熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后，能把短波長的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。其中復(fù)合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復(fù)合染料在受體分子的激發(fā)波長被激發(fā)，在供體分子的發(fā)射波長發(fā)射一個光子。熒光染料發(fā)展非常迅速，已開發(fā)的用于科研和臨床應(yīng)用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機(jī)熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)中。免疫組化熒光染料luc

為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術(shù)（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)，但使用熒光染料具有其獨特的優(yōu)勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數(shù)分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達(dá)到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進(jìn)行熒光測量時不會遇到這個問題，因為只有少數(shù)材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強(qiáng)大的協(xié)議，并且可以自動化用于高通量應(yīng)用。海南ivis熒光染料熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。

CY7是一種CY染料。CY為花菁(Cyanine)的縮寫，是由奇數(shù)個甲基單元連接的兩個氮原子組成的化合物。菁類化合物具有波長長、吸收和發(fā)射可調(diào)、消光系數(shù)高的特點CY系染料常被用于蛋白、抗體以及小分子化合物的標(biāo)記，對于蛋白抗體的標(biāo)記，可以通過簡單的混合反應(yīng)來完成結(jié)合，下面我們介紹了蛋白抗體標(biāo)記的標(biāo)記方法，具有一定的參考意義。一、比較好蛋白制備1)為獲得標(biāo)記效果，請制備蛋白(抗體)濃度為2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值為8.5±0.5。如果pH值低于8.0，應(yīng)使用1M3)如果蛋白濃度低于2mg/mL，標(biāo)記效率會**降低。為獲得比較好標(biāo)記效率，建議**終蛋白濃度范圍為2-10mg/mL。4)蛋白必須在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的緩沖液中，和銨離子，否則會影響標(biāo)記效率。2.染色制備(以CY3-NHS酯為例)將無水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中，制備成10mM儲備液。通過移液器或渦旋混合均勻計算。使用前需先使用縮合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一個可進(jìn)行后續(xù)標(biāo)記實驗。

第二種***使用的DNA染色方法是Hoechst染料，**初由化學(xué)公司HoechstAG生產(chǎn)。Hoechst33258、Hoechst33342和Hoechst34580都是鄰苯二甲酰亞胺，具有向A-T富集區(qū)插入的趨勢，因此后者不常使用。與DAPI相似，此類染料受到紫外線激發(fā)并在455nm下發(fā)射比較大值，在無結(jié)合狀態(tài)下變?yōu)?10–540nm。Hoechst染料還具有細(xì)胞滲透作用，因此可用于固定細(xì)胞和活細(xì)胞。與DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。DNA染色劑碘化丙啶無法透過細(xì)胞膜。在細(xì)胞培養(yǎng)中，因為該染色劑無法進(jìn)入完好的細(xì)胞內(nèi)，所以常常被用來區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。碘化丙啶也是一種結(jié)合劑，但對不同的堿基沒有特異性。在核酸結(jié)合態(tài)下，其比較大激發(fā)波長為538nm，比較高發(fā)射波長為617nm。未結(jié)合狀態(tài)下碘化丙啶的比較大激發(fā)和發(fā)射被移到較短的波長和較弱的強(qiáng)度。它也可以在不改變其熒光特性的情況下與RNA結(jié)合。要區(qū)分DNA和RNA，必須使用足夠的聚合酶。DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。

SuperFluor活化酯（與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同）SuperFlour系列熒光探針，具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，更廣的pH應(yīng)用范圍（pH4～10）,更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等熒光染料。1．標(biāo)記效率低——計算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標(biāo)記的熒光團(tuán)少于4mol有以下原因：1）緩沖液中含有痕量伯銨成分，與染料反應(yīng)降低了標(biāo)記效率。如果蛋白已經(jīng)溶于含氨基的緩沖液（如Tris或氨基乙酸），標(biāo)記前用PBS透析。2）蛋白含量較低(≤1mg/mL)會影響標(biāo)記效率。3）標(biāo)記步驟中加入碳酸氫鈉的作用是將反應(yīng)混合物的pH升高至～8，因為在弱堿性環(huán)境中標(biāo)記反應(yīng)的效率比較高。如果蛋白溶液的緩沖范圍在低pH，加入重碳酸鹽也無法將pH調(diào)節(jié)至**適水平。要么加大重碳酸鹽的量，要么將緩沖液換成PBS，或用0.1M碳酸氫鈉透析等。4）研究顯示pH升至9.0～9.4，標(biāo)記效率和標(biāo)記速度（只需10min）明顯改善。5）不同抗體與熒光團(tuán)的反應(yīng)速率不同，染料標(biāo)記后保留的生物活性程度也不同，因此標(biāo)準(zhǔn)步驟也不是總有比較好的標(biāo)記結(jié)果。為增加標(biāo)記率，可以對同一樣品進(jìn)行再標(biāo)記，或減少蛋白的量加大染料的量重新標(biāo)記。有研究者在室溫孵育1小時后再4℃孵育過夜，情況有所改善。羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。海南ivis熒光染料

D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。免疫組化熒光染料luc

管可用于實驗室的熒光團(tuán)數(shù)量眾多，但這些染料通常屬于以下三組之一：熒光染料:這些是用于在體外標(biāo)記生物相關(guān)分子的小型有機(jī)天然或合成熒光分子。該組中的一些熒光染料包括熒光素、溴化乙錠和花青。熒光蛋白:這些是較大的、生物制造的蛋白質(zhì)，由于它們的大分子結(jié)構(gòu)而發(fā)出熒光。GFP、RFP和YFP是屬于該組的一些染料。量子點:這些高熒光合成納米晶體由半導(dǎo)體材料制成。隨著熒光基本特性的廣泛應(yīng)用和該領(lǐng)域的顯著進(jìn)步，已經(jīng)針對特定應(yīng)用和儀器開發(fā)和優(yōu)化了數(shù)百種活性熒光染料。同樣，多年來，大量復(fù)雜的熒光技術(shù)（例如，F(xiàn)RET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS）也在不斷發(fā)展。免疫組化熒光染料luc