InvitrogenCy3染料是一種明亮的橙色熒光染料,可使用532nm激光線激發(fā),并使用TRITC(四甲基羅丹明)濾光片組進行可視化。除了免疫細胞化學(xué)應(yīng)用,Cy3染料通常用于標(biāo)記核酸。發(fā)光說明:Cy3熒光團也是親脂性神經(jīng)元和長期DiI細胞追蹤試劑的基礎(chǔ),該試劑添加烷基尾(≥12個碳)添加到**熒光團上。Cy3染料是用于成像、流式細胞術(shù)和基因組應(yīng)用的蛋白質(zhì)和核酸結(jié)合物的傳統(tǒng)橙色熒光標(biāo)簽。它也是經(jīng)典親脂性示蹤劑DiI及其變體的基礎(chǔ)。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu),Cy3可分為普通Cy3(常簡稱Cy3)和磺化Cy3(Sulfo-Cy3)。Cy3水溶性較低,在水相標(biāo)記反應(yīng)時常常需要使用有機共溶劑,常用有機溶劑包括DMF,DMSO和乙腈等?;腔疌y3是在Cy3的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上磺化的產(chǎn)物,附帶2個或3個磺酸根離子。由于磺化效應(yīng),磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮,熒光穩(wěn)定性也提高,可賴受更長時間的曝光。磺化Cy3水溶性極高,所以在標(biāo)記反應(yīng)中不需要使用有機共溶劑,特別適合標(biāo)記蛋白等對有機溶劑敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性極好,并且染料分子本身帶電荷,標(biāo)記到蛋白表面后不會引發(fā)疏水性蛋白聚集,提高熒光標(biāo)記產(chǎn)物的穩(wěn)定性。當(dāng)然,磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇,DMSO,DMF等有機溶劑,標(biāo)記反應(yīng)也可以在純有機溶劑中進行。動物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。海南杭州熒光染料
小動物***成像技術(shù)(invivoimagingtechnology)是利用高靈敏度的光學(xué)檢測儀器直接檢測動物***體內(nèi)的細胞活動和基因行為研究的一類技術(shù),是近年來發(fā)展**快的生命科學(xué)研究方法,是**直接觀察細胞和分子在體內(nèi)行為的新興技術(shù),已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個領(lǐng)域[1]。***動物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是利用熒光素酶報告基因在***內(nèi)表達產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。而熒光發(fā)光成像技術(shù)是將熒光物質(zhì)或熒光物質(zhì)標(biāo)記的小分子物質(zhì)如基因、細胞也可是小分子藥物、抗體、納米材料等導(dǎo)入到***體內(nèi),通過小動物***成像系統(tǒng)的激發(fā)光源激發(fā)熒光集團到達高能量狀態(tài),而后產(chǎn)生波長較激發(fā)光長的發(fā)射光,然后通過高靈敏度制冷CCD鏡頭探測到***內(nèi)的發(fā)射光。通過***成像技術(shù)可以觀測***動物體內(nèi)**的生長和轉(zhuǎn)移、炎癥的發(fā)生、特定基因的表達和藥物作用效果等生物學(xué)過程。遼寧熒光染料IR825南京星葉生物提供多種性價比高的各類活化熒光素,例如Cy系列、Super Fluor 系列(效果同Alexa Fluor系列)等。
在1990年代***使用的綠色熒光蛋白(從水母維多利亞水母克?。┘捌溲苌铮ɡ缭寮t藍蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等)是當(dāng)今生物學(xué)研究中**常用的一些生物熒光團。雖然熒光團可用于在細胞、細菌和各種***中表達質(zhì)粒,但它們的使用有一些缺點,即它可能很耗時,并且在融合時還能夠改變某些細胞蛋白的正常生物學(xué)功能。此外,與許多其他熒光團相比,生物熒光團的光穩(wěn)定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當(dāng)下流行的生物熒光團之一,由238個氨基酸組成,其中三個負責(zé)發(fā)出可見綠色熒光的結(jié)構(gòu)。在水母本身中,熒光團與水母發(fā)光蛋白(一種蛋白質(zhì))相互作用,當(dāng)添加鈣時會發(fā)出藍光。通過DNA重組,研究人員可以使用負責(zé)產(chǎn)生蛋白質(zhì)的基因來研究給定的基因和蛋白質(zhì)。在這里,在將復(fù)合物插入細胞之前,該基因與另一個基因(負責(zé)產(chǎn)生所需蛋白質(zhì)的第二個基因)結(jié)合。如果細胞產(chǎn)生綠色熒光,研究人員就可以明顯看出該細胞能夠表達目標(biāo)基因。GFP由488nm激光線激發(fā),可在510nm處檢測。來自熒光團的微弱信號可以使用抗GFP抗體放大。作為生物標(biāo)記物,綠色熒光蛋白用于以下功能:監(jiān)測各種生理過程*識別蛋白質(zhì)定位*檢測轉(zhuǎn)基因表達
5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料,具有廣泛的應(yīng)用,作為抗體和其他探針標(biāo)記,用熒光顯微鏡,流式細胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實驗。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性,是流式細胞儀和免疫熒光中生物檢測**常用的熒光標(biāo)記之一。**常用的熒光素包括用于標(biāo)記蛋白質(zhì)(特別是抗體)的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)],5-FITC和用于標(biāo)記肽和寡核苷酸的羧基熒光素(5-FAM和5(6)-FAM)。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物,以及一系列具有針對細胞標(biāo)記和檢測優(yōu)化的特性的質(zhì)量iFluor?熒光標(biāo)記染料。與花青和羅丹明染料一樣,熒光素也是一種有機染料。
花青類熒光染料屬于共振染料,其特征在于具有離域電荷的氮原子(兩個氮原子)之間的聚甲炔染料。由于與生物分子的低非特異性結(jié)合以及明亮的熒光,花青類熒光染料已成為一些當(dāng)下流行的用于標(biāo)記核酸的熒光染料?;ㄇ囝惾玖戏譃閮纱箢悾悍腔腔ㄇ囝惾玖?該組中的一些染料包括cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7和cy7.5。在大多數(shù)情況下,這些染料的特點是水溶性低,但胺的鹽酸鹽和酰肼除外。它們首先溶解在有機溶劑(共溶劑)中,然后在生物分子標(biāo)記期間添加到含有生物分子的溶液中。而“Cy”**花青,***個數(shù)字**存在于亞油啉基團之間的碳原子數(shù)。另一方面,添加0.5后綴以表示苯并稠合花青。這些熒光染料通常用于有機介質(zhì)?;腔惢ㄇ嗳玖?該組由磺基-Cy3、磺基-Cy5和磺基-Cy7組成。顧名思義,這些花青的特征是一個磺基,它有助于染料分子在水相中的溶解。與非磺化花青相比,這些花青更易溶于水,因此不需要溶解在有機溶劑中進行標(biāo)記?;腔ㄇ嗤ǔS糜跇?biāo)記疏水性蛋白質(zhì)、水溶液中的納米顆粒以及可能被DMSO或DMF變性的敏感蛋白質(zhì)。兩組染料均可用于標(biāo)記以下生物分子:肽、寡核苷酸和DNA、抗體、可溶性蛋白質(zhì)。花青類熒光染料屬于共振染料,其特征在于具有離域電荷的氮原子(兩個氮原子)之間的聚甲炔染料。遼寧熒光染料IR825
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細胞培養(yǎng)后,需要對其生長情況、形態(tài)甚至生物學(xué)性狀進行觀察。由于細胞小而復(fù)雜,若不借助適當(dāng)?shù)氖侄危y以觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu),更難發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。目前,已有多種研究細胞的技術(shù),從光學(xué)顯微鏡到電子顯微鏡,從一般細胞化學(xué)法到免疫化學(xué)法。細胞染色是研究細胞生物學(xué)特征的一種常用手段,然而,對于細胞實驗新手來說,想要獲得一張漂亮的細胞染色圖并不容易。染色試劑不會選、細胞染色不均勻、染色時切片脫落等都是很常見的問題。
細胞膜常用染料DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細胞膜染料(見表2),它們是一族親脂性的熒光染料,用于細胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究。該系列染料進入細胞膜后,會在整個細胞膜上側(cè)向擴散,在比較好濃度時可以使整個細胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高,染色均一,熒光不易猝滅,無明顯細胞毒性,且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應(yīng)用于多種細胞的體內(nèi)示蹤研究,如Treg細胞、間充質(zhì)干細胞、腫瘤細胞、造血干祖細胞等。 海南杭州熒光染料