**近一項與抗血管生成基因傳遞高度相關(guān)的發(fā)現(xiàn)是,陽離子脂質(zhì)體(CLs)選擇性地靶向**的血管系統(tǒng)。陰離子或電中性脂質(zhì)體沒有發(fā)現(xiàn)這種作用。Campbell和他的同事[95]發(fā)現(xiàn),與電中性脂質(zhì)體相比,使用CLs在**血管內(nèi)皮細胞(VECs)中積累更多,CLs通過添加5mol%聚乙二醇來穩(wěn)定。在兩種人類**類型(LS174T和MCAIV)和兩個位置(顱窗和背側(cè)皮膚褶腔)中發(fā)現(xiàn)了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的,這可能與該技術(shù)是否足以根除足夠數(shù)量的**VECs以實現(xiàn)**消退反應(yīng)有關(guān)。有趣的是,注射后24小時,脂質(zhì)體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個因素,包括轉(zhuǎn)染核酸的類型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。貴州lipo3000轉(zhuǎn)染試劑
轉(zhuǎn)染是將外來核酸傳遞到真核細胞中以修飾宿主細胞的遺傳組成的過程。在過去的30年里,轉(zhuǎn)染因其廣泛應(yīng)用于研究疾病的細胞過程和分子機制而越來越受歡迎。了解疾病的分子途徑,可以發(fā)現(xiàn)可能用于疾病診斷和預(yù)后的特定生物標(biāo)志物。此外,轉(zhuǎn)染可以作為基因***中的策略之一,用于***無法***的遺傳性遺傳病。***,生命科學(xué)技術(shù)的進步允許將不同類型的核酸轉(zhuǎn)染到哺乳動物細胞中,這些核酸包括脫氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA)以及小的非編碼RNA,如siRNA,shRNA和miRNA。通常轉(zhuǎn)染可分為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和瞬時轉(zhuǎn)染兩種類型。穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指通過將外源DNA整合到宿主核基因組中,或在宿主核中作為染色體外元件維持一個外源載體來維持轉(zhuǎn)基因的長期表達。該轉(zhuǎn)基因可然后通過細胞的復(fù)制進行本構(gòu)性表達。相比之下,瞬時轉(zhuǎn)染不需要將核酸整合到宿主細胞基因組中。核酸可以以質(zhì)粒的形式或寡核苷酸的形式轉(zhuǎn)染。因此,隨著宿主細胞的復(fù)制,轉(zhuǎn)基因表達**終會丟失。瞬時轉(zhuǎn)染通常用于短期研究,以研究特定基因敲入/敲入的影響。相比之下,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染在需要大規(guī)模蛋白質(zhì)生產(chǎn)的長期遺傳和藥理學(xué)研究中很有用。DNA轉(zhuǎn)染試劑價格轉(zhuǎn)染是將外源核酸送入細胞的過程,其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細胞中表達。
脂質(zhì)顆粒的加入導(dǎo)致內(nèi)體DNA釋放增加。Delgado等人通過在腎細胞中添加魚精蛋白,設(shè)法提高了固體脂質(zhì)納米顆粒的轉(zhuǎn)染效率,但與不添加魚精蛋白的對照組相比,相同的多功能單元,DNA/魚精蛋白/SLN(固體脂質(zhì)納米顆粒),降低了HEK 293細胞系(人胚胎腎細胞)的轉(zhuǎn)染效率。這給了我們希望,通過加入必要的配體的可能性,使用納米顆粒的轉(zhuǎn)染可能會調(diào)整到給定的細胞類型。Bahrami et al.經(jīng)表明,不同種類的納米顆粒以不同的方式與細胞膜結(jié)合。形成這些鍵的差異取決于它們的球形或非球形形狀,也取決于不同納米顆粒所表現(xiàn)出的各種粘附電位以及它們進入后引起的膜形狀變化。Prabha等人的實驗表明,納米顆粒的大小對COS-1(非洲綠猴腎細胞)和HEK 293細胞系的轉(zhuǎn)染效率有***影響:使用較小的納米顆粒時,轉(zhuǎn)染效率分別是使用較大納米顆粒的27倍和4倍。在兩種分散體中,小顆粒和大顆粒的細胞攝取、表面電荷和DNA釋放是相同的,這表明使用納米顆粒進行基因傳遞的效率受到許多因素的影響,它們的使用應(yīng)該根據(jù)細胞類型和應(yīng)用條件進行具體調(diào)整。此外,用作納米顆粒分散劑的不同物質(zhì),如十六種不同類型納米顆粒的豬肺表面活性劑和牛血清白蛋白,對其在溶液中的團聚有***影響。
小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評估轉(zhuǎn)染效率。這可以通過引入含有熒光素酶報告基因的質(zhì)粒來實現(xiàn),其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識別,然后允許小RNA結(jié)合以抑制熒光素酶的表達。另一方面,在RNA干擾(RNAi)研究中,小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也是必不可少的,以確定siRNA等特定小RNA對宿主細胞中特定基因表達的調(diào)節(jié)作用。小的非編碼RNA,如siRNA,以其表觀遺傳調(diào)控能力而聞名,更具體地說,是轉(zhuǎn)錄后對特定基因表達的調(diào)控。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報告系統(tǒng)相關(guān)的特定基因的質(zhì)粒DNA可以同時共轉(zhuǎn)染到靶細胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達將導(dǎo)致熒光素酶活性***降低。共轉(zhuǎn)染還可能涉及不同的小分子如miRNAs,這有助于研究小RNA對靶宿主細胞的影響。例如,如果引入miRNA模擬物可以影響特定細胞類型中特定下游基因的表達,那么預(yù)計將其抑制劑序列同時轉(zhuǎn)染到同一細胞中會降低單獨miRNA模擬物序列發(fā)揮的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用。與單一核酸類型的轉(zhuǎn)染相比,涉及將多個核酸轉(zhuǎn)移到同一細胞中的共轉(zhuǎn)染通常更多挑戰(zhàn)性更大,因為并非所有核酸類型都能有效轉(zhuǎn)移,這可能取決于轉(zhuǎn)染方法和所涉及的細胞類型。在轉(zhuǎn)染實驗中使用對照對于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。
除了mRNA疫苗,DNA疫苗也是不錯的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下,研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進了PG和PAMAM G4復(fù)合物的大小、運動性和表面電荷,然后在BALB/c小鼠中測試疫苗設(shè)計的免疫原性。根據(jù)研究結(jié)果,由于同時包裝在PG和PAMAM G4包膜中,DNA疫苗的免疫原性增加。在給予PG包被的DNA疫苗復(fù)合物的小鼠中,觀察到**強的t細胞反應(yīng),并且這些反應(yīng)明顯高于給予裸DNA組合和PAMAM 4G包被的DNA組合的動物組。影響物理轉(zhuǎn)染或機械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。中國澳門南京轉(zhuǎn)染試劑
評估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要,特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中。貴州lipo3000轉(zhuǎn)染試劑
PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當(dāng)鏈長超過20個殘基時,它可以與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn),配體在PLL上的共價附著可通過受體介導(dǎo)的途徑***增強內(nèi)吞作用。例如,涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體,在肝細胞上表達。當(dāng)ASOR共價附著在PLL上時,受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和質(zhì)粒的細胞攝取***增加。此外,與葉酸或轉(zhuǎn)鐵蛋白相關(guān)的PLL已被開發(fā)出來,并在將pDNAs轉(zhuǎn)染到*細胞中取得了實質(zhì)性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性,但轉(zhuǎn)染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明,與PLL相比,PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA,并且在相同的多陽離子/pDNA質(zhì)量比下,PLO/pDNA復(fù)合物比PLL/pDNA復(fù)合物更耐破壞。然而,由于其介導(dǎo)內(nèi)體逃逸的能力較差,帶正電的多氨基酸的轉(zhuǎn)染效率仍然很低。貴州lipo3000轉(zhuǎn)染試劑