目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無(wú)法深入穿透組織和***，如實(shí)體瘤和大腦。通常情況下，只能到達(dá)并轉(zhuǎn)染細(xì)胞的外層，從而導(dǎo)致***效果不佳。愛(ài)潑斯坦巴爾病毒(EBV)，一種人類**病原體，似乎通過(guò)劫持**微環(huán)境中的外泌體進(jìn)行細(xì)胞間通訊來(lái)克服這一點(diǎn)。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm)，起源于內(nèi)吞。在被釋放到細(xì)胞外環(huán)境后，由于其表面存在細(xì)胞識(shí)別分子，它們可以與鄰近細(xì)胞融合。外泌體外泌體是細(xì)胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號(hào)因子的載體，通過(guò)經(jīng)歷細(xì)胞內(nèi)化和釋放的幾個(gè)周期，能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細(xì)胞分泌，包括腫瘤細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞、上皮細(xì)胞和神經(jīng)元。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。這可以通過(guò)靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯(lián)蛋白)并啟動(dòng)脂質(zhì)體和外泌體之間的融合事件來(lái)實(shí)現(xiàn)。評(píng)估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中。中國(guó)香港天津轉(zhuǎn)染試劑

基因注射包括通過(guò)注射將所需的核酸物質(zhì)直接輸送到宿主細(xì)胞核中。當(dāng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染具有挑戰(zhàn)性時(shí)，特別是當(dāng)需要對(duì)宿主細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾時(shí)，這種方法是一種很好的替代方法。與其他非病毒基因傳遞方法一樣，沒(méi)有一種方法可以適用于所有不同的細(xì)胞類型，選擇合適的細(xì)胞類型和核酸大小對(duì)于確保基因注射的成功至關(guān)重要。例如，先前的一項(xiàng)研究報(bào)道了成功生成表達(dá)cre重組酶(大小～1,000bp)的轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞系。另一方面，在一項(xiàng)體內(nèi)研究中，表達(dá)轉(zhuǎn)基因的小鼠肌纖維數(shù)量與注射次數(shù)和給藥質(zhì)粒劑量相關(guān)。另一項(xiàng)體外研究進(jìn)一步支持了這一觀點(diǎn)，該研究報(bào)道了表達(dá)報(bào)告基因的宿主細(xì)胞的數(shù)量與注入細(xì)胞的核酸量密切相關(guān)。此外，微針的大小、形狀和額外涂層的存在也會(huì)影響基因注射的效率，因?yàn)橛袌?bào)道稱，涂有微顆粒的小尺寸微針(<10毫米)能夠順利地將所需的貨物輸送到皮膚的角質(zhì)層。中國(guó)臺(tái)灣天津轉(zhuǎn)染試劑與DNA轉(zhuǎn)染類似，RNA可以通過(guò)基于RNA的病毒或非病毒載體導(dǎo)入真核細(xì)胞。

人類原代干細(xì)胞是另一種公認(rèn)的難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染這種細(xì)胞類型的比較大挑戰(zhàn)仍然是效率低和細(xì)胞活力低。2015年，王等報(bào)道了Lipofectamine 2000和XtremeGENE HP等轉(zhuǎn)染試劑在人牙周韌帶干細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率非常低(<6%)，而陽(yáng)性對(duì)照慢病毒載體的轉(zhuǎn)染效率約為95%。與同一研究中采用的磁輔助轉(zhuǎn)染技術(shù)相比，后者表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)染效率(～11%)和更低的毒性。在另一項(xiàng)涉及人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBM-MSC)的研究中，Lipofectamine LTX被證明比TransIT-2020、Lipofectamine 3000和聚乙烯亞胺(PEI)等其他試劑產(chǎn)生比較好的轉(zhuǎn)染效率(至少高出三倍)，但細(xì)胞存活率較低(<50%)。相比之下，使用TransIT-2020試劑可能會(huì)獲得更好的結(jié)果，該試劑的效率約為30%，細(xì)胞回收率高達(dá)90%，細(xì)胞干性約為95%。另一個(gè)難以轉(zhuǎn)染干細(xì)胞的例子是誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)。在一項(xiàng)比較轉(zhuǎn)染人類ipsc衍生心肌細(xì)胞(hiPSC-CMSs)的不同非病毒方法的研究中，與其他試劑(Lipofectamine 3000、Lipofectamine 2000和基于pei的非脂質(zhì)體試劑TransporterTM5和PEI25)相比，Lipofectamine STEM顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率(高達(dá)32%)，其效率低于20%。

評(píng)估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中?？梢赃x擇多種策略來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(qPCR)是一種通過(guò)直接測(cè)量特定外源蛋白表達(dá)水平來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率的定量方法。細(xì)胞內(nèi)核酸或其他可能受到外源核酸(如miRNAs)影響的細(xì)胞內(nèi)核酸。在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的情況下，每次轉(zhuǎn)染后都應(yīng)進(jìn)行qPCR，以確保良好的轉(zhuǎn)染效率，然后再進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。與質(zhì)粒報(bào)告系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染是另一種策略，可以通過(guò)表達(dá)特定的報(bào)告蛋白(如熒光素酶或β-半乳糖苷酶)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。采用小RNA熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)以干擾(RNAi)研究為例，miRNA轉(zhuǎn)染成功的標(biāo)志是熒光素酶活性下調(diào)，這是由于miRNA與轉(zhuǎn)錄的熒光素酶mRNA 3'端結(jié)合導(dǎo)致mRNA降解。熒光顯微鏡是評(píng)估轉(zhuǎn)染效率的另一種常見(jiàn)、簡(jiǎn)便、快速的方法。它通常涉及使用攜帶熒光報(bào)告基因或標(biāo)記有熒光團(tuán)的寡核苷酸的載體來(lái)進(jìn)行熒光檢測(cè)。然而，熒光顯微鏡只能提供對(duì)轉(zhuǎn)染效率的定性或半定量測(cè)量，這可以使用ImageJ等專門(mén)軟件來(lái)確定。轉(zhuǎn)染是將外源核酸送入細(xì)胞的過(guò)程，其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細(xì)胞中表達(dá)。

**近一項(xiàng)與抗血管生成基因傳遞高度相關(guān)的發(fā)現(xiàn)是，陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）選擇性地靶向**的血管系統(tǒng)。陰離子或電中性脂質(zhì)體沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這種作用。Campbell和他的同事[95]發(fā)現(xiàn)，與電中性脂質(zhì)體相比，使用CLs在**血管內(nèi)皮細(xì)胞(VECs)中積累更多，CLs通過(guò)添加5mol%聚乙二醇來(lái)穩(wěn)定。在兩種人類**類型(LS174T和MCAIV)和兩個(gè)位置(顱窗和背側(cè)皮膚褶腔)中發(fā)現(xiàn)了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的，這可能與該技術(shù)是否足以根除足夠數(shù)量的**VECs以實(shí)現(xiàn)**消退反應(yīng)有關(guān)。有趣的是，注射后24小時(shí)，脂質(zhì)體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹(shù)狀大分子(PAMAM G4)的幫助下。中國(guó)香港天津轉(zhuǎn)染試劑

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個(gè)因素，包括轉(zhuǎn)染核酸的類型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。中國(guó)香港天津轉(zhuǎn)染試劑

小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。這可以通過(guò)引入含有熒光素酶報(bào)告基因的質(zhì)粒來(lái)實(shí)現(xiàn)，其中的3'UTR可以被特定的小RNA(如miRNA)識(shí)別，然后允許小RNA結(jié)合以抑制熒光素酶的表達(dá)。另一方面，在RNA干擾(RNAi)研究中，小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也是必不可少的，以確定siRNA等特定小RNA對(duì)宿主細(xì)胞中特定基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。小的非編碼RNA，如siRNA，以其表觀遺傳調(diào)控能力而聞名，更具體地說(shuō)，是轉(zhuǎn)錄后對(duì)特定基因表達(dá)的調(diào)控。siRNA模擬物和攜帶與熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)相關(guān)的特定基因的質(zhì)粒DNA可以同時(shí)共轉(zhuǎn)染到靶細(xì)胞中。siRNA模擬物成功敲低特定基因表達(dá)將導(dǎo)致熒光素酶活性***降低。共轉(zhuǎn)染還可能涉及不同的小分子如miRNAs，這有助于研究小RNA對(duì)靶宿主細(xì)胞的影響。例如，如果引入miRNA模擬物可以影響特定細(xì)胞類型中特定下游基因的表達(dá)，那么預(yù)計(jì)將其抑制劑序列同時(shí)轉(zhuǎn)染到同一細(xì)胞中會(huì)降低單獨(dú)miRNA模擬物序列發(fā)揮的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)作用。與單一核酸類型的轉(zhuǎn)染相比，涉及將多個(gè)核酸轉(zhuǎn)移到同一細(xì)胞中的共轉(zhuǎn)染通常更多挑戰(zhàn)性更大，因?yàn)椴⒎撬泻怂犷愋投寄苡行мD(zhuǎn)移，這可能取決于轉(zhuǎn)染方法和所涉及的細(xì)胞類型。中國(guó)香港天津轉(zhuǎn)染試劑