二、***成像分析：D-熒光素，鉀鹽，D-PBS,不含鈣、鎂1、配制溶液使用無(wú)菌D-PBS（w/oCa2+;Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液（15mg/ml），0.22μm濾膜過(guò)濾除菌（避光），分裝后于-20℃或-80℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。使用時(shí)4℃融化，實(shí)驗(yàn)前平衡至室溫（避光）2、注射量取決于注射方式，具體如下：注射方式劑量靜脈注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液腹腔注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液肌肉注射（27gauge針頭）50μl，濃度為1-2mg/ml熒光素工作液鼻內(nèi)注射（pipette）50μl，濃度為3mg/ml熒光素工作液3、注射入體內(nèi)10-20min（待光信號(hào)達(dá)到**強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期），再進(jìn)行成像分析D-熒光素鉀鹽小動(dòng)物成像。廣東熒光染料紅色

D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲(chóng)產(chǎn)生典型的黃綠色光。該反應(yīng)的 560 nm 化學(xué)發(fā)光在幾秒鐘內(nèi)達(dá)到峰值，當(dāng)?shù)孜餆晒馑剡^(guò)量時(shí)，光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是用于研究和藥物篩選的流行報(bào)告基因?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)幾乎沒(méi)有背景，使得 luc 報(bào)告基因成為檢測(cè)低水平基因表達(dá)的理想選擇。標(biāo)準(zhǔn)閃爍計(jì)數(shù)器可以可靠地測(cè)量低至 0.02 pg 的熒光素酶。除了作為基因表達(dá)報(bào)告者的作用外，熒光素酶還常用于極其靈敏的 ATP 檢測(cè)中[1]。我們提供螢火蟲(chóng)熒光素酶 (HY-P1004)、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B)。寧夏熒光染料脂溶D-熒光素鉀鹽南京星葉生物科技有限公司。

CY7是一種CY染料。CY為花菁(Cyanine)的縮寫(xiě)，是由奇數(shù)個(gè)甲基單元連接的兩個(gè)氮原子組成的化合物。菁類化合物具有波長(zhǎng)長(zhǎng)、吸收和發(fā)射可調(diào)、消光系數(shù)高的特點(diǎn)CY系染料常被用于蛋白、抗體以及小分子化合物的標(biāo)記，對(duì)于蛋白抗體的標(biāo)記，可以通過(guò)簡(jiǎn)單的混合反應(yīng)來(lái)完成結(jié)合，下面我們介紹了蛋白抗體標(biāo)記的標(biāo)記方法，具有一定的參考意義。一、比較好蛋白制備1)為獲得標(biāo)記效果，請(qǐng)制備蛋白(抗體)濃度為2mg/mL。2)蛋白溶液的pH值為8.5±0.5。如果pH值低于8.0，應(yīng)使用1M3)如果蛋白濃度低于2mg/mL，標(biāo)記效率會(huì)**降低。為獲得比較好標(biāo)記效率，建議**終蛋白濃度范圍為2-10mg/mL。4)蛋白必須在不含伯胺(如Tris或甘氨酸)的緩沖液中，和銨離子，否則會(huì)影響標(biāo)記效率。2.染色制備(以CY3-NHS酯為例)將無(wú)水DMSO加入CY3-NHS酯小瓶中，制備成10mM儲(chǔ)備液。通過(guò)移液器或渦旋混合均勻計(jì)算。使用前需先使用縮合液(500μg/mL)(HY-D0178)活化另一個(gè)可進(jìn)行后續(xù)標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。

CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測(cè)和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。它具有出色的熒光性能和良好的生物相容性。Cy5屬于小分子染料，其*大發(fā)射波長(zhǎng)為670nm，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀，檢測(cè)通道一般是FL4通道。除流式細(xì)胞術(shù)外，Cy5同樣適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)。需注意的是，Cy5與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的非特異性結(jié)合多，實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。Cy5.5含有一個(gè)游離胺基,可與多種官能團(tuán)共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。激發(fā)和發(fā)射的最大值分別為678nm和694nm。Cy5.5已應(yīng)用于各種基于熒光的實(shí)驗(yàn)中。Cy5.5是一種遠(yuǎn)紅色(和近紅外)發(fā)射染料,是熒光測(cè)量的理想選擇。Cy5.5具有成本效益,且其標(biāo)記化學(xué)操作簡(jiǎn)單,適合于潛在的***藥物開(kāi)發(fā)Cy5.5標(biāo)記因子VIIa是用來(lái)想象**的。用這些靶向蛋白標(biāo)記的Cy5.5在**異種移植物上特異定位至少14天,但未結(jié)合的Cy5.5不能定位于任何異種移植或***。這種**血管內(nèi)皮細(xì)胞中抗組織因子的成像方法可用于檢測(cè)原發(fā)性**和轉(zhuǎn)移以及監(jiān)測(cè)體內(nèi)***反應(yīng)[1]。pH/溫度敏感磁性納米凝膠結(jié)合Cy5.5標(biāo)記乳鐵蛋白(Cy5.5-Lf-MPNA納米凝膠)是一種有前途的膠質(zhì)瘤術(shù)前MRI和術(shù)中熒光成像的對(duì)比劑[2]熒光染料，由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測(cè)標(biāo)記，其應(yīng)用于熒光探針，細(xì)胞染色等。

細(xì)胞培養(yǎng)后，需要對(duì)其生長(zhǎng)情況、形態(tài)甚至生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察。由于細(xì)胞小而復(fù)雜，若不借助適當(dāng)?shù)氖侄危y以觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu)，更難發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。目前，已有多種研究細(xì)胞的技術(shù)，從光學(xué)顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細(xì)胞化學(xué)法到免疫化學(xué)法。細(xì)胞染色是研究細(xì)胞生物學(xué)特征的一種常用手段，然而，對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)新手來(lái)說(shuō)，想要獲得一張漂亮的細(xì)胞染色圖并不容易。染色試劑不會(huì)選、細(xì)胞染色不均勻、染色時(shí)切片脫落等都是很常見(jiàn)的問(wèn)題。

細(xì)胞膜常用染料DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見(jiàn)的細(xì)胞膜染料（見(jiàn)表2），它們是一族親脂性的熒光染料，用于細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究。該系列染料進(jìn)入細(xì)胞膜后，會(huì)在整個(gè)細(xì)胞膜上側(cè)向擴(kuò)散，在比較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高，染色均一，熒光不易猝滅，無(wú)明顯細(xì)胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、造血干祖細(xì)胞等。 CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測(cè)和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。廣東熒光染料紅色

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。廣東熒光染料紅色

    小動(dòng)物***熒光成像技術(shù)是現(xiàn)***物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的一項(xiàng)重要技術(shù)，因其具有操作簡(jiǎn)單、實(shí)時(shí)直觀、靈敏度高、實(shí)驗(yàn)成本低等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)研究及藥物開(kāi)發(fā)等方面。納米材料在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，旨在解決傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)面臨的各種醫(yī)學(xué)挑戰(zhàn)，包括生物利用度差，靶向特異性受損，全身和***毒性等。納米材料具有很多與眾不同的優(yōu)點(diǎn)，比如多功能性、大的負(fù)載量、靶向性、血液循環(huán)時(shí)間長(zhǎng)等。納米材料在生物醫(yī)學(xué)中起著關(guān)鍵作用，可以有效攜帶成像探針、***劑或生物材料并傳遞至靶點(diǎn)，如特定的***、組織甚至細(xì)胞。光學(xué)成像主要包括生物發(fā)光（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，ＢＬＩ）和焚光成像（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，Ｆ１）兩種技術(shù)。前者利用焚光素酶基因（如ＦＬＵＣ，ＲＬＵＣ，ＧＬＵＣ）標(biāo)記細(xì)胞或ＤＮＡ，其表達(dá)產(chǎn)物與莖火蟲(chóng)素類底物反應(yīng)產(chǎn)生熒光。后者包括多種熒光蛋白基因（如ＧＦＰ，ＲＦＰ，ＹＦＰ等）、有機(jī)熒光染料、熒光上轉(zhuǎn)換納米粒子、量子點(diǎn)等的應(yīng)用。 廣東熒光染料紅色