FITC熒光標(biāo)記蛋白的應(yīng)用及特點(diǎn):活性熒光染料，如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、羅丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料，可用于標(biāo)記抗體或蛋白質(zhì)功能基團(tuán)，生成分子探針，并通過熒光成像進(jìn)行檢測。當(dāng)用熒光染料化學(xué)標(biāo)記特異性抗體或其他純化生物分子時(shí)，它們成為用于檢測靶抗原或相互作用配偶體的熒光探針，用于細(xì)胞成像、流式細(xì)胞手術(shù)、蛋白質(zhì)痕跡和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。由于熒光標(biāo)記物具有無放射物污染、操作簡單等優(yōu)點(diǎn)，在蛋白質(zhì)功能研究、藥物篩選等許多研究領(lǐng)域得到了越來越廣泛的應(yīng)用。

南京星葉生物科技有限公司Super Fluor 系列（效果同Alexa Fluor系列）

且Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同） Super Fluor 555（效果同Alexa Fluor 555）琥珀酰亞胺酯熒光染料。內(nèi)蒙古熒光染料DAPI

管可用于實(shí)驗(yàn)室的熒光團(tuán)數(shù)量眾多，但這些染料通常屬于以下三組之一：熒光染料:這些是用于在體外標(biāo)記生物相關(guān)分子的小型有機(jī)天然或合成熒光分子。該組中的一些熒光染料包括熒光素、溴化乙錠和花青。熒光蛋白:這些是較大的、生物制造的蛋白質(zhì)，由于它們的大分子結(jié)構(gòu)而發(fā)出熒光。GFP、RFP和YFP是屬于該組的一些染料。量子點(diǎn):這些高熒光合成納米晶體由半導(dǎo)體材料制成。隨著熒光基本特性的廣泛應(yīng)用和該領(lǐng)域的顯著進(jìn)步，已經(jīng)針對特定應(yīng)用和儀器開發(fā)和優(yōu)化了數(shù)百種活性熒光染料。同樣，多年來，大量復(fù)雜的熒光技術(shù)（例如，F(xiàn)RET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS）也在不斷發(fā)展。光敏劑熒光染料Cy3吲哚菁綠在生物識別和藥物輸送方面也有廣泛的應(yīng)用。

納米粒子納米顆粒是指尺寸在1到100納米之間的顆粒。由于它們的小尺寸，納米粒子通常用于不同類型的細(xì)胞和組織的熒光成像。當(dāng)今生物成像中常用的一些納米材料包括碳點(diǎn)、貴金屬納米顆粒、聚合物點(diǎn)、量子點(diǎn)和熒光摻雜二氧化硅等。在成像中，與其他分子熒光團(tuán)和探針相比，納米顆粒/納米材料具有多種優(yōu)勢，使其成為理想的選擇。除了提高亮度外，納米粒子是惰性的并且往往分布均勻，這有助于在成像過程中獲得更好的結(jié)果。此外，與各種分子熒光團(tuán)相比，納米顆粒和納米材料沒有細(xì)胞毒性，并且不受非特異性結(jié)合問題的影響。由于這些特性，大多數(shù)熒光納米顆粒（染色納米顆粒）可以內(nèi)化到細(xì)胞/組織中，并容易靶向給定部位。

羰花青染料***用作Di來標(biāo)記細(xì)胞、細(xì)胞器、脂質(zhì)體、病毒和脂蛋白。長鏈羰花青包括DiO(DiOC18(3))、DiI(DiIC18(3))、DiD(DiIC18(5))和DiR，以及二烷基氨基苯乙烯基染料DiA(4-Di-16-ASP)用于標(biāo)記膜和其他疏水結(jié)構(gòu)。DiIC16(3)具有比DiI(C18)更短的烷基取代基(C16)。它們在脂質(zhì)環(huán)境中具有極高的消光系數(shù)、環(huán)境依賴性熒光和短的激發(fā)態(tài)壽命。它們在室溫下是油狀物，在水中發(fā)出微弱熒光，但當(dāng)摻入膜中或與親脂性生物分子結(jié)合時(shí)，它們發(fā)出高熒光且相當(dāng)耐光。這些光學(xué)特性使它們成為細(xì)胞質(zhì)膜染色的理想選擇。一旦應(yīng)用于細(xì)胞，這些染料就會(huì)在質(zhì)膜內(nèi)橫向擴(kuò)散，導(dǎo)致整個(gè)細(xì)胞染色[1]。DiO、DiI、DiD和DiR呈現(xiàn)出不同的綠色、橙色、紅色和紅外熒光，從而促進(jìn)活細(xì)胞的多色成像和流式細(xì)胞術(shù)分析。DiO和DiI可分別與標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC過濾器一起使用。其中DiI及其類似物是**常用的，因?yàn)樗鼈兺ǔ１憩F(xiàn)出非常低的細(xì)胞毒性。此外，DiI***用于測定LDL和HDL等脂蛋白。親脂性氨基苯乙烯基染料DiA也常用于神經(jīng)元示蹤[2]。熒光素衍生物具有高吸收率優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中常用的熒光標(biāo)記之一。

過標(biāo)記——計(jì)算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標(biāo)記的熒光團(tuán)大于10mol。雖然過標(biāo)記的蛋白也可以使用，但可能會(huì)引起蛋白的聚集、降低抗體結(jié)合抗原的特異性，這些都會(huì)造成非特異性結(jié)合。過標(biāo)記還會(huì)引起熒光淬滅?？梢栽黾拥鞍谆驕p少反應(yīng)時(shí)間。3．未結(jié)合染料難以去除——盡管大部分時(shí)候用分離柱可以較好的純化蛋白偶聯(lián)物，但仍可能會(huì)有痕量的游離染料留在偶聯(lián)物溶液中，會(huì)使標(biāo)記計(jì)算的值偏高?？捎梅蛛x柱再次分離或透析去除。4．蛋白或蛋白偶聯(lián)物無法洗脫——不要再加緩沖液，只需再次離心一次或幾次。吲哚菁綠（Indocyanine Green，簡稱ICG）是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料。光敏劑熒光染料Cy3

DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織，在小動(dòng)物成像中用來示蹤。內(nèi)蒙古熒光染料DAPI

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱)結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度***增強(qiáng)。它們具有很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中，這種染料會(huì)在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，導(dǎo)致在其比較好濃度條件下，將整個(gè)細(xì)胞染色。它們不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI可以分別與標(biāo)準(zhǔn)的FITC和TRITC濾光器一同使用。其中，DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā)，并且具有比DiI更長的激發(fā)和發(fā)射光波長，為標(biāo)記細(xì)胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常***的替代品。DiR在***成像或者示蹤中非常有用，因?yàn)樗鼈兯l(fā)射的紅外光可以高效地穿過細(xì)胞和組織，并且在紅外光范圍內(nèi)，其本底熒光水平很低。內(nèi)蒙古熒光染料DAPI