異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）：FITC是應(yīng)用*為***的一種熒光素，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光，*大發(fā)射波長(zhǎng)為525nm。FITC的熒光強(qiáng)度受PH影響較大，常隨著PH的降低而減弱，因此，在使用FITC時(shí)需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質(zhì)檢測(cè)(b)蛋白質(zhì)和肽的微測(cè)序分析(c)使用毛細(xì)管區(qū)帶電泳進(jìn)行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(cè)(e)細(xì)胞和組織切片中的抗原檢測(cè)(f)通過標(biāo)記DNA片段進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯(lián)物制備外，異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光（由于偶聯(lián)后的大消光系數(shù)和高量子產(chǎn)率），使其成為許多工藝的優(yōu)先染料。在流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光顯微術(shù)中，染料與各種抗體（一抗或二抗）結(jié)合，以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態(tài)。作為熒光素的衍生物，異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán)，這有助于其對(duì)通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。熒光染料，由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測(cè)標(biāo)記，其應(yīng)用于熒光探針，細(xì)胞染色等。內(nèi)蒙古光敏劑熒光染料

PI是一種可對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。常用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測(cè)，常用于流式細(xì)胞儀分析。盡管PI不能通過活細(xì)胞膜，但卻能穿過破損的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。PI經(jīng)常被用來與Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用，能同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞染色。PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為535nm和615nm。2.染色過程（1）將1/10培養(yǎng)基體積的PI染色液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中（也可以用1/10濃度的PI緩沖液代替培養(yǎng)基）。（2）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20分鐘。（3）用PBS或合適的緩沖液洗滌細(xì)胞兩次。（4）用535nm激發(fā)波長(zhǎng)，615nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光器的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事項(xiàng)：PI對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。內(nèi)蒙古光敏劑熒光染料吲哚菁綠在生物識(shí)別和藥物輸送方面也有廣泛的應(yīng)用。

Hoechst33342是一種可透過細(xì)胞膜并對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。Hoechst33342常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst33342-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為350nm和460nm?？扇苡谒?.染色程序：（1）用PBS或合適的緩沖液制備10～50μMHoechst33342染料。（2）將1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積的Hoechst染料溶液加入細(xì)胞培養(yǎng)物中（可以用1/10濃度的Hoechst染料緩沖液代替培養(yǎng)基）。（3）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20分鐘。（4）用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。（5）用帶有350nm激發(fā)波長(zhǎng)，460nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

常用抗體標(biāo)記熒光染料的特性及其應(yīng)用

1、FITC:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)525nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL1通道檢測(cè);3)可用于熒光顯微鏡技術(shù)4)熒光強(qiáng)度易受PH值影響，PH值降低時(shí)其熒光強(qiáng)度減弱。2、AlexaFluor488:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)519nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀:2)在流式細(xì)胞儀的FL1通道檢測(cè);3)具有超乎尋常的光穩(wěn)定性，非常適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)在較寬的PH值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定(PH4~10)。5)南京星葉生物科技有限公司SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）質(zhì)優(yōu)價(jià)廉，歡迎咨詢。3、Cy3:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)570nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測(cè):3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)為小分子染料，非常適合需小分子染料的流式細(xì)胞術(shù)，熒光強(qiáng)度低于PE。 SUPER Green I核酸染料特點(diǎn) 。

小動(dòng)物***成像技術(shù)（invivoimagingtechnology）是利用高靈敏度的光學(xué)檢測(cè)儀器直接檢測(cè)動(dòng)物***體內(nèi)的細(xì)胞活動(dòng)和基因行為研究的一類技術(shù)，是近年來發(fā)展**快的生命科學(xué)研究方法，是**直接觀察細(xì)胞和分子在體內(nèi)行為的新興技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域[1]。***動(dòng)物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是利用熒光素酶報(bào)告基因在***內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。而熒光發(fā)光成像技術(shù)是將熒光物質(zhì)或熒光物質(zhì)標(biāo)記的小分子物質(zhì)如基因、細(xì)胞也可是小分子藥物、抗體、納米材料等導(dǎo)入到***體內(nèi)，通過小動(dòng)物***成像系統(tǒng)的激發(fā)光源激發(fā)熒光集團(tuán)到達(dá)高能量狀態(tài)，而后產(chǎn)生波長(zhǎng)較激發(fā)光長(zhǎng)的發(fā)射光，然后通過高靈敏度制冷CCD鏡頭探測(cè)到***內(nèi)的發(fā)射光。通過***成像技術(shù)可以觀測(cè)***動(dòng)物體內(nèi)**的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移、炎癥的發(fā)生、特定基因的表達(dá)和藥物作用效果等生物學(xué)過程。吲哚菁綠（Indocyanine Green，簡(jiǎn)稱ICG）是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料。小動(dòng)物熒光染料Fluor 647

DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。內(nèi)蒙古光敏劑熒光染料

二、***成像分析：D-熒光素，鉀鹽，D-PBS,不含鈣、鎂1、配制溶液使用無菌D-PBS（w/oCa2+;Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液（15mg/ml），0.22μm濾膜過濾除菌（避光），分裝后于-20℃或-80℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。使用時(shí)4℃融化，實(shí)驗(yàn)前平衡至室溫（避光）2、注射量取決于注射方式，具體如下：注射方式劑量靜脈注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液腹腔注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液肌肉注射（27gauge針頭）50μl，濃度為1-2mg/ml熒光素工作液鼻內(nèi)注射（pipette）50μl，濃度為3mg/ml熒光素工作液3、注射入體內(nèi)10-20min（待光信號(hào)達(dá)到**強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期），再進(jìn)行成像分析內(nèi)蒙古光敏劑熒光染料