1.DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細胞膜染色液制備（1）配置DMSO或EtOH儲存液：儲存液用DMSO或EtOH配置濃度1～5mM。注意：未使用的儲存液保存在-20°C，避免反復凍融。（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5μM的工作液。注意：工作液的**終濃度是根據不同細胞和實驗的經驗來配制。可以從推薦濃度的十倍以上尋找比較好條件。

2.懸浮細胞染色（1）懸浮細胞密度為1×106/mL加入到工作液中。（2）在37℃培養(yǎng)細胞2～20分鐘，不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同。（3）染色細胞試管在1000～1500轉離心5分鐘。（4）傾倒上清液，再次緩慢加入預溫37℃的培養(yǎng)液。（5）重復（3），（4）步驟兩次以上。 南京星葉生物熒光染料標記蛋白。遼寧南京熒光染料

熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后，能把短波長的光轉變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復合熒光染料使用。其中復合熒光染料是利用熒光共振能量轉移技術合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復合染料在受體分子的激發(fā)波長被激發(fā)，在供體分子的發(fā)射波長發(fā)射一個光子。熒光染料發(fā)展非常迅速，已開發(fā)的用于科研和臨床應用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。顯微鏡熒光染料DAPID-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發(fā)光生物體中。

蛋白熒光標記技術是目前**為常見的蛋白體外標記技術，利用級聯(lián)放大反應原理，將極度敏感性且易于檢測的熒光素通過某個基團吸附或共價結合后，標記到特異性抗原或抗體分子上，應用熒光顯微鏡觀察熒光標記物因增強放大效應而產生顏色、光譜等變化，以分析示蹤相應抗體或抗原性質與含量的方法。該技術在具有高度精確性的熒光顯微鏡下，借助高度靈敏性的熒光檢測，在各種生物過程中對目的蛋白進行可視化，從而通過抗原抗體高度特異性免疫定量表達或在細胞研究中定位。蛋白熒光標記已成為研究蛋白質互作、酶活性、***示蹤以及細胞分選重要工具。蛋白標記常用熒光染料隨著蛋白熒光標記技術不斷發(fā)展，各類熒光素廣泛應用于生物實驗中，目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。南京星葉生物科技有限公司提供多種性價比高的各類活化熒光素，其熒光染料覆蓋波長范圍從350nm到790nm，例如Cy系列、SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）等，用于標記抗體、多肽以及蛋白功能基團，繼而生成分子探針，通過熒光成像進行相應檢測。

CY5熒光染料是一種被廣泛應用于生物分子檢測和熒光成像等領域的高效、穩(wěn)定的熒光標記試劑。它具有出色的熒光性能和良好的生物相容性。Cy5屬于小分子染料，其*大發(fā)射波長為670nm，其標記的抗體適用于所有配備633nm氬離子激光器的流式細胞儀，檢測通道一般是FL4通道。除流式細胞術外，Cy5同樣適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術。需注意的是，Cy5與單核細胞和粒細胞的非特異性結合多，實驗結果容易出現(xiàn)假陽性。Cy5.5含有一個游離胺基,可與多種官能團共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。激發(fā)和發(fā)射的最大值分別為678nm和694nm。Cy5.5已應用于各種基于熒光的實驗中。Cy5.5是一種遠紅色(和近紅外)發(fā)射染料,是熒光測量的理想選擇。Cy5.5具有成本效益,且其標記化學操作簡單,適合于潛在的***藥物開發(fā)Cy5.5標記因子VIIa是用來想象**的。用這些靶向蛋白標記的Cy5.5在**異種移植物上特異定位至少14天,但未結合的Cy5.5不能定位于任何異種移植或***。這種**血管內皮細胞中抗組織因子的成像方法可用于檢測原發(fā)性**和轉移以及監(jiān)測體內***反應[1]。pH/溫度敏感磁性納米凝膠結合Cy5.5標記乳鐵蛋白(Cy5.5-Lf-MPNA納米凝膠)是一種有前途的膠質瘤術前MRI和術中熒光成像的對比劑[2]D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產生典型的黃綠色光。

琥珀酰亞胺酯（Succinimidylesters）/NHS酯活性熒光染料用于標記抗體，蛋白質，肽，胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離氨基（-NH2）2、馬來酰亞胺（Maleimides）活性熒光染料用于標記抗體，蛋白質和肽上的巰基3、疊氮化物(Azides)活性熒光染料通過點擊化學法（Click）標記乙烯基4、炔烴(Alkynes)活性熒光染料通過點擊化學方法標記疊氮化物5、羧酸(Carboxylicacids)活性熒光染料經碳二亞胺預活化后用于標記胺或用于醇的Steglich酯化6、氨基(Amines)活性熒光染料具有游離氨基的熒光染料，用于與各種親電子化合物（如活化的酯和環(huán)氧化物）偶聯(lián)。PI常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測，常用于流式細胞儀分析。顯微鏡熒光染料DAPI

PI是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。遼寧南京熒光染料

為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質，但使用熒光染料具有其獨特的優(yōu)勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數(shù)分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進行熒光測量時不會遇到這個問題，因為只有少數(shù)材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強大的協(xié)議，并且可以自動化用于高通量應用。遼寧南京熒光染料