熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見(jiàn)光后，能把短波長(zhǎng)的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL(zhǎng)較長(zhǎng)的可見(jiàn)光波而反射出來(lái)，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨(dú)使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。其中復(fù)合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個(gè)供體及一個(gè)受體熒光物分子所組成。復(fù)合染料在受體分子的激發(fā)波長(zhǎng)被激發(fā)，在供體分子的發(fā)射波長(zhǎng)發(fā)射一個(gè)光子。熒光染料發(fā)展非常迅速，已開發(fā)的用于科研和臨床應(yīng)用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見(jiàn)光及紅外的整個(gè)光譜范圍。PI常用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測(cè)，常用于流式細(xì)胞儀分析。供應(yīng)熒光染料ICG

蛋白熒光標(biāo)記技術(shù)是目前**為常見(jiàn)的蛋白體外標(biāo)記技術(shù)，利用級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)原理，將極度敏感性且易于檢測(cè)的熒光素通過(guò)某個(gè)基團(tuán)吸附或共價(jià)結(jié)合后，標(biāo)記到特異性抗原或抗體分子上，應(yīng)用熒光顯微鏡觀察熒光標(biāo)記物因增強(qiáng)放大效應(yīng)而產(chǎn)生顏色、光譜等變化，以分析示蹤相應(yīng)抗體或抗原性質(zhì)與含量的方法。該技術(shù)在具有高度精確性的熒光顯微鏡下，借助高度靈敏性的熒光檢測(cè)，在各種生物過(guò)程中對(duì)目的蛋白進(jìn)行可視化，從而通過(guò)抗原抗體高度特異性免疫定量表達(dá)或在細(xì)胞研究中定位。蛋白熒光標(biāo)記已成為研究蛋白質(zhì)互作、酶活性、***示蹤以及細(xì)胞分選重要工具。蛋白標(biāo)記常用熒光染料隨著蛋白熒光標(biāo)記技術(shù)不斷發(fā)展，各類熒光素廣泛應(yīng)用于生物實(shí)驗(yàn)中，目前常用標(biāo)記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。南京星葉生物科技有限公司提供多種性價(jià)比高的各類活化熒光素，其熒光染料覆蓋波長(zhǎng)范圍從350nm到790nm，例如Cy系列、SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）等，用于標(biāo)記抗體、多肽以及蛋白功能基團(tuán)，繼而生成分子探針，通過(guò)熒光成像進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)。細(xì)胞熒光染料IR825D-熒光素鉀鹽南京星葉生物科技有限公司。

三：貼壁細(xì)胞染色1、將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過(guò)量培養(yǎng)液，但要使表面保持濕潤(rùn)。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。4、37℃孵育細(xì)胞2~20min，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同?？梢?0min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。5、吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5~10min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤(rùn)。四：結(jié)果檢測(cè)樣品可在培養(yǎng)基中進(jìn)行檢測(cè)，可通過(guò)熒光顯微鏡成像或流式細(xì)胞儀分析。

三、流式細(xì)胞儀分析1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，接種到孔板，過(guò)夜培養(yǎng)。2、如果要進(jìn)行藥物刺激，在細(xì)胞中加入感興趣的藥物進(jìn)行干預(yù)，繼續(xù)培養(yǎng)一定時(shí)間后，收集細(xì)胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細(xì)胞，37℃避光孵育15min或更長(zhǎng)時(shí)間?！咀⒁狻浚河捎诩?xì)胞種類和實(shí)驗(yàn)體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時(shí)間可以根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)或參考文獻(xiàn)自行調(diào)整。4、用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

四、實(shí)驗(yàn)案例1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無(wú)血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細(xì)胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察. Super Flour 系列在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜和疏水性組織。這是一類環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱)結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度***增強(qiáng)。它們具有很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中，這種染料會(huì)在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，導(dǎo)致在其比較好濃度條件下，將整個(gè)細(xì)胞染色。它們不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI可以分別與標(biāo)準(zhǔn)的FITC和TRITC濾光器一同使用。其中，DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā)，并且具有比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)和發(fā)射光波長(zhǎng)，為標(biāo)記細(xì)胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常***的替代品。DiR在***成像或者示蹤中非常有用，因?yàn)樗鼈兯l(fā)射的紅外光可以高效地穿過(guò)細(xì)胞和組織，并且在紅外光范圍內(nèi)，其本底熒光水平很低。Hoechst 33342是一種可透過(guò)細(xì)胞膜并對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。內(nèi)蒙古光聲熒光染料

花青類熒光染料屬于共振染料，其特征在于具有離域電荷的氮原子（兩個(gè)氮原子）之間的聚甲炔染料。供應(yīng)熒光染料ICG

D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產(chǎn)生典型的黃綠色光。該反應(yīng)的 560 nm 化學(xué)發(fā)光在幾秒鐘內(nèi)達(dá)到峰值，當(dāng)?shù)孜餆晒馑剡^(guò)量時(shí)，光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是用于研究和藥物篩選的流行報(bào)告基因。化學(xué)發(fā)光技術(shù)幾乎沒(méi)有背景，使得 luc 報(bào)告基因成為檢測(cè)低水平基因表達(dá)的理想選擇。標(biāo)準(zhǔn)閃爍計(jì)數(shù)器可以可靠地測(cè)量低至 0.02 pg 的熒光素酶。除了作為基因表達(dá)報(bào)告者的作用外，熒光素酶還常用于極其靈敏的 ATP 檢測(cè)中[1]。我們提供螢火蟲熒光素酶 (HY-P1004)、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B)。供應(yīng)熒光染料ICG