琥珀酰亞胺酯（Succinimidylesters）/NHS酯活性熒光染料用于標(biāo)記抗體，蛋白質(zhì)，肽，胺修飾的寡核苷酸和其他生物分子上的游離氨基（-NH2）2、馬來酰亞胺（Maleimides）活性熒光染料用于標(biāo)記抗體，蛋白質(zhì)和肽上的巰基3、疊氮化物(Azides)活性熒光染料通過點(diǎn)擊化學(xué)法（Click）標(biāo)記乙烯基4、炔烴(Alkynes)活性熒光染料通過點(diǎn)擊化學(xué)方法標(biāo)記疊氮化物5、羧酸(Carboxylicacids)活性熒光染料經(jīng)碳二亞胺預(yù)活化后用于標(biāo)記胺或用于醇的Steglich酯化6、氨基(Amines)活性熒光染料具有游離氨基的熒光染料，用于與各種親電子化合物（如活化的酯和環(huán)氧化物）偶聯(lián)。熒光染料可以單獨(dú)使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。脂質(zhì)熒光染料激發(fā)

熒光染料標(biāo)記蛋白或肽技術(shù)是一種常見的蛋白質(zhì)體外標(biāo)記技術(shù)。除了GFP等熒光蛋白的融合表達(dá)外，目標(biāo)蛋白還可以通過熒光染料標(biāo)記直接進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)操作，如***跟蹤、細(xì)胞分選等。

FITC熒光標(biāo)記的原理是什么？

熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材料是指具有共軛雙鍵系統(tǒng)化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物。當(dāng)受到紫外線或藍(lán)紫光的照射時(shí)，它可以被刺激為刺激狀態(tài)。當(dāng)激發(fā)狀態(tài)恢復(fù)到基本狀態(tài)時(shí)，它會(huì)發(fā)出熒光。蛋白質(zhì)熒光標(biāo)記技術(shù)利用熒光材料的共價(jià)結(jié)合在目標(biāo)分子的基團(tuán)上，利用其熒光特性提供研究對象的信息。 化合物熒光染料Cy3Super Flour 系列在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。

羅丹明123一種可對活細(xì)胞線粒體染色的細(xì)胞染色試劑。羅丹明123可透過細(xì)胞膜且在活細(xì)胞的線粒體內(nèi)聚集，并發(fā)出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測線粒體膜電位，也常用于細(xì)胞凋亡檢測。由于細(xì)胞內(nèi)ATP的量與羅丹明123的熒光強(qiáng)度之間有相關(guān)性，此熒光染料被應(yīng)用于檢測細(xì)胞內(nèi)的ATP。羅丹明123的比較大激發(fā)波長為507nm，比較大發(fā)射波長為525nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現(xiàn)黃綠色熒光。

一：工作液配制用緩沖液或者預(yù)熱的培養(yǎng)液直接稀釋儲(chǔ)存液到需要的工作液濃度（1～20μM），充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行調(diào)整。【注意】：對于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，要控制好總體稀釋倍數(shù)，DMSO在培養(yǎng)液中的濃度不能超過0.1%，以避免DMSO對細(xì)胞的影響。

二：熒光顯微鏡觀察1、用載玻片準(zhǔn)備細(xì)胞。細(xì)胞數(shù)目應(yīng)為5×104～5×105個(gè)/mL。2、在載玻片上孵育細(xì)胞，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞。3、將Rhodamine123工作液加入載玻片并在37℃下孵育30min至1小時(shí)。4、去除Rhodamine123溶液并用培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞（洗滌細(xì)胞后如果要固定，加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15～20min，接著用PBS洗滌）。5、熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

與花青和羅丹明染料一樣，熒光素也是一種有機(jī)染料。熒光素的比較大吸收波長為494nm，比較大發(fā)射波長為521nm（通常吸收藍(lán)色范圍內(nèi)的光并發(fā)射綠色范圍內(nèi)的光），熒光素是一種高熒光物質(zhì)。即使在非常少量的情況下也可以檢測到它，并且在與抗體結(jié)合時(shí)用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣，熒光素價(jià)格低廉且易于使用，使其成為生物學(xué)研究中很受歡迎的染料之一。與大多數(shù)其他染料不同，熒光素在水溶液中是無毒的。因此，它是極少數(shù)用作地下水示蹤劑的染料之一。D-熒光素鉀鹽熒光染料。

熒光染料在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中具有廣泛的應(yīng)用1、細(xì)胞膜標(biāo)記：可以使用熒光染料標(biāo)記細(xì)胞膜，以觀察和研究細(xì)胞膜的動(dòng)態(tài)和結(jié)構(gòu)變化。2、染色體和DNA標(biāo)記：用熒光染料標(biāo)記染色體或DNA，可以觀察和分析DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、修復(fù)等過程3、蛋白質(zhì)標(biāo)記：通過熒光染料標(biāo)記蛋白質(zhì)，可以研究蛋白質(zhì)的相互作用、定位和運(yùn)動(dòng)等特性。4、細(xì)胞器標(biāo)記：使用特定波長的熒光染料可以標(biāo)記和可視化細(xì)胞中的線粒體、溶酶體等細(xì)胞器。5、神經(jīng)科學(xué)應(yīng)用：熒光染料在神經(jīng)科學(xué)中也有廣泛應(yīng)用，如標(biāo)記神經(jīng)元和突觸，觀察神經(jīng)信號的傳遞等。6、基因表達(dá)分析：通過熒光染料標(biāo)記基因表達(dá)產(chǎn)物，可以定量分析基因的表達(dá)水平和細(xì)胞中的分布情況。羅丹明123一種可對活細(xì)胞線粒體染色的細(xì)胞染色試劑。細(xì)胞膜熒光染料Cy7

異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán)這有助于其對通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。脂質(zhì)熒光染料激發(fā)

羰花青染料***用作Di來標(biāo)記細(xì)胞、細(xì)胞器、脂質(zhì)體、病毒和脂蛋白。長鏈羰花青包括DiO(DiOC18(3))、DiI(DiIC18(3))、DiD(DiIC18(5))和DiR，以及二烷基氨基苯乙烯基染料DiA(4-Di-16-ASP)用于標(biāo)記膜和其他疏水結(jié)構(gòu)。DiIC16(3)具有比DiI(C18)更短的烷基取代基(C16)。它們在脂質(zhì)環(huán)境中具有極高的消光系數(shù)、環(huán)境依賴性熒光和短的激發(fā)態(tài)壽命。它們在室溫下是油狀物，在水中發(fā)出微弱熒光，但當(dāng)摻入膜中或與親脂性生物分子結(jié)合時(shí)，它們發(fā)出高熒光且相當(dāng)耐光。這些光學(xué)特性使它們成為細(xì)胞質(zhì)膜染色的理想選擇。一旦應(yīng)用于細(xì)胞，這些染料就會(huì)在質(zhì)膜內(nèi)橫向擴(kuò)散，導(dǎo)致整個(gè)細(xì)胞染色[1]。DiO、DiI、DiD和DiR呈現(xiàn)出不同的綠色、橙色、紅色和紅外熒光，從而促進(jìn)活細(xì)胞的多色成像和流式細(xì)胞術(shù)分析。DiO和DiI可分別與標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC過濾器一起使用。其中DiI及其類似物是**常用的，因?yàn)樗鼈兺ǔ１憩F(xiàn)出非常低的細(xì)胞毒性。此外，DiI***用于測定LDL和HDL等脂蛋白。親脂性氨基苯乙烯基染料DiA也常用于神經(jīng)元示蹤[2]。脂質(zhì)熒光染料激發(fā)