三：貼壁細(xì)胞染色1、將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，但要使表面保持濕潤。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。4、37℃孵育細(xì)胞2~20min，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同。可以20min作為起始孵育時(shí)間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。5、吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，孵育5~10min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤。四：結(jié)果檢測樣品可在培養(yǎng)基中進(jìn)行檢測，可通過熒光顯微鏡成像或流式細(xì)胞儀分析。Super Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）琥珀酰亞胺酯熒光染料。甘肅流式細(xì)胞熒光染料

藻紅蛋白-藻紅蛋白(PE)是一種紅色蛋白色素復(fù)合物，屬于藻膽蛋白家族。它可以在紅藻和隱植物中找到，它作為葉綠素色素的附屬物。在生物科學(xué)中，熒光團(tuán)可以與蛋白質(zhì)結(jié)合，例如用于抗原檢測的抗體等，因?yàn)樗軌虬l(fā)出明亮的熒光。由于熒光團(tuán)往往會很快發(fā)生光漂白，因此很少在熒光顯微鏡中使用。它經(jīng)常用于流式細(xì)胞術(shù)?！鶆e藻藍(lán)蛋白(APC)-與藻紅蛋白一樣，別藻藍(lán)蛋白也屬于藻膽蛋白家族，是從紅藻中分離出來的。在594和633nm的激光線激發(fā)下，熒光團(tuán)的比較大吸光度在650nm處，而熒光發(fā)射峰在66nm處。與熒光素偶聯(lián)物相比，熒光團(tuán)的靈敏度已顯示高5至10倍，并具有許多其他有益特性，包括大斯托克斯位移、高水溶性、長波長發(fā)射和耐猝滅。雖然別藻藍(lán)蛋白通常不用于需要光穩(wěn)定性的應(yīng)用，但它***用于流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、微陣列等過程以及各種依賴高靈敏度的應(yīng)用。國產(chǎn)熒光染料DIL熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。

熒光染料***用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中，如流式細(xì)胞術(shù)、熒光顯微鏡和免疫組化等，其中熒光淬滅是一個(gè)關(guān)鍵的考量因素，因?yàn)樗苯佑绊懙綄?shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。FITC（異硫氰酸熒光素）是一種常用的綠色熒光染料，具有較高的熒光量子產(chǎn)率和激發(fā)效率。然而，F(xiàn)ITC的一個(gè)主要缺點(diǎn)是容易受到環(huán)境因素的影響，如pH值、溫度、溶劑和離子強(qiáng)度等，從而導(dǎo)致熒光淬滅。此外，F(xiàn)ITC的光穩(wěn)定性相對較低，長時(shí)間的光照會導(dǎo)致其熒光強(qiáng)度降低。CY5.5是一種遠(yuǎn)紅外熒光染料，具有較長的激發(fā)和發(fā)射波長，因此適用于多色熒光標(biāo)記和深組織成像。CY5.5相對于FITC來說，具有更好的光穩(wěn)定性，不易受到環(huán)境因素的影響。此外，CY5.5的熒光量子產(chǎn)率也較高，使其在熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出色。AlexaFluor647是另一種常用的紅色熒光染料，具有與CY5.5相似的長波長激發(fā)和發(fā)射特性。AlexaFluor647的優(yōu)點(diǎn)是光穩(wěn)定性較好，可以承受長時(shí)間的光照而不易淬滅。此外，它在多種溶劑和pH值范圍內(nèi)都能保持穩(wěn)定的熒光性能，因此在復(fù)雜的生物樣本中表現(xiàn)出色。

南京星葉生物科技有限公司Super Fluor系列（效果同Alexa Fluor 系列），質(zhì)優(yōu)價(jià)廉。

花青類熒光染料屬于共振染料，其特征在于具有離域電荷的氮原子（兩個(gè)氮原子）之間的聚甲炔染料。由于與生物分子的低非特異性結(jié)合以及明亮的熒光，花青類熒光染料已成為一些當(dāng)下流行的用于標(biāo)記核酸的熒光染料?；ㄇ囝惾玖戏譃閮纱箢悾悍腔腔ㄇ囝惾玖?該組中的一些染料包括cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7和cy7.5。在大多數(shù)情況下，這些染料的特點(diǎn)是水溶性低，但胺的鹽酸鹽和酰肼除外。它們首先溶解在有機(jī)溶劑（共溶劑）中，然后在生物分子標(biāo)記期間添加到含有生物分子的溶液中。而“Cy”**花青，***個(gè)數(shù)字**存在于亞油啉基團(tuán)之間的碳原子數(shù)。另一方面，添加0.5后綴以表示苯并稠合花青。這些熒光染料通常用于有機(jī)介質(zhì)?；腔惢ㄇ嗳玖?該組由磺基-Cy3、磺基-Cy5和磺基-Cy7組成。顧名思義，這些花青的特征是一個(gè)磺基，它有助于染料分子在水相中的溶解。與非磺化花青相比，這些花青更易溶于水，因此不需要溶解在有機(jī)溶劑中進(jìn)行標(biāo)記。磺化花青通常用于標(biāo)記疏水性蛋白質(zhì)、水溶液中的納米顆粒以及可能被DMSO或DMF變性的敏感蛋白質(zhì)。兩組染料均可用于標(biāo)記以下生物分子：肽、寡核苷酸和DNA、抗體、可溶性蛋白質(zhì)。CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。

Cy5:激發(fā)波長633/635nm，比較大發(fā)射波長670nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL4通道檢測;3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)同樣為小分子染料，非常適合需小分子染料的流式細(xì)胞術(shù)，熒光強(qiáng)度低于APC。5)與單核和粒細(xì)胞非特異性結(jié)合多，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

5、PE:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長575nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氯離子激光器的流式細(xì)胞儀:2)在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測;3)其熒光泯滅性強(qiáng)，不適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)，但適用于激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。

6、PE-TR:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長615nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測;2)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。

7、PE-AlexaFluor610:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長628nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測;2)熒光強(qiáng)度高;3)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。 目前常用標(biāo)記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。廣州熒光染料納米

D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。甘肅流式細(xì)胞熒光染料

為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術(shù)（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)，但使用熒光染料具有其獨(dú)特的優(yōu)勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數(shù)分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時(shí)也可以令人滿意地達(dá)到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動(dòng)態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進(jìn)行熒光測量時(shí)不會遇到這個(gè)問題，因?yàn)橹挥猩贁?shù)材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強(qiáng)大的協(xié)議，并且可以自動(dòng)化用于高通量應(yīng)用。甘肅流式細(xì)胞熒光染料