在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達相對短暫。靜脈注射脂叢的肺表達比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達量每周減少約1log。造成這種現(xiàn)象的機制可能有以下幾種:(a)產(chǎn)生針對外源基因產(chǎn)物的新***抗體，(b)細胞因子介導(dǎo)的啟動子關(guān)閉，(c)通過凋亡、先天或適應(yīng)性免疫反應(yīng)根除表達細胞以及（d）表達基因的細胞因細胞凋亡而減少是導(dǎo)致表達減少。這些機制具有重要意義，因為不可能重復(fù)給藥，而且轉(zhuǎn)基因凈表達會隨著時間的推移而減少。盡管通過中和或消除細胞因子的產(chǎn)生可以提高肺中的基因表達水平。靜脈給藥引起的毒性可能是由于小鼠轉(zhuǎn)氨酶水平的增加，在相同劑量下，小鼠肝臟出現(xiàn)組織病理學病變，但肺部沒有不良反應(yīng)。這種增加可以通過使用較少的細胞毒性陽離子脂質(zhì)體（CLs）來控制。轉(zhuǎn)氨酶的釋放歸因于未甲基化的堿基，如pDNA序列中的胞嘧啶和鳥嘌呤。肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強烈的毒性反應(yīng)，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。jetPEI 轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨

此外，病毒濃度被認為是影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的另一個因素。在Haas等人的評估中測試的其他幾個參數(shù)中，即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構(gòu)建，纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)培養(yǎng)基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白，只有病毒滴度似乎與病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率直接相關(guān)。轉(zhuǎn)染介質(zhì)的條件也可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。例如，在轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中，使用胎牛血清比牛血清產(chǎn)生更好的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。同樣，研究表明，deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負電荷細胞之間的排斥力，并促進病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)。影響化學轉(zhuǎn)染效率的因素jetPEI 轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨評估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中。

PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質(zhì))制成的，是***個用作基因載體的聚酯。在生理環(huán)境中，PHP可以在不到兩個小時的時間內(nèi)失去其初始分子量的50%。然而，PHP完全分解為其等效單體需要三個月的時間，分解產(chǎn)物是單體羥脯氨酸。雖然PHP酯在溶液中單獨存在時降解很快，但與DNA絡(luò)合時更穩(wěn)定。將PHP酯/pSV-gal復(fù)合物轉(zhuǎn)染CPAE細胞，測定PHP酯作為基因傳遞載體的活性。由于聚L-賴氨酸是**常用的基因轉(zhuǎn)運聚合物，PHP酯的轉(zhuǎn)染效率與聚L-賴氨酸相當。轉(zhuǎn)染效果隨著PHP酯濃度高于DNA濃度而增加。PHP酯轉(zhuǎn)染細胞的能力不受FBS存在的影響。結(jié)果表明，PHP酯是一種潛在的基因載體。

納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細胞轉(zhuǎn)染，但似乎找到一種既能改善基因表達又不影響細胞、不對細胞造成損害的比較好技術(shù)也至關(guān)重要。納米顆粒參與內(nèi)皮運輸?shù)哪芰κ蛊淠軌蚓脑O(shè)計**精確的方法，將基因結(jié)構(gòu)靶向到特定的作用位置。來自不同化合物和元素的納米顆粒的作用方式與轉(zhuǎn)染的非病毒載體相同，這使它們能夠通過內(nèi)吞作用將DNA運輸過細胞膜。DNA被包裹起來，很容易從核內(nèi)體中釋放出來，也被核酸酶保護著不被消化。由于有許多不同種類的納米顆粒，找到**適合轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞的納米顆粒是至關(guān)重要的。將納米顆粒與其他化合物連接成多功能、復(fù)雜的運輸單元，可以提高穿越細胞膜和細胞內(nèi)運輸?shù)男?。將蛋白質(zhì)或多肽結(jié)合到納米顆粒上，根據(jù)細胞類型的不同，轉(zhuǎn)染效率提高了5到10倍。由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場變革。

作為一般指導(dǎo)原則，建議使用早期傳代的細胞以獲得良好的轉(zhuǎn)染效率，特別是涉及原代或干細胞的轉(zhuǎn)染。另一個有趣的觀察結(jié)果是，37℃是可以幫助原代細胞達到更高轉(zhuǎn)染效率的比較好培養(yǎng)溫度。這種現(xiàn)象可能是因為37攝氏度是哺乳動物細胞的比較好培養(yǎng)溫度。同時，在轉(zhuǎn)染原代細胞時，化學轉(zhuǎn)染似乎不如病毒和物理轉(zhuǎn)染有吸引力，尤其是在人類原代干細胞中。當在相似條件下使用相同的轉(zhuǎn)染試劑進行轉(zhuǎn)染時，細胞系的來源(如人類與動物細胞系)也可能有助于不同程度的效率。在一項涉及轉(zhuǎn)染人類和大鼠平滑肌細胞的研究中，大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑在轉(zhuǎn)染大鼠平滑肌細胞(α-10SMCs)方面的效率高于轉(zhuǎn)染人主動脈平滑肌細胞(HASMCs)。小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評估轉(zhuǎn)染效率。江西肝臟轉(zhuǎn)染試劑

利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。jetPEI 轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨

脂質(zhì)復(fù)合物又稱陽離子脂質(zhì)-核酸復(fù)合物(CLNACs)，是由非離子核酸與陽離子脂質(zhì)體（CLs）表面結(jié)合，**終形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。帶負電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面，**初與停靠在陽離子囊泡表面的核酸分子形成復(fù)合物，然后發(fā)展到核酸分子持續(xù)粘在脂質(zhì)分子上的階段，脂質(zhì)雙分子層圍繞緊實的核脂質(zhì)顆粒。復(fù)合物形態(tài)的這種異質(zhì)性可能歸因于囊泡的脂質(zhì)組成、復(fù)合物形成的方式、脂質(zhì):核酸比例、核酸結(jié)構(gòu)的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復(fù)合物的技術(shù)。除了靜電吸引外，疏水相互作用被認為有助于脂質(zhì)和核酸之間的復(fù)合物形成。因此，根據(jù)正電荷(陽離子脂質(zhì))與負電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比，脂質(zhì)體可能通過與細胞表面的蛋白聚糖基團等帶電殘基的靜電相互作用，或通過與質(zhì)膜疏水區(qū)域的疏水相互作用進入細胞。jetPEI 轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨