**近一項(xiàng)與抗血管生成基因傳遞高度相關(guān)的發(fā)現(xiàn)是,陽離子脂質(zhì)體(CLs)選擇性地靶向**的血管系統(tǒng)。陰離子或電中性脂質(zhì)體沒有發(fā)現(xiàn)這種作用。Campbell和他的同事[95]發(fā)現(xiàn),與電中性脂質(zhì)體相比,使用CLs在**血管內(nèi)皮細(xì)胞(VECs)中積累更多,CLs通過添加5mol%聚乙二醇來穩(wěn)定。在兩種人類**類型(LS174T和MCAIV)和兩個(gè)位置(顱窗和背側(cè)皮膚褶腔)中發(fā)現(xiàn)了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的,這可能與該技術(shù)是否足以根除足夠數(shù)量的**VECs以實(shí)現(xiàn)**消退反應(yīng)有關(guān)。有趣的是,注射后24小時(shí),脂質(zhì)體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級(jí)脂質(zhì)體囊泡中的技術(shù),開發(fā)出了Gemate系列轉(zhuǎn)染試劑。江蘇神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
PHP是由天然來源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質(zhì))制成的,是***個(gè)用作基因載體的聚酯。在生理環(huán)境中,PHP可以在不到兩個(gè)小時(shí)的時(shí)間內(nèi)失去其初始分子量的50%。然而,PHP完全分解為其等效單體需要三個(gè)月的時(shí)間,分解產(chǎn)物是單體羥脯氨酸。雖然PHP酯在溶液中單獨(dú)存在時(shí)降解很快,但與DNA絡(luò)合時(shí)更穩(wěn)定。將PHP酯/pSV-gal復(fù)合物轉(zhuǎn)染CPAE細(xì)胞,測定PHP酯作為基因傳遞載體的活性。由于聚L-賴氨酸是**常用的基因轉(zhuǎn)運(yùn)聚合物,PHP酯的轉(zhuǎn)染效率與聚L-賴氨酸相當(dāng)。轉(zhuǎn)染效果隨著PHP酯濃度高于DNA濃度而增加。PHP酯轉(zhuǎn)染細(xì)胞的能力不受FBS存在的影響。結(jié)果表明,PHP酯是一種潛在的基因載體。江西干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑是由非離子核酸與陽離子脂質(zhì)體(CLs)表面結(jié)合,形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。
納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染,但似乎找到一種既能改善基因表達(dá)又不影響細(xì)胞、不對(duì)細(xì)胞造成損害的比較好技術(shù)也至關(guān)重要。納米顆粒參與內(nèi)皮運(yùn)輸?shù)哪芰κ蛊淠軌蚓脑O(shè)計(jì)**精確的方法,將基因結(jié)構(gòu)靶向到特定的作用位置。來自不同化合物和元素的納米顆粒的作用方式與轉(zhuǎn)染的非病毒載體相同,這使它們能夠通過內(nèi)吞作用將DNA運(yùn)輸過細(xì)胞膜。DNA被包裹起來,很容易從核內(nèi)體中釋放出來,也被核酸酶保護(hù)著不被消化。由于有許多不同種類的納米顆粒,找到**適合轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞的納米顆粒是至關(guān)重要的。將納米顆粒與其他化合物連接成多功能、復(fù)雜的運(yùn)輸單元,可以提高穿越細(xì)胞膜和細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)男?。將蛋白質(zhì)或多肽結(jié)合到納米顆粒上,根據(jù)細(xì)胞類型的不同,轉(zhuǎn)染效率提高了5到10倍。
目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無法深入穿透組織和***,如實(shí)體瘤和大腦。通常情況下,只能到達(dá)并轉(zhuǎn)染細(xì)胞的外層,從而導(dǎo)致***效果不佳。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV),一種人類**病原體,似乎通過劫持**微環(huán)境中的外泌體進(jìn)行細(xì)胞間通訊來克服這一點(diǎn)。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm),起源于內(nèi)吞。在被釋放到細(xì)胞外環(huán)境后,由于其表面存在細(xì)胞識(shí)別分子,它們可以與鄰近細(xì)胞融合。外泌體外泌體是細(xì)胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號(hào)因子的載體,通過經(jīng)歷細(xì)胞內(nèi)化和釋放的幾個(gè)周期,能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細(xì)胞分泌,包括腫瘤細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞、上皮細(xì)胞和神經(jīng)元。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。這可以通過靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯(lián)蛋白)并啟動(dòng)脂質(zhì)體和外泌體之間的融合事件來實(shí)現(xiàn)。在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序,這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。
此外,病毒濃度被認(rèn)為是影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的另一個(gè)因素。在Haas等人的評(píng)估中測試的其他幾個(gè)參數(shù)中,即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構(gòu)建,纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)培養(yǎng)基中添加多陽離子硫酸魚精蛋白,只有病毒滴度似乎與病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率直接相關(guān)。轉(zhuǎn)染介質(zhì)的條件也可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。例如,在轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中,使用胎牛血清比牛血清產(chǎn)生更好的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。同樣,研究表明,deae-葡聚糖等多陽離子可以比較大限度地減少帶負(fù)電荷細(xì)胞之間的排斥力,并促進(jìn)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)。影響化學(xué)轉(zhuǎn)染效率的因素作為一般指導(dǎo)原則,建議使用早期傳代的細(xì)胞以獲得良好的轉(zhuǎn)染效率,特別是涉及原代或干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。江蘇神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
影響物理轉(zhuǎn)染或機(jī)械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。江蘇神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑
在7種轉(zhuǎn)染試劑(DAC-30、DC-30、Lipofectin、LipofectAMINEPLUS、Effectene、FuGene 6和superect)中,F(xiàn)uGene 6轉(zhuǎn)染HASMCs和α-10 SMCs的效率比較高。在這兩種細(xì)胞系中,superect產(chǎn)生的細(xì)胞毒性作用比較高,其次是DAC-30和Lipofectamine Plus,而FuGene 6被認(rèn)為對(duì)細(xì)胞系相對(duì)安全。在另一項(xiàng)比較人類和動(dòng)物來源的不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染結(jié)果的研究中,豬氣管上皮細(xì)胞(PTE)被Effectene、Lipofectamine Plus和PEI等轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染的效率高于人類氣管上皮細(xì)胞(HTE)?;瘜W(xué)轉(zhuǎn)染后,轉(zhuǎn)染后的HTE也表現(xiàn)出比PTE更低的活力。兩項(xiàng)被引用研究的綜合結(jié)果認(rèn)為動(dòng)物細(xì)胞系可能比人類細(xì)胞系更有效地轉(zhuǎn)染。懸浮細(xì)胞通常被認(rèn)為比貼壁細(xì)胞更難轉(zhuǎn)染,因?yàn)檗D(zhuǎn)染復(fù)合物對(duì)細(xì)胞的潛在附著減少懸浮細(xì)胞表面。然而,一項(xiàng)比較Xfect、Lipofectamine2000、Nanofectamin、TransIT-X2和TransIT-2020效率的研究表明,除了Xfect之外,所有試劑轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞的效率都高于貼壁細(xì)胞(Tammetal.,2016)。然而,相反觀察結(jié)果背后的原因在很大程度上仍不清楚,未來可能會(huì)進(jìn)一步探索。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例江蘇神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑