與花青和羅丹明染料一樣，熒光素也是一種有機(jī)染料。熒光素的比較大吸收波長(zhǎng)為494nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)為521nm（通常吸收藍(lán)色范圍內(nèi)的光并發(fā)射綠色范圍內(nèi)的光），熒光素是一種高熒光物質(zhì)。即使在非常少量的情況下也可以檢測(cè)到它，并且在與抗體結(jié)合時(shí)用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣，熒光素價(jià)格低廉且易于使用，使其成為生物學(xué)研究中很受歡迎的染料之一。與大多數(shù)其他染料不同，熒光素在水溶液中是無毒的。因此，它是極少數(shù)用作地下水示蹤劑的染料之一。DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。水溶熒光染料Cy7

SuperFluor活化酯（與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同）SuperFlour系列熒光探針，具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，更廣的pH應(yīng)用范圍（pH4～10）,更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等熒光染料。1．標(biāo)記效率低——計(jì)算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標(biāo)記的熒光團(tuán)少于4mol有以下原因：1）緩沖液中含有痕量伯銨成分，與染料反應(yīng)降低了標(biāo)記效率。如果蛋白已經(jīng)溶于含氨基的緩沖液（如Tris或氨基乙酸），標(biāo)記前用PBS透析。2）蛋白含量較低(≤1mg/mL)會(huì)影響標(biāo)記效率。3）標(biāo)記步驟中加入碳酸氫鈉的作用是將反應(yīng)混合物的pH升高至～8，因?yàn)樵谌鯄A性環(huán)境中標(biāo)記反應(yīng)的效率比較高。如果蛋白溶液的緩沖范圍在低pH，加入重碳酸鹽也無法將pH調(diào)節(jié)至**適水平。要么加大重碳酸鹽的量，要么將緩沖液換成PBS，或用0.1M碳酸氫鈉透析等。4）研究顯示pH升至9.0～9.4，標(biāo)記效率和標(biāo)記速度（只需10min）明顯改善。5）不同抗體與熒光團(tuán)的反應(yīng)速率不同，染料標(biāo)記后保留的生物活性程度也不同，因此標(biāo)準(zhǔn)步驟也不是總有比較好的標(biāo)記結(jié)果。為增加標(biāo)記率，可以對(duì)同一樣品進(jìn)行再標(biāo)記，或減少蛋白的量加大染料的量重新標(biāo)記。有研究者在室溫孵育1小時(shí)后再4℃孵育過夜，情況有所改善。抗體熒光染料脂質(zhì)熒光染料，由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測(cè)標(biāo)記，其應(yīng)用于熒光探針，細(xì)胞染色等。

注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定比較高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲(chǔ)存液過濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。如果有條件，對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸?，穩(wěn)定性和保存時(shí)間更長(zhǎng)。 注射方式，動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定比較好信號(hào)平臺(tái)期和比較好的檢測(cè)時(shí)間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來看，鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽，尤其是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。兩者功效相同。 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

過標(biāo)記——計(jì)算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標(biāo)記的熒光團(tuán)大于10mol。雖然過標(biāo)記的蛋白也可以使用，但可能會(huì)引起蛋白的聚集、降低抗體結(jié)合抗原的特異性，這些都會(huì)造成非特異性結(jié)合。過標(biāo)記還會(huì)引起熒光淬滅?？梢栽黾拥鞍谆驕p少反應(yīng)時(shí)間。3．未結(jié)合染料難以去除——盡管大部分時(shí)候用分離柱可以較好的純化蛋白偶聯(lián)物，但仍可能會(huì)有痕量的游離染料留在偶聯(lián)物溶液中，會(huì)使標(biāo)記計(jì)算的值偏高?？捎梅蛛x柱再次分離或透析去除。4．蛋白或蛋白偶聯(lián)物無法洗脫——不要再加緩沖液，只需再次離心一次或幾次。羰花青染料用作 Di 來標(biāo)記細(xì)胞、細(xì)胞器、脂質(zhì)體、病毒和脂蛋白。

一種發(fā)光雜環(huán)化合物，存在于生物發(fā)光的生物體中，如螢火蟲。在含有三磷酸腺苷的情況下，通過熒光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光。可用于熒光素酶生物發(fā)光成像和細(xì)胞高通量篩選應(yīng)用。D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。反應(yīng)原理：首先，在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng)，接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測(cè)定細(xì)胞活力以及細(xì)菌計(jì)數(shù)。它還用于報(bào)告基因檢測(cè)?？膳c小動(dòng)物***成像系統(tǒng)配套使用，用于標(biāo)記LUC基因后的體內(nèi)***熒光檢測(cè)。D-熒光素游離酸（D-Luciferin,freeacid）、D-熒光素鉀鹽（D-Luciferin,potassiumsalt）和D-熒光素鈉鹽（D-Luciferin,sodiumsalt），鉀鹽、鈉鹽的形式是**通用的，因?yàn)樗鼈兌家兹苡谒?。鉀鹽也是***動(dòng)物檢測(cè)使用的主要形式。它們的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為328nm和533nm。D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。抗體熒光染料脂質(zhì)

脂溶性熒光染料cy3、cy5、cy7等。水溶熒光染料Cy7

SUPERGreenI（10,000×DMSO溶液，電泳級(jí)）儲(chǔ)存條件及注意事項(xiàng)4℃避光可保存12個(gè)月。本品用DMSO溶解，因DMSO的熔點(diǎn)是18.5℃，使用前請(qǐng)放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點(diǎn)●無毒性：屬花菁類染料，容易生物降解，無致*毒性?！耢`敏度高：至少可檢出20pgDNA，高于EB染色法25～100倍。●信噪比高：樣品熒光信號(hào)強(qiáng)，背景信號(hào)低。●操作簡(jiǎn)單：無須脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察?！襁m用范圍廣：可適用于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場(chǎng)凝膠電泳和毛細(xì)管電泳等?！袷褂梅奖悖簩?duì)分子生物學(xué)中常用的酶（如：Taq酶、反轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用?！窠?jīng)濟(jì)：價(jià)格比銀染便宜。水溶熒光染料Cy7