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小動物轉染試劑

來源: 發(fā)布時間:2024-08-20

選擇合適的轉染試劑可能取決于幾個因素,包括轉染核酸的類型和轉染的復雜性(單轉染或共轉染)。一些試劑如Effectene和TransIT-X2是專門用于質粒DNA轉染的,而一些試劑如Lipofectamine RNAiMAX更適合于小寡核苷酸的轉染。哺乳動物原代細胞由于其有限的壽命和有限的擴增能力,通常比其他細胞類型更不容易受到轉染。非脂質體試劑在轉染人原代細胞方面優(yōu)于脂質體試劑,包括PEC、HASMC和HAEC、人原代成肌細胞和AGS。相比之下,據(jù)報道,基于脂質體的試劑(如Lipofectamine和DharmaFECT家族)在轉染其他原代人細胞(如原代臍帶靜脈內皮細胞(HUVEC)和BM-MSC方面比非脂質體試劑產生更高的轉染效率。研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。小動物轉染試劑

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攜帶要轉染的特定核酸的載體構建可以進一步分為病毒載體或質粒載體。病毒和質粒通過存在合適的真核啟動子促進外源轉基因的表達。病毒載體可能在宿主細胞中觸發(fā)免疫原性反應,而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機制來促進靶向核酸或載體結構轉移到宿主細胞中。其中一些需要物理方法,而另一些涉及使用遞送載體,可能是脂質載體或非脂質載體,以幫助增強載體載體復合物與宿主細胞膜之間的接觸,從而促進復合物進入細胞。設計和啟動轉染試驗可能具有挑戰(zhàn)性,特別是可供選擇的轉染方法或策略種類繁多的情況下。福建肺轉染試劑影響物理轉染或機械轉染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。

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不同種類的納米顆粒轉染細胞系后,產生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測試表明,納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉染方法相當。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質體、陽離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉染劑對COS-1細胞系(非洲綠猴腎成纖維細胞樣細胞)使用四種不同的轉染介質所取得的轉染效果。固體脂質na-noparticles轉染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉染組的熒光素酶基因表達效率沒有統(tǒng)計學上的***差異,在每種轉染介質中保持相同水平。然而,獲得的轉染效率低于使用商業(yè)轉染劑EscortTM 的效率,該轉染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過在HepG2細胞(人肝細胞肝*細胞系)上使用固體脂質納米顆粒,實現(xiàn)了與市買的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達水平。

PEI的分子量對細胞毒性和基因轉移活性有影響。由于PEI在細胞內不可降解,所以分子量越高,細胞毒性越強。此外,具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物,使其更容易轉染,但更難在細胞內釋放核酸。另一方面,PEI產生的復合物分子量降低,更難以轉染;但它更容易釋放核酸。因此,確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實現(xiàn)的。然而,一些改進使PEI在應用中更加先進。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián),可***降低細胞毒性并保持較高的轉染效率。通過用丙烯酸乙酯修飾胺,伯胺的乙酰化,或在聚合物結構中引入帶負電荷的丙酸或琥珀酸基團,可以制備出各種無毒的分支PEI衍生物。由此產生的化學物質在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。是由非離子核酸與陽離子脂質體(CLs)表面結合,形成多層脂質-核酸復合物而形成的。

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PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時,它可以與質粒DNA結合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn),配體在PLL上的共價附著可通過受體介導的途徑***增強內吞作用。例如,涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體,在肝細胞上表達。當ASOR共價附著在PLL上時,受體介導的內吞作用和質粒的細胞攝取***增加。此外,與葉酸或轉鐵蛋白相關的PLL已被開發(fā)出來,并在將pDNAs轉染到*細胞中取得了實質性進展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性,但轉染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明,與PLL相比,PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA,并且在相同的多陽離子/pDNA質量比下,PLO/pDNA復合物比PLL/pDNA復合物更耐破壞。然而,由于其介導內體逃逸的能力較差,帶正電的多氨基酸的轉染效率仍然很低。脂質復合物(CLNACs)通過網(wǎng)格蛋白參與的內吞作用進入細胞。福建肺轉染試劑

在轉染中,DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質粒)轉運到宿主細胞中。小動物轉染試劑

除了mRNA疫苗,DNA疫苗也是不錯的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下,研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進了PG和PAMAM G4復合物的大小、運動性和表面電荷,然后在BALB/c小鼠中測試疫苗設計的免疫原性。根據(jù)研究結果,由于同時包裝在PG和PAMAM G4包膜中,DNA疫苗的免疫原性增加。在給予PG包被的DNA疫苗復合物的小鼠中,觀察到**強的t細胞反應,并且這些反應明顯高于給予裸DNA組合和PAMAM 4G包被的DNA組合的動物組。小動物轉染試劑