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與花青和羅丹明染料一樣,熒光素也是一種有機(jī)染料。熒光素的比較大吸收波長(zhǎng)為494nm,比較大發(fā)射波長(zhǎng)為521nm(通常吸收藍(lán)色范圍內(nèi)的光并發(fā)射綠色范圍內(nèi)的光),熒光素是一種高熒光物質(zhì)。即使在非常少量的情況下也可以檢測(cè)到它,并且在與抗體結(jié)合時(shí)用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣,熒光素價(jià)格低廉且易于使用,使其成為生物學(xué)研究中很受歡迎的染料之一。與大多數(shù)其他染料不同,熒光素在水溶液中是無毒的。因此,它是極少數(shù)用作地下水示蹤劑的染料之一。南京星葉生物科技有限公司Super Fluor系列(效果同Alexa Fluor 系列)。新疆熒光染料水溶
選擇熒光染料時(shí)要考慮那些因素:激發(fā)波長(zhǎng)處的消光系數(shù)應(yīng)盡可能高:消光系數(shù)是衡量可以吸收多少光子的量度。量子產(chǎn)率應(yīng)該盡可能高:這是吸收光子與發(fā)射光子的比率。消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積就是亮度。熒光染料應(yīng)該是光穩(wěn)定的:遺憾的是,比較不同公司染料的光穩(wěn)定性的研究并不多。光致變色行為:對(duì)于STORM實(shí)驗(yàn),您需要一個(gè)閃爍的熒光團(tuán)。但是,對(duì)于分子跟蹤實(shí)驗(yàn),您***不想要閃爍的熒光團(tuán)?;?死細(xì)胞滲透性。您想要的反應(yīng)側(cè)基(例如HaloTag、抗體等)。當(dāng)您使用多個(gè)熒光探針時(shí),尤其是當(dāng)您量化共定位時(shí),請(qǐng)謹(jǐn)慎處理其他顏色通道中的滲色。單獨(dú)測(cè)試所有熒光探針以評(píng)估滲透。新疆熒光染料水溶染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族,用于標(biāo)記細(xì)胞膜和疏水性組織。
使用螢火蟲熒光素酶(Fluc)作為報(bào)告基因和 D-熒光素作為底物的生物發(fā)光成像(BLI)是目前應(yīng)用*****的技術(shù)。將總信號(hào)強(qiáng)度相對(duì)于 D-熒光素注射后的時(shí)間進(jìn)行繪制,以生成時(shí)間-強(qiáng)度曲線。除了峰值信號(hào)外,還確定注射 D-熒光素后固定時(shí)間點(diǎn)(5、10、15 和 20 分鐘)的信號(hào)作為峰值信號(hào)的替代。給定時(shí)間-強(qiáng)度曲線中的信號(hào)針對(duì)曲線中的峰值信號(hào)進(jìn)行歸一化,以表示 D-熒光素注射后時(shí)間變化的模式[3]。每克體重注射 10 μL D-熒光素(腹膜內(nèi)或靜脈注射)儲(chǔ)備液:對(duì)于 20 g 小鼠,標(biāo)準(zhǔn) 150 mg/kg 注射通常約為 200 μL。在室溫下解凍 D-熒光素(鉀鹽或鈉鹽)并溶解在 dPBS(不含鈣或鎂)中,**終濃度為 15 mg/mL。通過吸取 5-10 mL 無菌水來預(yù)濕 0.22 μm 過濾器。
注:建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,從而確定比較高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲(chǔ)存液過濾除菌后,可以-20℃或-80℃分裝凍存,避免反復(fù)凍融。如果有條件,對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸?,穩(wěn)定性和保存時(shí)間更長(zhǎng)。 注射方式,動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射,因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線,確定比較好信號(hào)平臺(tái)期和比較好的檢測(cè)時(shí)間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒有差別,兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來看,鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽,尤其是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。兩者功效相同。 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。吲哚菁綠(Indocyanine Green,簡(jiǎn)稱ICG)是一種廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域的熒光染料。
一種發(fā)光雜環(huán)化合物,存在于生物發(fā)光的生物體中,如螢火蟲。在含有三磷酸腺苷的情況下,通過熒光素酶氧化脫羧產(chǎn)生光??捎糜跓晒馑孛干锇l(fā)光成像和細(xì)胞高通量篩選應(yīng)用。D-熒光素(D-Luciferin)是螢火熒光素酶底物,其量子效率為0.88,是Luminol的20倍。反應(yīng)原理:首先,在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應(yīng),接著它被氧化形成二氧雜環(huán)丁烷結(jié)構(gòu)并發(fā)出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發(fā)光用于ATP監(jiān)控以測(cè)定細(xì)胞活力以及細(xì)菌計(jì)數(shù)。它還用于報(bào)告基因檢測(cè)。可與小動(dòng)物***成像系統(tǒng)配套使用,用于標(biāo)記LUC基因后的體內(nèi)***熒光檢測(cè)。D-熒光素游離酸(D-Luciferin,freeacid)、D-熒光素鉀鹽(D-Luciferin,potassiumsalt)和D-熒光素鈉鹽(D-Luciferin,sodiumsalt),鉀鹽、鈉鹽的形式是**通用的,因?yàn)樗鼈兌家兹苡谒?。鉀鹽也是***動(dòng)物檢測(cè)使用的主要形式。它們的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為328nm和533nm。Super Flour 系列在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。陜西熒光染料luciferin
花青類熒光染料屬于共振染料,其特征在于具有離域電荷的氮原子(兩個(gè)氮原子)之間的聚甲炔染料。新疆熒光染料水溶
異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,F(xiàn)ITC):FITC是應(yīng)用*為***的一種熒光素,經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光,*大發(fā)射波長(zhǎng)為525nm。FITC的熒光強(qiáng)度受PH影響較大,常隨著PH的降低而減弱,因此,在使用FITC時(shí)需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質(zhì)檢測(cè)(b)蛋白質(zhì)和肽的微測(cè)序分析(c)使用毛細(xì)管區(qū)帶電泳進(jìn)行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(cè)(e)細(xì)胞和組織切片中的抗原檢測(cè)(f)通過標(biāo)記DNA片段進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯(lián)物制備外,異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光(由于偶聯(lián)后的大消光系數(shù)和高量子產(chǎn)率),使其成為許多工藝的優(yōu)先染料。在流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光顯微術(shù)中,染料與各種抗體(一抗或二抗)結(jié)合,以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態(tài)。作為熒光素的衍生物,異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán),這有助于其對(duì)通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。新疆熒光染料水溶