為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。雖然有幾項研究已經(jīng)調(diào)查了血液成分如何使脂質(zhì)和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定，對于介導(dǎo)細(xì)胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進(jìn)入血液后會發(fā)生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質(zhì)體成分不強(qiáng)烈附著于復(fù)合物將從顆粒中脫落，而新的成分，如脂蛋白，可以粘附在復(fù)合物的表面。這不僅會導(dǎo)致顆粒的不穩(wěn)定，還會改變生物分布或促進(jìn)體內(nèi)***。了解在體內(nèi)遞送的每個階段(在給藥部位，在血液循環(huán)過程中，在***和組織的細(xì)胞外基質(zhì)中，以及**終進(jìn)入靶細(xì)胞時)，多聚物和脂聚物的組成如何變化，可能有助于設(shè)計具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統(tǒng)?；蚴顷栯x子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應(yīng)用。黑龍江南京轉(zhuǎn)染試劑

化學(xué)轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。基于脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑是一種化學(xué)物質(zhì)，它能夠形成帶正電的脂質(zhì)聚集體，這些聚集體可以與宿主細(xì)胞的磷脂雙分子層順利融合，從而允許外來遺傳物質(zhì)以**小的阻力進(jìn)入。另一方面，非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑可進(jìn)一步分為幾類，包括磷酸鈣、樹狀大分子、聚合物、納米顆粒和非脂質(zhì)體。磷酸鈣是轉(zhuǎn)染中使用的低價的化學(xué)物質(zhì)之一，轉(zhuǎn)染涉及將帶正電的鈣離子(Ca2+)與帶負(fù)電的核酸結(jié)合，形成沉淀，然后被宿主細(xì)胞吸收。然而，磷酸鈣轉(zhuǎn)染的成功率較低，需要事先優(yōu)化才能達(dá)到較高的轉(zhuǎn)染效率。樹狀大分子是三維的、高度支化的有機(jī)大分子，可以與核酸形成復(fù)合物，作為一種替代的非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，它優(yōu)于磷酸鈣。然而，使用樹狀大分子的轉(zhuǎn)染效率仍然低于病毒載體和脂質(zhì)體試劑。陽離子聚合物也可以與帶負(fù)電荷的核酸形成復(fù)合物，這有助于細(xì)胞通過內(nèi)吞作用吸收遺傳物質(zhì)。與病毒載體相比，陽離子聚合物產(chǎn)生的細(xì)胞毒性較小，但效率也較低。納米顆粒由于其體積小，增強(qiáng)了核酸進(jìn)入宿主細(xì)胞的能力，正在成為非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的替代選擇。黑龍江南京轉(zhuǎn)染試劑利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。

攜帶要轉(zhuǎn)染的特定核酸的載體構(gòu)建可以進(jìn)一步分為病毒載體或質(zhì)粒載體。病毒和質(zhì)粒通過存在合適的真核啟動子促進(jìn)外源轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。病毒載體可能在宿主細(xì)胞中觸發(fā)免疫原性反應(yīng)，而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機(jī)制來促進(jìn)靶向核酸或載體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用遞送載體，可能是脂質(zhì)載體或非脂質(zhì)載體，以幫助增強(qiáng)載體載體復(fù)合物與宿主細(xì)胞膜之間的接觸，從而促進(jìn)復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞。設(shè)計和啟動轉(zhuǎn)染試驗(yàn)可能具有挑戰(zhàn)性，特別是可供選擇的轉(zhuǎn)染方法或策略種類繁多的情況下。

除了mRNA疫苗，DNA疫苗也是不錯的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下，研究人員集中研究了將合成t細(xì)胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進(jìn)了PG和PAMAM G4復(fù)合物的大小、運(yùn)動性和表面電荷，然后在BALB/c小鼠中測試疫苗設(shè)計的免疫原性。根據(jù)研究結(jié)果，由于同時包裝在PG和PAMAM G4包膜中，DNA疫苗的免疫原性增加。在給予PG包被的DNA疫苗復(fù)合物的小鼠中，觀察到**強(qiáng)的t細(xì)胞反應(yīng)，并且這些反應(yīng)明顯高于給予裸DNA組合和PAMAM 4G包被的DNA組合的動物組。化學(xué)轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。

PEI的分子量對細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。由于PEI在細(xì)胞內(nèi)不可降解，所以分子量越高，細(xì)胞毒性越強(qiáng)。此外，具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物，使其更容易轉(zhuǎn)染，但更難在細(xì)胞內(nèi)釋放核酸。另一方面，PEI產(chǎn)生的復(fù)合物分子量降低，更難以轉(zhuǎn)染;但它更容易釋放核酸。因此，確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實(shí)現(xiàn)的。然而，一些改進(jìn)使PEI在應(yīng)用中更加先進(jìn)。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián)，可***降低細(xì)胞毒性并保持較高的轉(zhuǎn)染效率。通過用丙烯酸乙酯修飾胺，伯胺的乙酰化，或在聚合物結(jié)構(gòu)中引入帶負(fù)電荷的丙酸或琥珀酸基團(tuán)，可以制備出各種無毒的分支PEI衍生物。由此產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。Severino et al.進(jìn)行的研究也指出了陽離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。黑龍江南京轉(zhuǎn)染試劑

是由非離子核酸與陽離子脂質(zhì)體（CLs）表面結(jié)合，形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。黑龍江南京轉(zhuǎn)染試劑

超聲輔助轉(zhuǎn)染涉及在宿主細(xì)胞膜上制造微小的孔，以促進(jìn)核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。與前一種策略類似，超聲照射的暴露時間、脈沖數(shù)和密度也被報道與轉(zhuǎn)染效率成比例相關(guān)，直至達(dá)到閾值。超過耐受極限，細(xì)胞存活率和轉(zhuǎn)染效率可能會下降。同樣，增加核酸的數(shù)量也可以提高超聲輔助轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率。在同一項研究中，超聲轉(zhuǎn)染懸浮培養(yǎng)的人293T細(xì)胞比轉(zhuǎn)染貼壁培養(yǎng)的相同細(xì)胞類型更容易。然而，這一觀察結(jié)果與另一項研究的結(jié)果不一致，該研究報告在懸浮或單層條件下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)染大鼠細(xì)胞數(shù)量沒有***差異。值得注意的是，后一項研究還報道了單層培養(yǎng)的大鼠細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后保持較高的細(xì)胞活力。然而，這兩項研究的不一致結(jié)果表明，超聲穿孔的比較好培養(yǎng)條件可能因使用的細(xì)胞系不同而異。在另一項研究中表明超聲轉(zhuǎn)染效率因使用的細(xì)胞類型而異，Hela和T-24細(xì)胞系的超聲轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于PC-3、U937和Meth A細(xì)胞系。因此，細(xì)胞類型的選擇是影響超聲轉(zhuǎn)染效率的另一個因素。黑龍江南京轉(zhuǎn)染試劑