或-80℃分裝凍存,避免反復(fù)凍融。如果有條件,對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸?,穩(wěn)定性和保存時(shí)間更長(zhǎng)。 注射方式,動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定比較好信號(hào)平臺(tái)期和比較好的檢測(cè)時(shí)間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒(méi)有差別,兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來(lái)看,鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽,尤其是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。兩者功效相同。 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。CY7.5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測(cè)和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。遼寧熒光染料Fluor 555
異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán)這有助于其對(duì)通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。遼寧熒光染料Fluor 555
異硫氰酸熒光素(FITC)是一種有機(jī)熒光染料,目前,這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)中。在495/517nm處,該染料會(huì)產(chǎn)生激發(fā)/發(fā)射峰值,并可借助異硫氰酸鹽反應(yīng)基團(tuán)與不同抗體結(jié)合,該基團(tuán)可以和蛋白質(zhì)上的氨基、巰基、咪唑、酪氨酰、羰基等基團(tuán)相結(jié)合。而它的基本成分——熒光素,其摩爾質(zhì)量為332g/mol,常被用作熒光示蹤劑。FITC(389g/mol)是用于熒光顯微鏡技術(shù)的首批染料,且其被當(dāng)成AlexaFluor®488等后續(xù)熒光染料的發(fā)端。該染料的熒光活性取決于它的大共軛芳香電子系統(tǒng),而該系統(tǒng)受藍(lán)色光譜中的光所激發(fā)。經(jīng)常與FITC同時(shí)使用的另一種染料是與其相似的TRITC[四甲基羅丹明-5(6)-異硫氰酸]。與FITC相反,TRITC并非熒光素,而是羅丹明家族的衍生物。羅丹明也具有一個(gè)大的共軛芳香電子系統(tǒng),正是該系統(tǒng)引發(fā)了它們的熒光行為。還有一點(diǎn)與FITC相反,TRITC(479g/mol)由比較**長(zhǎng)為550nm的綠色光譜中的光所激發(fā),它的比較大發(fā)射波長(zhǎng)為573nm。與蛋白質(zhì)(例如,抗體)結(jié)合也基于異硫氰酸鹽反應(yīng)基團(tuán)。遼寧熒光染料Fluor 555