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5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料,具有廣泛的應(yīng)用,作為抗體和其他探針標(biāo)記,用熒光顯微鏡,流式細(xì)胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實(shí)驗(yàn)。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性,是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中生物檢測(cè)**常用的熒光標(biāo)記之一。**常用的熒光素包括用于標(biāo)記蛋白質(zhì)(特別是抗體)的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)],5-FITC和用于標(biāo)記肽和寡核苷酸的羧基熒光素(5-FAM和5(6)-FAM)。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物,以及一系列具有針對(duì)細(xì)胞標(biāo)記和檢測(cè)優(yōu)化的特性的質(zhì)量iFluor?熒光標(biāo)記染料。D-熒光素(D-Luciferin)是螢火熒光素酶底物,其量子效率為0.88,是Luminol的20倍。湖北ivis熒光染料
過(guò)標(biāo)記——計(jì)算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標(biāo)記的熒光團(tuán)大于10mol。雖然過(guò)標(biāo)記的蛋白也可以使用,但可能會(huì)引起蛋白的聚集、降低抗體結(jié)合抗原的特異性,這些都會(huì)造成非特異性結(jié)合。過(guò)標(biāo)記還會(huì)引起熒光淬滅。可以增加蛋白或減少反應(yīng)時(shí)間。3.未結(jié)合染料難以去除——盡管大部分時(shí)候用分離柱可以較好的純化蛋白偶聯(lián)物,但仍可能會(huì)有痕量的游離染料留在偶聯(lián)物溶液中,會(huì)使標(biāo)記計(jì)算的值偏高。可用分離柱再次分離或透析去除。4.蛋白或蛋白偶聯(lián)物無(wú)法洗脫——不要再加緩沖液,只需再次離心一次或幾次。中國(guó)澳門(mén)熒光染料DIDCy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖稀?/p>
在熒光顯微術(shù)中,不僅蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)感興趣,而且對(duì)核酸也感興趣。有時(shí)有必要通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞核來(lái)確定細(xì)胞的確切位置或數(shù)量。最常見(jiàn)的DNA染色劑之一是DAPI(4',6-二氨基-2-苯基吲哚),主要與DNA雙螺旋富含A-T的區(qū)域結(jié)合。與未結(jié)合態(tài)相比,DAPI在DNA上的熒光強(qiáng)度增加。染料被UV(紫外線)光激發(fā),比較大激發(fā)波長(zhǎng)為358nm。發(fā)射光譜較寬,峰值在461nm。弱熒光也可以檢測(cè)到RNA結(jié)合。在這種情況下,發(fā)射轉(zhuǎn)移到500nm。有趣的是,DAPI能夠滲透完整的細(xì)胞膜。因此,該染料既可用于固定細(xì)胞也可用于活細(xì)胞。
SuperFluor活化酯(與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同)SuperFlour系列熒光探針,具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度,更廣的pH應(yīng)用范圍(pH4~10),更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等熒光染料。1.標(biāo)記效率低——計(jì)算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標(biāo)記的熒光團(tuán)少于4mol有以下原因:1)緩沖液中含有痕量伯銨成分,與染料反應(yīng)降低了標(biāo)記效率。如果蛋白已經(jīng)溶于含氨基的緩沖液(如Tris或氨基乙酸),標(biāo)記前用PBS透析。2)蛋白含量較低(≤1mg/mL)會(huì)影響標(biāo)記效率。3)標(biāo)記步驟中加入碳酸氫鈉的作用是將反應(yīng)混合物的pH升高至~8,因?yàn)樵谌鯄A性環(huán)境中標(biāo)記反應(yīng)的效率比較高。如果蛋白溶液的緩沖范圍在低pH,加入重碳酸鹽也無(wú)法將pH調(diào)節(jié)至**適水平。要么加大重碳酸鹽的量,要么將緩沖液換成PBS,或用0.1M碳酸氫鈉透析等。4)研究顯示pH升至9.0~9.4,標(biāo)記效率和標(biāo)記速度(只需10min)明顯改善。5)不同抗體與熒光團(tuán)的反應(yīng)速率不同,染料標(biāo)記后保留的生物活性程度也不同,因此標(biāo)準(zhǔn)步驟也不是總有比較好的標(biāo)記結(jié)果。為增加標(biāo)記率,可以對(duì)同一樣品進(jìn)行再標(biāo)記,或減少蛋白的量加大染料的量重新標(biāo)記。有研究者在室溫孵育1小時(shí)后再4℃孵育過(guò)夜,情況有所改善。D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物,可催化螢火蟲(chóng)產(chǎn)生典型的黃綠色光。
小動(dòng)物***成像技術(shù)(invivoimagingtechnology)是利用高靈敏度的光學(xué)檢測(cè)儀器直接檢測(cè)動(dòng)物***體內(nèi)的細(xì)胞活動(dòng)和基因行為研究的一類(lèi)技術(shù),是近年來(lái)發(fā)展**快的生命科學(xué)研究方法,是**直接觀察細(xì)胞和分子在體內(nèi)行為的新興技術(shù),已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域[1]。***動(dòng)物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是利用熒光素酶報(bào)告基因在***內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。而熒光發(fā)光成像技術(shù)是將熒光物質(zhì)或熒光物質(zhì)標(biāo)記的小分子物質(zhì)如基因、細(xì)胞也可是小分子藥物、抗體、納米材料等導(dǎo)入到***體內(nèi),通過(guò)小動(dòng)物***成像系統(tǒng)的激發(fā)光源激發(fā)熒光集團(tuán)到達(dá)高能量狀態(tài),而后產(chǎn)生波長(zhǎng)較激發(fā)光長(zhǎng)的發(fā)射光,然后通過(guò)高靈敏度制冷CCD鏡頭探測(cè)到***內(nèi)的發(fā)射光。通過(guò)***成像技術(shù)可以觀測(cè)***動(dòng)物體內(nèi)**的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移、炎癥的發(fā)生、特定基因的表達(dá)和藥物作用效果等生物學(xué)過(guò)程。DiD,DiO,DiI,DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料,可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。寧夏光聲熒光染料
CY7 是一種 CY 染料。CY 為花菁 (Cyanine) 的縮寫(xiě),是由奇數(shù)個(gè)甲基單元連接的兩個(gè)氮原子組成的化合物。湖北ivis熒光染料
光熱***是另一個(gè)吲哚菁綠的重要應(yīng)用領(lǐng)域。在光熱***中,吲哚菁綠可以被引入**組織,并在近紅外激光的照射下吸收光能轉(zhuǎn)化為熱能,從而使**組織受到熱損傷,達(dá)到***的效果。吲哚菁綠的熒光性質(zhì)使得其在光熱***中具有很高的選擇性,可以精確地破壞**組織而對(duì)正常組織幾乎沒(méi)有影響。這種精細(xì)的***方式有助于減少***的副作用,提高***效果。吲哚菁綠在生物識(shí)別和藥物輸送方面也有廣泛的應(yīng)用。在生物識(shí)別中,吲哚菁綠可以與特定的生物分子結(jié)合,通過(guò)檢測(cè)其熒光信號(hào)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)這些生物分子的定量分析。這種技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究、藥物篩選和疾病診斷中具有重要的意義。另外,吲哚菁綠還可以作為藥物輸送系統(tǒng)的一部分,將藥物包裹在其分子結(jié)構(gòu)中,并通過(guò)光***釋放藥物,實(shí)現(xiàn)對(duì)疾病靶點(diǎn)的精確***。吲哚菁綠作為一種具有優(yōu)良綠色溶解度的熒光染料,在醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。它的應(yīng)用領(lǐng)域涉及醫(yī)學(xué)影像學(xué)、光熱***、生物識(shí)別和藥物輸送等方面,并且具有較高的選擇性和精細(xì)性。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步,相信吲哚菁綠將在未來(lái)更***地應(yīng)用于臨床實(shí)踐中,為人類(lèi)的健康和醫(yī)學(xué)科研做出更大的貢獻(xiàn)。湖北ivis熒光染料