羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比,羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性,使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測、活細(xì)胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作:分子開關(guān),病毒表面修飾,化學(xué)傳感器,硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基(R1、R2、R3、R4和G)來區(qū)分。由于它們的差異,這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性(例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值)。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率,而在每個(gè)氮處具有兩個(gè)烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)部轉(zhuǎn)化,量子產(chǎn)率和熒光壽命隨溫度的變化而變化。羅丹明101和羅丹明B是一些**常用的羅丹明染料具有以下特點(diǎn):--羧基傾向于在酸性溶液中質(zhì)子化--染料轉(zhuǎn)化為兩性離子堿性溶液--兩性離子染料在極性較小的有機(jī)溶劑中變?yōu)闊o色內(nèi)酯要將羅丹明用作熒光探針,必須對其進(jìn)行修改。這可以通過(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基環(huán)或羧酸基團(tuán)的修飾來實(shí)現(xiàn)。與TRITC一樣,羅丹明(NHS-rhodamine)的熒光特性為544nm(比較大吸收波長)和576nm(比較大發(fā)射)。吲哚菁綠(Indocyanine Green,簡稱ICG)是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料。中國澳門熒光染料Cy5
與花青和羅丹明染料一樣,熒光素也是一種有機(jī)染料。熒光素的比較大吸收波長為494nm,比較大發(fā)射波長為521nm(通常吸收藍(lán)色范圍內(nèi)的光并發(fā)射綠色范圍內(nèi)的光),熒光素是一種高熒光物質(zhì)。即使在非常少量的情況下也可以檢測到它,并且在與抗體結(jié)合時(shí)用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣,熒光素價(jià)格低廉且易于使用,使其成為生物學(xué)研究中很受歡迎的染料之一。與大多數(shù)其他染料不同,熒光素在水溶液中是無毒的。因此,它是極少數(shù)用作地下水示蹤劑的染料之一。山西熒光染料熒光素鉀鹽Cy5.5含有一個(gè)游離胺基,可與多種官能團(tuán)共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。
納米粒子納米顆粒是指尺寸在1到100納米之間的顆粒。由于它們的小尺寸,納米粒子通常用于不同類型的細(xì)胞和組織的熒光成像。當(dāng)今生物成像中常用的一些納米材料包括碳點(diǎn)、貴金屬納米顆粒、聚合物點(diǎn)、量子點(diǎn)和熒光摻雜二氧化硅等。在成像中,與其他分子熒光團(tuán)和探針相比,納米顆粒/納米材料具有多種優(yōu)勢,使其成為理想的選擇。除了提高亮度外,納米粒子是惰性的并且往往分布均勻,這有助于在成像過程中獲得更好的結(jié)果。此外,與各種分子熒光團(tuán)相比,納米顆粒和納米材料沒有細(xì)胞毒性,并且不受非特異性結(jié)合問題的影響。由于這些特性,大多數(shù)熒光納米顆粒(染色納米顆粒)可以內(nèi)化到細(xì)胞/組織中,并容易靶向給定部位。
Hoechst33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,對細(xì)胞的毒性較低。用于細(xì)胞核染色時(shí),推薦的Hoechst33258工作濃度為0.5-10μg/ml。儲存條件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。注意事項(xiàng):Hoechst33258對人體有害,請注意適當(dāng)防護(hù)。熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液??篃晒獯銣绶馄?P0126)可以向碧云天訂購。為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作注意事項(xiàng):Hoechst33342對人體有一定刺激性,請注意適當(dāng)防護(hù)。熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測。為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。DiI(橙色熒光),DiO(綠色熒光),DiD(紅色熒光)和 DiR (深紅色熒光)對活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。
SuperFluor活化酯(與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同)SuperFlour系列熒光探針,具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度,更廣的pH應(yīng)用范圍(pH4~10),更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等熒光染料。1.標(biāo)記效率低——計(jì)算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標(biāo)記的熒光團(tuán)少于4mol有以下原因:1)緩沖液中含有痕量伯銨成分,與染料反應(yīng)降低了標(biāo)記效率。如果蛋白已經(jīng)溶于含氨基的緩沖液(如Tris或氨基乙酸),標(biāo)記前用PBS透析。2)蛋白含量較低(≤1mg/mL)會影響標(biāo)記效率。3)標(biāo)記步驟中加入碳酸氫鈉的作用是將反應(yīng)混合物的pH升高至~8,因?yàn)樵谌鯄A性環(huán)境中標(biāo)記反應(yīng)的效率比較高。如果蛋白溶液的緩沖范圍在低pH,加入重碳酸鹽也無法將pH調(diào)節(jié)至**適水平。要么加大重碳酸鹽的量,要么將緩沖液換成PBS,或用0.1M碳酸氫鈉透析等。4)研究顯示pH升至9.0~9.4,標(biāo)記效率和標(biāo)記速度(只需10min)明顯改善。5)不同抗體與熒光團(tuán)的反應(yīng)速率不同,染料標(biāo)記后保留的生物活性程度也不同,因此標(biāo)準(zhǔn)步驟也不是總有比較好的標(biāo)記結(jié)果。為增加標(biāo)記率,可以對同一樣品進(jìn)行再標(biāo)記,或減少蛋白的量加大染料的量重新標(biāo)記。有研究者在室溫孵育1小時(shí)后再4℃孵育過夜,情況有所改善。Super Fluor活化酯(與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同)。中國澳門熒光染料Cy5
南京星葉生物熒光染料標(biāo)記蛋白。中國澳門熒光染料Cy5
一種發(fā)光雜環(huán)化合物,存在于生物發(fā)光的生物體中,如螢火蟲。在含有三磷酸腺苷的情況下,通過熒光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光??捎糜跓晒馑孛干锇l(fā)光成像和細(xì)胞高通量篩選應(yīng)用。D-熒光素(D-Luciferin)是螢火熒光素酶底物,其量子效率為0.88,是Luminol的20倍。反應(yīng)原理:首先,在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng),接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測定細(xì)胞活力以及細(xì)菌計(jì)數(shù)。它還用于報(bào)告基因檢測??膳c小動物***成像系統(tǒng)配套使用,用于標(biāo)記LUC基因后的體內(nèi)***熒光檢測。D-熒光素游離酸(D-Luciferin,freeacid)、D-熒光素鉀鹽(D-Luciferin,potassiumsalt)和D-熒光素鈉鹽(D-Luciferin,sodiumsalt),鉀鹽、鈉鹽的形式是**通用的,因?yàn)樗鼈兌家兹苡谒?。鉀鹽也是***動物檢測使用的主要形式。它們的激發(fā)和發(fā)射波長分別為328nm和533nm。中國澳門熒光染料Cy5