管可用于實(shí)驗(yàn)室的熒光團(tuán)數(shù)量眾多，但這些染料通常屬于以下三組之一：熒光染料:這些是用于在體外標(biāo)記生物相關(guān)分子的小型有機(jī)天然或合成熒光分子。該組中的一些熒光染料包括熒光素、溴化乙錠和花青。熒光蛋白:這些是較大的、生物制造的蛋白質(zhì)，由于它們的大分子結(jié)構(gòu)而發(fā)出熒光。GFP、RFP和YFP是屬于該組的一些染料。量子點(diǎn):這些高熒光合成納米晶體由半導(dǎo)體材料制成。隨著熒光基本特性的廣泛應(yīng)用和該領(lǐng)域的顯著進(jìn)步，已經(jīng)針對特定應(yīng)用和儀器開發(fā)和優(yōu)化了數(shù)百種活性熒光染料。同樣，多年來，大量復(fù)雜的熒光技術(shù)（例如，F(xiàn)RET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS）也在不斷發(fā)展。5(6)-FITC (Fluorescein 5(6)-isothiocyanate) 是一種胺活性衍生物的熒光染料.細(xì)胞核熒光染料高分子

為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術(shù)（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)，但使用熒光染料具有其獨(dú)特的優(yōu)勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數(shù)分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達(dá)到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進(jìn)行熒光測量時不會遇到這個問題，因?yàn)橹挥猩贁?shù)材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強(qiáng)大的協(xié)議，并且可以自動化用于高通量應(yīng)用。遼寧熒光染料Fluor 488D-熒光素鉀鹽南京星葉生物科技有限公司。

熒光染料標(biāo)記蛋白或肽技術(shù)是一種常見的蛋白質(zhì)體外標(biāo)記技術(shù)。除了GFP等熒光蛋白的融合表達(dá)外，目標(biāo)蛋白還可以通過熒光染料標(biāo)記直接進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)操作，如***跟蹤、細(xì)胞分選等。

FITC熒光標(biāo)記的原理是什么？

熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材料是指具有共軛雙鍵系統(tǒng)化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物。當(dāng)受到紫外線或藍(lán)紫光的照射時，它可以被刺激為刺激狀態(tài)。當(dāng)激發(fā)狀態(tài)恢復(fù)到基本狀態(tài)時，它會發(fā)出熒光。蛋白質(zhì)熒光標(biāo)記技術(shù)利用熒光材料的共價結(jié)合在目標(biāo)分子的基團(tuán)上，利用其熒光特性提供研究對象的信息。

蛋白熒光標(biāo)記技術(shù)是目前**為常見的蛋白體外標(biāo)記技術(shù)，利用級聯(lián)放大反應(yīng)原理，將極度敏感性且易于檢測的熒光素通過某個基團(tuán)吸附或共價結(jié)合后，標(biāo)記到特異性抗原或抗體分子上，應(yīng)用熒光顯微鏡觀察熒光標(biāo)記物因增強(qiáng)放大效應(yīng)而產(chǎn)生顏色、光譜等變化，以分析示蹤相應(yīng)抗體或抗原性質(zhì)與含量的方法。該技術(shù)在具有高度精確性的熒光顯微鏡下，借助高度靈敏性的熒光檢測，在各種生物過程中對目的蛋白進(jìn)行可視化，從而通過抗原抗體高度特異性免疫定量表達(dá)或在細(xì)胞研究中定位。蛋白熒光標(biāo)記已成為研究蛋白質(zhì)互作、酶活性、***示蹤以及細(xì)胞分選重要工具。蛋白標(biāo)記常用熒光染料隨著蛋白熒光標(biāo)記技術(shù)不斷發(fā)展，各類熒光素廣泛應(yīng)用于生物實(shí)驗(yàn)中，目前常用標(biāo)記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。南京星葉生物科技有限公司提供多種性價比高的各類活化熒光素，其熒光染料覆蓋波長范圍從350nm到790nm，例如Cy系列、SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）等，用于標(biāo)記抗體、多肽以及蛋白功能基團(tuán)，繼而生成分子探針，通過熒光成像進(jìn)行相應(yīng)檢測。DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于細(xì)胞核染色，可將細(xì)胞核染成藍(lán)色。

一、體外生物發(fā)光試驗(yàn)熒光素試劑的制備：D-熒光素，鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配置）1、用無菌水制備100X熒光素原液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin，potassiumsalt溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基圖像分析前，向細(xì)胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌，0.2μm注：成像前在37℃下對細(xì)胞進(jìn)行短時間孵育可增強(qiáng)信號。Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）。細(xì)胞核熒光染料高分子

動物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。細(xì)胞核熒光染料高分子

所需的CY3-NHS酯的量取決于待標(biāo)記蛋白的量，以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例：假設(shè)所需的標(biāo)記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000)，用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯，得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL，詳細(xì)計算過程如下：1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150，000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.運(yùn)行偶聯(lián)反應(yīng)1)將室溫新鮮制備的10mg/mLCY3-NHS酯緩慢加入到0.5mL蛋白質(zhì)樣品中于溶液中，輕輕搖動混勻，然后短暫離心，將樣品收集于反應(yīng)管底部。請勿混勻，否則2)將反應(yīng)管安置避光處，在接下來的間隔輕輕蛋白水解60分鐘。10-15分鐘，輕輕翻轉(zhuǎn)幾次以充分混合5.偶聯(lián)偶聯(lián)物以下方案是使用SepHadexG-25柱封閉染料-偶聯(lián)偶聯(lián)物的范例。1)根據(jù)制造說明準(zhǔn)備SepHadexG-25柱。2)將反應(yīng)混合物(來自“Runconjugationreaction”)加載到SepHadexG-25柱的頂部。3)一旦樣品在頂部樹脂表面下方運(yùn)行，立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需樣品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。細(xì)胞核熒光染料高分子