與花青和羅丹明染料一樣，熒光素也是一種有機染料。熒光素的比較大吸收波長為494nm，比較大發(fā)射波長為521nm（通常吸收藍色范圍內(nèi)的光并發(fā)射綠色范圍內(nèi)的光），熒光素是一種高熒光物質(zhì)。即使在非常少量的情況下也可以檢測到它，并且在與抗體結(jié)合時用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣，熒光素價格低廉且易于使用，使其成為生物學研究中很受歡迎的染料之一。與大多數(shù)其他染料不同，熒光素在水溶液中是無毒的。因此，它是極少數(shù)用作地下水示蹤劑的染料之一。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。中國香港熒光染料APC

異硫氰酸熒光素(FITC)是一種有機熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細胞術(shù)中。在495/517nm處，該染料會產(chǎn)生激發(fā)/發(fā)射峰值，并可借助異硫氰酸鹽反應(yīng)基團與不同抗體結(jié)合，該基團可以和蛋白質(zhì)上的氨基、巰基、咪唑、酪氨酰、羰基等基團相結(jié)合。而它的基本成分——熒光素，其摩爾質(zhì)量為332g/mol，常被用作熒光示蹤劑。FITC(389g/mol)是用于熒光顯微鏡技術(shù)的首批染料，且其被當成AlexaFluor®488等后續(xù)熒光染料的發(fā)端。該染料的熒光活性取決于它的大共軛芳香電子系統(tǒng)，而該系統(tǒng)受藍色光譜中的光所激發(fā)。經(jīng)常與FITC同時使用的另一種染料是與其相似的TRITC[四甲基羅丹明-5(6)-異硫氰酸]。與FITC相反，TRITC并非熒光素，而是羅丹明家族的衍生物。羅丹明也具有一個大的共軛芳香電子系統(tǒng)，正是該系統(tǒng)引發(fā)了它們的熒光行為。還有一點與FITC相反，TRITC(479g/mol)由比較**長為550nm的綠色光譜中的光所激發(fā)，它的比較大發(fā)射波長為573nm。與蛋白質(zhì)（例如，抗體）結(jié)合也基于異硫氰酸鹽反應(yīng)基團。北京熒光染料IR825DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細胞膜染料，它們是一族親脂性的熒光染料，用于細胞的形態(tài)學和結(jié)構(gòu)研究。

光熱***是另一個吲哚菁綠的重要應(yīng)用領(lǐng)域。在光熱***中，吲哚菁綠可以被引入**組織，并在近紅外激光的照射下吸收光能轉(zhuǎn)化為熱能，從而使**組織受到熱損傷，達到***的效果。吲哚菁綠的熒光性質(zhì)使得其在光熱***中具有很高的選擇性，可以精確地破壞**組織而對正常組織幾乎沒有影響。這種精細的***方式有助于減少***的副作用，提高***效果。吲哚菁綠在生物識別和藥物輸送方面也有廣泛的應(yīng)用。在生物識別中，吲哚菁綠可以與特定的生物分子結(jié)合，通過檢測其熒光信號來實現(xiàn)對這些生物分子的定量分析。這種技術(shù)在生物醫(yī)學研究、藥物篩選和疾病診斷中具有重要的意義。另外，吲哚菁綠還可以作為藥物輸送系統(tǒng)的一部分，將藥物包裹在其分子結(jié)構(gòu)中，并通過光***釋放藥物，實現(xiàn)對疾病靶點的精確***。吲哚菁綠作為一種具有優(yōu)良綠色溶解度的熒光染料，在醫(yī)學和生物領(lǐng)域發(fā)揮著重要的作用。它的應(yīng)用領(lǐng)域涉及醫(yī)學影像學、光熱***、生物識別和藥物輸送等方面，并且具有較高的選擇性和精細性。隨著科學技術(shù)的不斷進步，相信吲哚菁綠將在未來更***地應(yīng)用于臨床實踐中，為人類的健康和醫(yī)學科研做出更大的貢獻。

二、***成像分析：D-熒光素，鉀鹽，D-PBS,不含鈣、鎂1、配制溶液使用無菌D-PBS（w/oCa2+;Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液（15mg/ml），0.22μm濾膜過濾除菌（避光），分裝后于-20℃或-80℃冷凍保存，避免反復凍融。使用時4℃融化，實驗前平衡至室溫（避光）2、注射量取決于注射方式，具體如下：注射方式劑量靜脈注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液腹腔注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液肌肉注射（27gauge針頭）50μl，濃度為1-2mg/ml熒光素工作液鼻內(nèi)注射（pipette）50μl，濃度為3mg/ml熒光素工作液3、注射入體內(nèi)10-20min（待光信號達到**強穩(wěn)定平臺期），再進行成像分析吲哚菁綠在生物識別和藥物輸送方面也有廣泛的應(yīng)用。

羅丹明123一種可對活細胞線粒體染色的細胞染色試劑。羅丹明123可透過細胞膜且在活細胞的線粒體內(nèi)聚集，并發(fā)出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測線粒體膜電位，也常用于細胞凋亡檢測。由于細胞內(nèi)ATP的量與羅丹明123的熒光強度之間有相關(guān)性，此熒光染料被應(yīng)用于檢測細胞內(nèi)的ATP。羅丹明123的比較大激發(fā)波長為507nm，比較大發(fā)射波長為525nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現(xiàn)黃綠色熒光。

一：工作液配制用緩沖液或者預熱的培養(yǎng)液直接稀釋儲存液到需要的工作液濃度（1～20μM），充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據(jù)自身實驗體系進行調(diào)整?！咀⒁狻浚簩τ诩毎麑嶒?，要控制好總體稀釋倍數(shù)，DMSO在培養(yǎng)液中的濃度不能超過0.1%，以避免DMSO對細胞的影響。

二：熒光顯微鏡觀察1、用載玻片準備細胞。細胞數(shù)目應(yīng)為5×104～5×105個/mL。2、在載玻片上孵育細胞，用PBS或HBSS洗滌細胞。3、將Rhodamine123工作液加入載玻片并在37℃下孵育30min至1小時。4、去除Rhodamine123溶液并用培養(yǎng)液洗滌細胞（洗滌細胞后如果要固定，加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15～20min，接著用PBS洗滌）。5、熒光顯微鏡觀察細胞。 FITC熒光染料標記方法。河南熒光染料DAPI

Super Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）琥珀酰亞胺酯熒光染料。中國香港熒光染料APC

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當與細胞膜結(jié)合后其熒光強度**增強，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，比較好濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在***成像中用來示蹤。中國香港熒光染料APC