熒光染料標(biāo)記蛋白或肽技術(shù)是一種常見(jiàn)的蛋白質(zhì)體外標(biāo)記技術(shù)。除了GFP等熒光蛋白的融合表達(dá)外，目標(biāo)蛋白還可以通過(guò)熒光染料標(biāo)記直接進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)操作，如***跟蹤、細(xì)胞分選等。

FITC熒光標(biāo)記的原理是什么？

熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材料是指具有共軛雙鍵系統(tǒng)化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物。當(dāng)受到紫外線或藍(lán)紫光的照射時(shí)，它可以被刺激為刺激狀態(tài)。當(dāng)激發(fā)狀態(tài)恢復(fù)到基本狀態(tài)時(shí)，它會(huì)發(fā)出熒光。蛋白質(zhì)熒光標(biāo)記技術(shù)利用熒光材料的共價(jià)結(jié)合在目標(biāo)分子的基團(tuán)上，利用其熒光特性提供研究對(duì)象的信息。 羰花青染料用作 Di 來(lái)標(biāo)記細(xì)胞、細(xì)胞器、脂質(zhì)體、病毒和脂蛋白。黑龍江鄭州熒光染料

三、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)D-熒光素鉀鹽體外生物發(fā)光試驗(yàn)：D-熒光素鉀鹽，無(wú)菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配制）1、貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板中孵育數(shù)小時(shí)或過(guò)夜，使細(xì)胞貼壁。懸浮細(xì)胞：可以將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板后直接進(jìn)行后續(xù)操作，無(wú)需孵育。如果倍增時(shí)間相對(duì)較短，則應(yīng)考慮倍增時(shí)間進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。2、將15mg熒光素鉀鹽溶解于1ml無(wú)菌水中，制備成100X熒光素儲(chǔ)備液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動(dòng)至熒光素鉀鹽完全溶解。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。3、用預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)基1∶100稀釋100X熒光素儲(chǔ)備液（15mg/ml），配制成熒光素工作液（終濃度150μg/ml），即配即用。4、去除培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基。5、在成像前，將適量熒光素工作液加入細(xì)胞中，然后進(jìn)行圖像分析。注意：成像前在37℃下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行短時(shí)間孵育可增強(qiáng)信號(hào)。孵育時(shí)間取決于特定的細(xì)胞類型。一般來(lái)說(shuō)孵育10分鐘就足夠了，根據(jù)需要進(jìn)行測(cè)試和調(diào)整。6、每隔10分鐘，**多40分鐘，使用VILBERFUSIONFX成像系統(tǒng)檢查體外生物發(fā)光，確定動(dòng)力學(xué)曲線并找出細(xì)胞的峰值成像時(shí)間點(diǎn)新疆熒光染料Cy5PI是一種可對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。

注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定比較高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。保存和操作的過(guò)程中都要避光。另外水溶性儲(chǔ)存液過(guò)濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。如果有條件，對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸€(wěn)定性和保存時(shí)間更長(zhǎng)。 注射方式，動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定比較好信號(hào)平臺(tái)期和比較好的檢測(cè)時(shí)間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒(méi)有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來(lái)看，鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽，尤其是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。兩者功效相同。 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

熒光標(biāo)記技術(shù)是指運(yùn)用熒光染料與待研究對(duì)象結(jié)合，利用它的熒光特性，提供待研究對(duì)象相關(guān)信息。熒光標(biāo)記具有操作簡(jiǎn)便、高穩(wěn)定性、高靈敏度等優(yōu)勢(shì)，使熒光染料在生命科學(xué)研究中應(yīng)用，包括：標(biāo)記活細(xì)胞或固定細(xì)胞中的蛋白質(zhì)、多肽；作為功能性指示劑表征細(xì)胞健康狀況；設(shè)計(jì)各種熒光探針，尋找特定蛋白或藥物靶點(diǎn)。應(yīng)用分類：多肽、蛋白、抗體標(biāo)記：氨基標(biāo)記、巰基標(biāo)記、羧基標(biāo)記；***成像：水溶性/脂溶性熒光染料、近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料南京星葉生物科技有限公司提供不同用途的熒光染料，了解更多（包括但不限于）

DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于細(xì)胞核染色，可將細(xì)胞核染成藍(lán)色。

與花青和羅丹明染料一樣，熒光素也是一種有機(jī)染料。熒光素的比較大吸收波長(zhǎng)為494nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)為521nm（通常吸收藍(lán)色范圍內(nèi)的光并發(fā)射綠色范圍內(nèi)的光），熒光素是一種高熒光物質(zhì)。即使在非常少量的情況下也可以檢測(cè)到它，并且在與抗體結(jié)合時(shí)用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣，熒光素價(jià)格低廉且易于使用，使其成為生物學(xué)研究中很受歡迎的染料之一。與大多數(shù)其他染料不同，熒光素在水溶液中是無(wú)毒的。因此，它是極少數(shù)用作地下水示蹤劑的染料之一。吲哚菁綠（Indocyanine Green，簡(jiǎn)稱ICG）是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料。中國(guó)澳門南京熒光染料

CY7 是一種 CY 染料。CY 為花菁 (Cyanine) 的縮寫，是由奇數(shù)個(gè)甲基單元連接的兩個(gè)氮原子組成的化合物。黑龍江鄭州熒光染料

FITC熒光標(biāo)記蛋白的應(yīng)用及特點(diǎn):活性熒光染料，如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、羅丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料，可用于標(biāo)記抗體或蛋白質(zhì)功能基團(tuán)，生成分子探針，并通過(guò)熒光成像進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)用熒光染料化學(xué)標(biāo)記特異性抗體或其他純化生物分子時(shí)，它們成為用于檢測(cè)靶抗原或相互作用配偶體的熒光探針，用于細(xì)胞成像、流式細(xì)胞手術(shù)、蛋白質(zhì)痕跡和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。由于熒光標(biāo)記物具有無(wú)放射物污染、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，在蛋白質(zhì)功能研究、藥物篩選等許多研究領(lǐng)域得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。

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且Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同） 黑龍江鄭州熒光染料