人類(lèi)原代干細(xì)胞是另一種公認(rèn)的難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類(lèi)型，轉(zhuǎn)染這種細(xì)胞類(lèi)型的比較大挑戰(zhàn)仍然是效率低和細(xì)胞活力低。2015年，王等報(bào)道了Lipofectamine 2000和XtremeGENE HP等轉(zhuǎn)染試劑在人牙周韌帶干細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率非常低(<6%)，而陽(yáng)性對(duì)照慢病毒載體的轉(zhuǎn)染效率約為95%。與同一研究中采用的磁輔助轉(zhuǎn)染技術(shù)相比，后者表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)染效率(～11%)和更低的毒性。在另一項(xiàng)涉及人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBM-MSC)的研究中，Lipofectamine LTX被證明比TransIT-2020、Lipofectamine 3000和聚乙烯亞胺(PEI)等其他試劑產(chǎn)生比較好的轉(zhuǎn)染效率(至少高出三倍)，但細(xì)胞存活率較低(<50%)。相比之下，使用TransIT-2020試劑可能會(huì)獲得更好的結(jié)果，該試劑的效率約為30%，細(xì)胞回收率高達(dá)90%，細(xì)胞干性約為95%。另一個(gè)難以轉(zhuǎn)染干細(xì)胞的例子是誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)。在一項(xiàng)比較轉(zhuǎn)染人類(lèi)ipsc衍生心肌細(xì)胞(hiPSC-CMSs)的不同非病毒方法的研究中，與其他試劑(Lipofectamine 3000、Lipofectamine 2000和基于pei的非脂質(zhì)體試劑TransporterTM5和PEI25)相比，Lipofectamine STEM顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率(高達(dá)32%)，其效率低于20%?；诓《镜霓D(zhuǎn)染，或者更具體地稱(chēng)為轉(zhuǎn)導(dǎo)，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細(xì)胞。小鼠轉(zhuǎn)染試劑定做

陽(yáng)離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進(jìn)膜融合，并有助于質(zhì)膜或核內(nèi)體的不穩(wěn)定。此外，由于陽(yáng)離子脂質(zhì)相互排斥，因此需要DOPE等輔助脂質(zhì)來(lái)穩(wěn)定陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）懸浮液，并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹(shù)狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉(zhuǎn)染作用。沒(méi)有中性脂質(zhì)的脂質(zhì)體具有較低的轉(zhuǎn)染率，盡管情況并非總是如此。不同的轉(zhuǎn)染率可能是由用于配制脂質(zhì)體的陽(yáng)離子:中性脂質(zhì)的不同比例引起的。如上所述，CLs介導(dǎo)的核酸轉(zhuǎn)移的成功取決于許多因素，這些因素可能解釋了脂質(zhì)體(脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染)的內(nèi)在變異性，特別是在體內(nèi)。西藏轉(zhuǎn)染試劑指導(dǎo)肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強(qiáng)烈的毒性反應(yīng)，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。

納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染，但似乎找到一種既能改善基因表達(dá)又不影響細(xì)胞、不對(duì)細(xì)胞造成損害的比較好技術(shù)也至關(guān)重要。納米顆粒參與內(nèi)皮運(yùn)輸?shù)哪芰κ蛊淠軌蚓脑O(shè)計(jì)**精確的方法，將基因結(jié)構(gòu)靶向到特定的作用位置。來(lái)自不同化合物和元素的納米顆粒的作用方式與轉(zhuǎn)染的非病毒載體相同，這使它們能夠通過(guò)內(nèi)吞作用將DNA運(yùn)輸過(guò)細(xì)胞膜。DNA被包裹起來(lái)，很容易從核內(nèi)體中釋放出來(lái)，也被核酸酶保護(hù)著不被消化。由于有許多不同種類(lèi)的納米顆粒，找到**適合轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞的納米顆粒是至關(guān)重要的。將納米顆粒與其他化合物連接成多功能、復(fù)雜的運(yùn)輸單元，可以提高穿越細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)男省⒌鞍踪|(zhì)或多肽結(jié)合到納米顆粒上，根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型的不同，轉(zhuǎn)染效率提高了5到10倍。

質(zhì)子泵抑制劑可以通過(guò)基于從一個(gè)供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測(cè)量來(lái)評(píng)估，也可以通過(guò)化學(xué)測(cè)量來(lái)評(píng)估，在化學(xué)測(cè)量中，表達(dá)的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時(shí)通過(guò)適當(dāng)?shù)膱?bào)告系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)。后一種基于熒光素酶的方法被稱(chēng)為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個(gè)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細(xì)胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進(jìn)行基因組編輯。除了使用多個(gè)質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細(xì)胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達(dá)兩種不同基因的載體，通過(guò)一個(gè)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)連接，只有一個(gè)啟動(dòng)子。流式細(xì)胞術(shù)可以更精確地定量表達(dá)特定熒光基因的細(xì)胞，以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。

在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中使用對(duì)照對(duì)于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。通常，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和寡核苷酸轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)都需要陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、未轉(zhuǎn)染對(duì)照和模擬轉(zhuǎn)染對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照是先前已被證明對(duì)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生已知影響的DNA或RNA，例如影響特定下游遺傳靶點(diǎn)的表達(dá)。在轉(zhuǎn)染工作的初始階段，需要一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照來(lái)建立一個(gè)優(yōu)化的轉(zhuǎn)染方案，之后，陽(yáng)性對(duì)照可以作為參考，與實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行比較。另一方面，陰性對(duì)照用于確認(rèn)宿主細(xì)胞中預(yù)期的基因表達(dá)變化是否歸因于轉(zhuǎn)染而不是其他原因。在質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染中，陰性對(duì)照可以是缺乏DNA和轉(zhuǎn)染載體的反應(yīng)，或者兩者都沒(méi)有，只有宿主細(xì)胞。在小RNA轉(zhuǎn)染中，陰性對(duì)照包含一個(gè)非同源序列，該序列通常是一個(gè)與靶序列具有相同核苷酸長(zhǎng)度和組成但與任何已知哺乳動(dòng)物基因不同源的打亂序列。未轉(zhuǎn)染的對(duì)照包括不含轉(zhuǎn)染試劑和核酸的細(xì)胞培養(yǎng)，作為宿主細(xì)胞基本信息的對(duì)照，包括活力、表型，更重要的是，不受轉(zhuǎn)染影響的靶基因的基線表達(dá)水平。模擬轉(zhuǎn)染是指不含遺傳靶標(biāo)或核酸的轉(zhuǎn)染，可以評(píng)估轉(zhuǎn)染試劑(如背景自熒光噪聲)產(chǎn)生的影響。在質(zhì)粒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，推薦使用空質(zhì)粒對(duì)照作為模擬轉(zhuǎn)染對(duì)照?；瘜W(xué)轉(zhuǎn)染的效率可能取決于幾個(gè)因素，如使用的試劑類(lèi)型、靶細(xì)胞的來(lái)源和性質(zhì)，以及選擇的DNA與試劑比例。高分子轉(zhuǎn)染試劑幫轉(zhuǎn)染

利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。小鼠轉(zhuǎn)染試劑定做

化學(xué)轉(zhuǎn)染的效率在很大程度上取決于幾個(gè)因素，如使用的試劑類(lèi)型、靶細(xì)胞的來(lái)源和性質(zhì)，以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸，并將其靶標(biāo)傳遞給非分裂細(xì)胞和分裂細(xì)胞，因此在基因***中非常有用。有幾個(gè)因素已被證明可能影響病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率，如靶細(xì)胞類(lèi)型、使用的啟動(dòng)子類(lèi)型、載體濃度和使用的轉(zhuǎn)導(dǎo)介質(zhì)條件。在一項(xiàng)評(píng)估使用人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進(jìn)行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的體外研究中，觀察到這兩種病毒在來(lái)自人類(lèi)、倉(cāng)鼠、貓、狗、馬和豬的不同細(xì)胞系上的不同程度的效率。在大多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型上，使用HIV的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率普遍優(yōu)于EIAV，而這兩種病毒對(duì)嚙齒動(dòng)物細(xì)胞的***性較弱。在同一項(xiàng)研究中，啟動(dòng)子的類(lèi)型也被認(rèn)為是可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的一個(gè)因素，因此含有替代CMV啟動(dòng)子的內(nèi)部啟動(dòng)子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細(xì)胞上表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。小鼠轉(zhuǎn)染試劑定做