為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術(shù)（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)，但使用熒光染料具有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。他們提供：高靈敏度：對(duì)于大多數(shù)分析物，熒光測(cè)量的靈敏度比吸光度測(cè)量高1000倍，即使在使用小樣本時(shí)也可以令人滿意地達(dá)到ppt（萬(wàn)億分之一）的檢測(cè)限。寬線性動(dòng)態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多，分光光度測(cè)量通常會(huì)遇到干擾問題。在進(jìn)行熒光測(cè)量時(shí)不會(huì)遇到這個(gè)問題，因?yàn)橹挥猩贁?shù)材料具有熒光能力。高通量：熒光測(cè)量具有簡(jiǎn)單而強(qiáng)大的協(xié)議，并且可以自動(dòng)化用于高通量應(yīng)用。異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機(jī)熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)中。水溶熒光染料Cy5

異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）：FITC是應(yīng)用*為***的一種熒光素，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光，*大發(fā)射波長(zhǎng)為525nm。FITC的熒光強(qiáng)度受PH影響較大，常隨著PH的降低而減弱，因此，在使用FITC時(shí)需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質(zhì)檢測(cè)(b)蛋白質(zhì)和肽的微測(cè)序分析(c)使用毛細(xì)管區(qū)帶電泳進(jìn)行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(cè)(e)細(xì)胞和組織切片中的抗原檢測(cè)(f)通過標(biāo)記DNA片段進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯(lián)物制備外，異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光（由于偶聯(lián)后的大消光系數(shù)和高量子產(chǎn)率），使其成為許多工藝的優(yōu)先染料。在流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光顯微術(shù)中，染料與各種抗體（一抗或二抗）結(jié)合，以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態(tài)。作為熒光素的衍生物，異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán)，這有助于其對(duì)通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。中國(guó)澳門熒光染料外泌體南京星葉生物提供多種性價(jià)比高的各類活化熒光素，例如Cy系列、Super Fluor 系列（效果同Alexa Fluor系列）等。

熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后，能把短波長(zhǎng)的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL(zhǎng)較長(zhǎng)的可見光波而反射出來(lái)，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨(dú)使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。其中復(fù)合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個(gè)供體及一個(gè)受體熒光物分子所組成。復(fù)合染料在受體分子的激發(fā)波長(zhǎng)被激發(fā)，在供體分子的發(fā)射波長(zhǎng)發(fā)射一個(gè)光子。熒光染料發(fā)展非常迅速，已開發(fā)的用于科研和臨床應(yīng)用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個(gè)光譜范圍。

    小動(dòng)物***熒光成像技術(shù)是現(xiàn)***物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的一項(xiàng)重要技術(shù)，因其具有操作簡(jiǎn)單、實(shí)時(shí)直觀、靈敏度高、實(shí)驗(yàn)成本低等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)研究及藥物開發(fā)等方面。納米材料在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，旨在解決傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)面臨的各種醫(yī)學(xué)挑戰(zhàn)，包括生物利用度差，靶向特異性受損，全身和***毒性等。納米材料具有很多與眾不同的優(yōu)點(diǎn)，比如多功能性、大的負(fù)載量、靶向性、血液循環(huán)時(shí)間長(zhǎng)等。納米材料在生物醫(yī)學(xué)中起著關(guān)鍵作用，可以有效攜帶成像探針、***劑或生物材料并傳遞至靶點(diǎn)，如特定的***、組織甚至細(xì)胞。光學(xué)成像主要包括生物發(fā)光（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，ＢＬＩ）和焚光成像（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，Ｆ１）兩種技術(shù)。前者利用焚光素酶基因（如ＦＬＵＣ，ＲＬＵＣ，ＧＬＵＣ）標(biāo)記細(xì)胞或ＤＮＡ，其表達(dá)產(chǎn)物與莖火蟲素類底物反應(yīng)產(chǎn)生熒光。后者包括多種熒光蛋白基因（如ＧＦＰ，ＲＦＰ，ＹＦＰ等）、有機(jī)熒光染料、熒光上轉(zhuǎn)換納米粒子、量子點(diǎn)等的應(yīng)用。 Cy5.5含有一個(gè)游離胺基,可與多種官能團(tuán)共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。

3.粘壁細(xì)胞的染色（1）使粘壁的細(xì)胞在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。（4）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同。（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

4.顯微鏡檢測(cè)（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。（2）多色染料的同時(shí)檢測(cè)，濾光器按照以下設(shè)定：a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005

5.流式細(xì)胞儀的檢測(cè)DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測(cè)。 Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖?。河南?guó)產(chǎn)熒光染料

CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測(cè)和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。水溶熒光染料Cy5

其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)常用染料生物染料在細(xì)胞結(jié)構(gòu)和組分鑒定中有著廣泛的應(yīng)用，除細(xì)胞膜研究外，我們經(jīng)常也會(huì)對(duì)一些其它細(xì)胞結(jié)構(gòu)及成分進(jìn)行探索，例如線粒體、溶酶體、蛋白質(zhì)、細(xì)胞核等，而對(duì)于不同的細(xì)胞結(jié)構(gòu)有不同的染料進(jìn)行染色細(xì)胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液（DAPIStainingSolution）常用于細(xì)胞核染色，可將細(xì)胞核染成藍(lán)色。鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是細(xì)胞骨架的染色神器，羅丹明標(biāo)記的Phalloidin（TRITC-Phalloidin）可將細(xì)胞染成橙紅色，DAPI與Phalloidin染色液是研究細(xì)胞形態(tài)變化時(shí)經(jīng)常用到的兩種共染的試劑，染色效果可見A1-E1用TRITC-鬼筆環(huán)肽（橙紅）染色的細(xì)胞骨架免疫熒光圖；A2-E2用DAPI（藍(lán)色）染色的細(xì)胞核免疫熒光圖；A3-E3合并的L929細(xì)胞免疫熒光染色圖。是S100A16過表達(dá)或下調(diào)前后PDAC細(xì)胞形態(tài)的變化。水溶熒光染料Cy5