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羰花青染料***用作Di來(lái)標(biāo)記細(xì)胞、細(xì)胞器、脂質(zhì)體、病毒和脂蛋白。長(zhǎng)鏈羰花青包括DiO(DiOC18(3))、DiI(DiIC18(3))、DiD(DiIC18(5))和DiR,以及二烷基氨基苯乙烯基染料DiA(4-Di-16-ASP)用于標(biāo)記膜和其他疏水結(jié)構(gòu)。DiIC16(3)具有比DiI(C18)更短的烷基取代基(C16)。它們?cè)谥|(zhì)環(huán)境中具有極高的消光系數(shù)、環(huán)境依賴性熒光和短的激發(fā)態(tài)壽命。它們?cè)谑覝叵率怯蜖钗?,在水中發(fā)出微弱熒光,但當(dāng)摻入膜中或與親脂性生物分子結(jié)合時(shí),它們發(fā)出高熒光且相當(dāng)耐光。這些光學(xué)特性使它們成為細(xì)胞質(zhì)膜染色的理想選擇。一旦應(yīng)用于細(xì)胞,這些染料就會(huì)在質(zhì)膜內(nèi)橫向擴(kuò)散,導(dǎo)致整個(gè)細(xì)胞染色[1]。DiO、DiI、DiD和DiR呈現(xiàn)出不同的綠色、橙色、紅色和紅外熒光,從而促進(jìn)活細(xì)胞的多色成像和流式細(xì)胞術(shù)分析。DiO和DiI可分別與標(biāo)準(zhǔn)FITC和TRITC過(guò)濾器一起使用。其中DiI及其類似物是**常用的,因?yàn)樗鼈兺ǔ1憩F(xiàn)出非常低的細(xì)胞毒性。此外,DiI***用于測(cè)定LDL和HDL等脂蛋白。親脂性氨基苯乙烯基染料DiA也常用于神經(jīng)元示蹤[2]。DiD,DiO,DiI,DiR和DiS 染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1,F(xiàn)L2,F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測(cè)。青海熒光染料熒光素酶
三:貼壁細(xì)胞染色1、將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)于無(wú)菌蓋玻片上。2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片,吸走過(guò)量培養(yǎng)液,但要使表面保持濕潤(rùn)。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液,輕輕晃動(dòng)使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。4、37℃孵育細(xì)胞2~20min,不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時(shí)間不同??梢?0min作為起始孵育時(shí)間,之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。5、吸干染料工作液,用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次,每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞,孵育5~10min,然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤(rùn)。四:結(jié)果檢測(cè)樣品可在培養(yǎng)基中進(jìn)行檢測(cè),可通過(guò)熒光顯微鏡成像或流式細(xì)胞儀分析。青海熒光染料熒光素酶5(6)-FITC (Fluorescein 5(6)-isothiocyanate) 是一種胺活性衍生物的熒光染料.
PI是一種可對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑,它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。常用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測(cè),常用于流式細(xì)胞儀分析。盡管PI不能通過(guò)活細(xì)胞膜,但卻能穿過(guò)破損的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。PI經(jīng)常被用來(lái)與Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用,能同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞染色。PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為535nm和615nm。2.染色過(guò)程(1)將1/10培養(yǎng)基體積的PI染色液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中(也可以用1/10濃度的PI緩沖液代替培養(yǎng)基)。(2)在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10~20分鐘。(3)用PBS或合適的緩沖液洗滌細(xì)胞兩次。(4)用535nm激發(fā)波長(zhǎng),615nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光器的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。儲(chǔ)存條件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。注意事項(xiàng):PI對(duì)人體有刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
FITC熒光標(biāo)記蛋白的應(yīng)用及特點(diǎn):活性熒光染料,如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、羅丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料,可用于標(biāo)記抗體或蛋白質(zhì)功能基團(tuán),生成分子探針,并通過(guò)熒光成像進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)用熒光染料化學(xué)標(biāo)記特異性抗體或其他純化生物分子時(shí),它們成為用于檢測(cè)靶抗原或相互作用配偶體的熒光探針,用于細(xì)胞成像、流式細(xì)胞手術(shù)、蛋白質(zhì)痕跡和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。由于熒光標(biāo)記物具有無(wú)放射物污染、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn),在蛋白質(zhì)功能研究、藥物篩選等許多研究領(lǐng)域得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。
南京星葉生物科技有限公司Super Fluor 系列(效果同Alexa Fluor系列)
且Super Fluor活化酯(與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同) 動(dòng)物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。
Hoechst33342是一種可透過(guò)細(xì)胞膜并對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑,它在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。Hoechst33342常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst33342-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為350nm和460nm??扇苡谒?.染色程序:(1)用PBS或合適的緩沖液制備10~50μMHoechst33342染料。(2)將1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積的Hoechst染料溶液加入細(xì)胞培養(yǎng)物中(可以用1/10濃度的Hoechst染料緩沖液代替培養(yǎng)基)。(3)在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10~20分鐘。(4)用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。(5)用帶有350nm激發(fā)波長(zhǎng),460nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。南京星葉生物熒光染料標(biāo)記蛋白。流式細(xì)胞熒光染料納米
生物發(fā)光是利用熒光素酶報(bào)告基因在體內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。青海熒光染料熒光素酶
SUPERGreenI(10,000×DMSO溶液,電泳級(jí))儲(chǔ)存條件及注意事項(xiàng)4℃避光可保存12個(gè)月。本品用DMSO溶解,因DMSO的熔點(diǎn)是18.5℃,使用前請(qǐng)放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點(diǎn)●無(wú)毒性:屬花菁類染料,容易生物降解,無(wú)致*毒性?!耢`敏度高:至少可檢出20pgDNA,高于EB染色法25~100倍?!裥旁氡雀撸簶悠窡晒庑盘?hào)強(qiáng),背景信號(hào)低?!癫僮骱?jiǎn)單:無(wú)須脫色或沖洗,即可直接用紫外凝膠透射儀或可見(jiàn)光透射儀觀察?!襁m用范圍廣:可適用于多種凝膠電泳方法:瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場(chǎng)凝膠電泳和毛細(xì)管電泳等?!袷褂梅奖悖簩?duì)分子生物學(xué)中常用的酶(如:Taq酶、反轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等)沒(méi)有抑制作用?!窠?jīng)濟(jì):價(jià)格比銀染便宜。青海熒光染料熒光素酶