Severinoetal.進行的研究也指出了陽離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實現(xiàn)了人動力蛋白的表達，但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細胞毒性，并導致活細胞數(shù)量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復合物和由魚精蛋白、DNA和脂質(zhì)層組成的納米顆粒在不同細胞系上的轉(zhuǎn)染效率:CHO(中國倉鼠卵巢細胞)、HEK293(人胚胎腎細胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細胞)和A17(小鼠*細胞)。魚精蛋白/DNA/脂質(zhì)納米顆粒在每種細胞系中更有效地實現(xiàn)綠色和紅色熒光蛋白的表達，即使不同細胞系對轉(zhuǎn)染的敏感性不同。陽離子脂質(zhì)的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物。不同的β-氨基酯聚合物作為納米載體，成功地將hESC(人類胚胎干細胞)的轉(zhuǎn)染效率提高了四倍，同時保持較低的細胞毒性。這給我們帶來了希望，納米顆粒能夠與具有所需官能團的其他化合物的必要添加一起形成***有效的核酸遞送平臺。PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時，它與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。貴州轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)惠

陽離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進膜融合，并有助于質(zhì)膜或核內(nèi)體的不穩(wěn)定。此外，由于陽離子脂質(zhì)相互排斥，因此需要DOPE等輔助脂質(zhì)來穩(wěn)定陽離子脂質(zhì)體（CLs）懸浮液，并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉(zhuǎn)染作用。沒有中性脂質(zhì)的脂質(zhì)體具有較低的轉(zhuǎn)染率，盡管情況并非總是如此。不同的轉(zhuǎn)染率可能是由用于配制脂質(zhì)體的陽離子:中性脂質(zhì)的不同比例引起的。如上所述，CLs介導的核酸轉(zhuǎn)移的成功取決于許多因素，這些因素可能解釋了脂質(zhì)體(脂質(zhì)體介導的轉(zhuǎn)染)的內(nèi)在變異性，特別是在體內(nèi)。廣東polyplus轉(zhuǎn)染試劑基因是陽離子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應用。

PEI的分子量對細胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。由于PEI在細胞內(nèi)不可降解，所以分子量越高，細胞毒性越強。此外，具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物，使其更容易轉(zhuǎn)染，但更難在細胞內(nèi)釋放核酸。另一方面，PEI產(chǎn)生的復合物分子量降低，更難以轉(zhuǎn)染;但它更容易釋放核酸。因此，確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實現(xiàn)的。然而，一些改進使PEI在應用中更加先進。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián)，可***降低細胞毒性并保持較高的轉(zhuǎn)染效率。通過用丙烯酸乙酯修飾胺，伯胺的乙?；?，或在聚合物結(jié)構(gòu)中引入帶負電荷的丙酸或琥珀酸基團，可以制備出各種無毒的分支PEI衍生物。由此產(chǎn)生的化學物質(zhì)在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。

此外，病毒濃度被認為是影響轉(zhuǎn)導效率的另一個因素。在Haas等人的評估中測試的其他幾個參數(shù)中，即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構(gòu)建，纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細胞的轉(zhuǎn)導培養(yǎng)基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白，只有病毒滴度似乎與病毒轉(zhuǎn)導效率直接相關。轉(zhuǎn)染介質(zhì)的條件也可能影響轉(zhuǎn)導效率。例如，在轉(zhuǎn)導過程中，使用胎牛血清比牛血清產(chǎn)生更好的轉(zhuǎn)導效率。同樣，研究表明，deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負電荷細胞之間的排斥力，并促進病毒轉(zhuǎn)導。影響化學轉(zhuǎn)染效率的因素deae-葡聚糖是一種化學修飾的葡聚糖類似物。

超聲輔助轉(zhuǎn)染涉及在宿主細胞膜上制造微小的孔，以促進核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。與前一種策略類似，超聲照射的暴露時間、脈沖數(shù)和密度也被報道與轉(zhuǎn)染效率成比例相關，直至達到閾值。超過耐受極限，細胞存活率和轉(zhuǎn)染效率可能會下降。同樣，增加核酸的數(shù)量也可以提高超聲輔助轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率。在同一項研究中，超聲轉(zhuǎn)染懸浮培養(yǎng)的人293T細胞比轉(zhuǎn)染貼壁培養(yǎng)的相同細胞類型更容易。然而，這一觀察結(jié)果與另一項研究的結(jié)果不一致，該研究報告在懸浮或單層條件下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)染大鼠細胞數(shù)量沒有***差異。值得注意的是，后一項研究還報道了單層培養(yǎng)的大鼠細胞在轉(zhuǎn)染后保持較高的細胞活力。然而，這兩項研究的不一致結(jié)果表明，超聲穿孔的比較好培養(yǎng)條件可能因使用的細胞系不同而異。在另一項研究中表明超聲轉(zhuǎn)染效率因使用的細胞類型而異，Hela和T-24細胞系的超聲轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于PC-3、U937和Meth A細胞系。因此，細胞類型的選擇是影響超聲轉(zhuǎn)染效率的另一個因素。納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細胞轉(zhuǎn)染。黑龍江轉(zhuǎn)染試劑試用

人類原代干細胞是另一種公認的難以轉(zhuǎn)染的細胞類型，轉(zhuǎn)染這種細胞類型的挑戰(zhàn)仍然是效率低和細胞活力低。貴州轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)惠

作為一般指導原則，建議使用早期傳代的細胞以獲得良好的轉(zhuǎn)染效率，特別是涉及原代或干細胞的轉(zhuǎn)染。另一個有趣的觀察結(jié)果是，37℃是可以幫助原代細胞達到更高轉(zhuǎn)染效率的比較好培養(yǎng)溫度。這種現(xiàn)象可能是因為37攝氏度是哺乳動物細胞的比較好培養(yǎng)溫度。同時，在轉(zhuǎn)染原代細胞時，化學轉(zhuǎn)染似乎不如病毒和物理轉(zhuǎn)染有吸引力，尤其是在人類原代干細胞中。當在相似條件下使用相同的轉(zhuǎn)染試劑進行轉(zhuǎn)染時，細胞系的來源(如人類與動物細胞系)也可能有助于不同程度的效率。在一項涉及轉(zhuǎn)染人類和大鼠平滑肌細胞的研究中，大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染大鼠平滑肌細胞(α-10SMCs)方面的效率高于轉(zhuǎn)染人主動脈平滑肌細胞(HASMCs)。貴州轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)惠