所需的CY3-NHS酯的量取決于待標記蛋白的量，以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例：假設所需的標記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000)，用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯，得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL，詳細計算過程如下：1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150，000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.運行偶聯(lián)反應1)將室溫新鮮制備的10mg/mLCY3-NHS酯緩慢加入到0.5mL蛋白質(zhì)樣品中于溶液中，輕輕搖動混勻，然后短暫離心，將樣品收集于反應管底部。請勿混勻，否則2)將反應管安置避光處，在接下來的間隔輕輕蛋白水解60分鐘。10-15分鐘，輕輕翻轉(zhuǎn)幾次以充分混合5.偶聯(lián)偶聯(lián)物以下方案是使用SepHadexG-25柱封閉染料-偶聯(lián)偶聯(lián)物的范例。1)根據(jù)制造說明準備SepHadexG-25柱。2)將反應混合物(來自“Runconjugationreaction”)加載到SepHadexG-25柱的頂部。3)一旦樣品在頂部樹脂表面下方運行，立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需樣品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。FITC熒光染料標記方法。中國澳門熒光染料脂質(zhì)

    小動物***熒光成像技術(shù)是現(xiàn)***物醫(yī)學研究領域的一項重要技術(shù)，因其具有操作簡單、實時直觀、靈敏度高、實驗成本低等特點，已廣泛應用于生命科學、醫(yī)學研究及藥物開發(fā)等方面。納米材料在生物醫(yī)學領域得到廣泛應用，旨在解決傳統(tǒng)醫(yī)學面臨的各種醫(yī)學挑戰(zhàn)，包括生物利用度差，靶向特異性受損，全身和***毒性等。納米材料具有很多與眾不同的優(yōu)點，比如多功能性、大的負載量、靶向性、血液循環(huán)時間長等。納米材料在生物醫(yī)學中起著關鍵作用，可以有效攜帶成像探針、***劑或生物材料并傳遞至靶點，如特定的***、組織甚至細胞。光學成像主要包括生物發(fā)光（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，ＢＬＩ）和焚光成像（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，Ｆ１）兩種技術(shù)。前者利用焚光素酶基因（如ＦＬＵＣ，ＲＬＵＣ，ＧＬＵＣ）標記細胞或ＤＮＡ，其表達產(chǎn)物與莖火蟲素類底物反應產(chǎn)生熒光。后者包括多種熒光蛋白基因（如ＧＦＰ，ＲＦＰ，ＹＦＰ等）、有機熒光染料、熒光上轉(zhuǎn)換納米粒子、量子點等的應用。 中國澳門熒光染料脂質(zhì)小動物成像熒光染料能夠選擇性地與目標細胞或組織結(jié)合。

三：貼壁細胞染色1、將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，但要使表面保持濕潤。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。4、37℃孵育細胞2~20min，不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標記效果。5、吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次，每次用預溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5~10min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤。四：結(jié)果檢測樣品可在培養(yǎng)基中進行檢測，可通過熒光顯微鏡成像或流式細胞儀分析。

三、流式細胞儀分析1、取對數(shù)生長期的細胞，接種到孔板，過夜培養(yǎng)。2、如果要進行藥物刺激，在細胞中加入感興趣的藥物進行干預，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后，收集細胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細胞，37℃避光孵育15min或更長時間?！咀⒁狻浚河捎诩毎N類和實驗體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時間可以根據(jù)預實驗或參考文獻自行調(diào)整。4、用流式細胞儀檢測。

四、實驗案例1、取對數(shù)生長期A549細胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實驗操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細胞類型和細胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察. DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于細胞核染色，可將細胞核染成藍色。

D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產(chǎn)生典型的黃綠色光。該反應的 560 nm 化學發(fā)光在幾秒鐘內(nèi)達到峰值，當?shù)孜餆晒馑剡^量時，光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是用于研究和藥物篩選的流行報告基因。化學發(fā)光技術(shù)幾乎沒有背景，使得 luc 報告基因成為檢測低水平基因表達的理想選擇。標準閃爍計數(shù)器可以可靠地測量低至 0.02 pg 的熒光素酶。除了作為基因表達報告者的作用外，熒光素酶還常用于極其靈敏的 ATP 檢測中[1]。我們提供螢火蟲熒光素酶 (HY-P1004)、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B)。Cy5.5含有一個游離胺基,可與多種官能團共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。江西高分子熒光染料

Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）。中國澳門熒光染料脂質(zhì)

SUPERGreenI（10,000×DMSO溶液，電泳級）儲存條件及注意事項4℃避光可保存12個月。本品用DMSO溶解，因DMSO的熔點是18.5℃，使用前請放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點●無毒性：屬花菁類染料，容易生物降解，無致*毒性?！耢`敏度高：至少可檢出20pgDNA，高于EB染色法25～100倍?！裥旁氡雀撸簶悠窡晒庑盘枏?，背景信號低?！癫僮骱唵危簾o須脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察?！襁m用范圍廣：可適用于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場凝膠電泳和毛細管電泳等?！袷褂梅奖悖簩Ψ肿由飳W中常用的酶（如：Taq酶、反轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用?！窠?jīng)濟：價格比銀染便宜。中國澳門熒光染料脂質(zhì)