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北京合肥轉(zhuǎn)染試劑

來源: 發(fā)布時間:2024-11-09

納米顆粒在疫苗遞送中往往表現(xiàn)出***的佐劑作用。陽離子聚合物,包括PEI、聚賴氨酸、陽離子葡聚糖和陽離子明膠,已經(jīng)有報道顯示出對Th1反應(yīng)的強烈刺激,其特征是誘導(dǎo)CD4(+)T細(xì)胞增殖和th1相關(guān)細(xì)胞因子的分泌。此外,陽離子聚合物強烈抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞分泌TNF-α。陽離子聚合物的刺激能力與其陽離子化程度有關(guān),陽離子聚合物與陰離子聚合物的中和可以完全消除刺激作用。聚合物的分子量也會影響其刺激能力,分子越大意味著刺激能力越大。deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類似物。北京合肥轉(zhuǎn)染試劑

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在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前,應(yīng)先確定其實驗需要。例如,siRNA*對一個靶標(biāo)具有高度特異性,而miRNA具有調(diào)節(jié)多個下游靶標(biāo)的潛力。如今,可以人工合成各種類型的短長度寡核苷酸來模仿小RNA分子,以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應(yīng)。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA),其結(jié)構(gòu)使其能夠與目標(biāo)mRNA結(jié)合以抑制其功能,從而導(dǎo)致特定基因的翻譯抑制。相反,拮抗劑是一種寡核苷酸,它將與互補的小RNA鏈(如miRNA)結(jié)合以拮抗其活性,從而增加目標(biāo)基因的表達(dá)。浙江廈門轉(zhuǎn)染試劑人類原代干細(xì)胞是另一種公認(rèn)的難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染這種細(xì)胞類型的挑戰(zhàn)仍然是效率低和細(xì)胞活力低。

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脂質(zhì)復(fù)合物(CLNACs)通過網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,并被困在核內(nèi)小體中,從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來,進(jìn)入核周區(qū)域,***進(jìn)入細(xì)胞核。內(nèi)吞作用在一定程度上取決于脂質(zhì)體載體的物理化學(xué)性質(zhì)。Friend和同事描述了可能由脂質(zhì)體與核膜融合而形成的囊泡和網(wǎng)狀核內(nèi)膜。**近有研究表明,很大一部分從核內(nèi)體釋放到細(xì)胞質(zhì)質(zhì)的質(zhì)粒由于與細(xì)胞質(zhì)中的大離子凝聚劑結(jié)合而失去活性。這可能解釋了脂質(zhì)轉(zhuǎn)染所觀察到的低且可變的轉(zhuǎn)染率。雖然這些脂質(zhì)載體從細(xì)胞外部到細(xì)胞核的路徑尚未完全確定,但核酸能夠產(chǎn)生其效果本身就是一項驚人的壯舉。至少對于質(zhì)粒而言,較小的結(jié)構(gòu)體比較大的質(zhì)粒具有更高的轉(zhuǎn)染率。核酸外排,雖然不是常見的報道,但也被證明會發(fā)生。

在轉(zhuǎn)染中,DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運到宿主細(xì)胞中。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動子、復(fù)制起點、多個克隆位點、目標(biāo)基因和選擇標(biāo)記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源,而多個克隆位點包含獨特的內(nèi)切酶切割位點,用于插入外源基因。適當(dāng)?shù)恼婧藛幼?如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染。與線性DNA相比,使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會產(chǎn)生更高的效率,線性DNA更容易被外切酶降解。然而,線性化的DNA更具重組性,因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強烈的毒性反應(yīng),這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。

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基因注射包括通過注射將所需的核酸物質(zhì)直接輸送到宿主細(xì)胞核中。當(dāng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染具有挑戰(zhàn)性時,特別是當(dāng)需要對宿主細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾時,這種方法是一種很好的替代方法。與其他非病毒基因傳遞方法一樣,沒有一種方法可以適用于所有不同的細(xì)胞類型,選擇合適的細(xì)胞類型和核酸大小對于確?;蜃⑸涞某晒χ陵P(guān)重要。例如,先前的一項研究報道了成功生成表達(dá)cre重組酶(大小~1,000bp)的轉(zhuǎn)基因小鼠細(xì)胞系。另一方面,在一項體內(nèi)研究中,表達(dá)轉(zhuǎn)基因的小鼠肌纖維數(shù)量與注射次數(shù)和給藥質(zhì)粒劑量相關(guān)。另一項體外研究進(jìn)一步支持了這一觀點,該研究報道了表達(dá)報告基因的宿主細(xì)胞的數(shù)量與注入細(xì)胞的核酸量密切相關(guān)。此外,微針的大小、形狀和額外涂層的存在也會影響基因注射的效率,因為有報道稱,涂有微顆粒的小尺寸微針(<10毫米)能夠順利地將所需的貨物輸送到皮膚的角質(zhì)層。轉(zhuǎn)染是將外來核酸傳遞到真核細(xì)胞中以修飾宿主細(xì)胞的遺傳組成的過程。江西轉(zhuǎn)染試劑毒性低

在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序,這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。北京合肥轉(zhuǎn)染試劑

Severinoetal.進(jìn)行的研究也指出了陽離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實現(xiàn)了人動力蛋白的表達(dá),但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細(xì)胞毒性,并導(dǎo)致活細(xì)胞數(shù)量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復(fù)合物和由魚精蛋白、DNA和脂質(zhì)層組成的納米顆粒在不同細(xì)胞系上的轉(zhuǎn)染效率:CHO(中國倉鼠卵巢細(xì)胞)、HEK293(人胚胎腎細(xì)胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)和A17(小鼠*細(xì)胞)。魚精蛋白/DNA/脂質(zhì)納米顆粒在每種細(xì)胞系中更有效地實現(xiàn)綠色和紅色熒光蛋白的表達(dá),即使不同細(xì)胞系對轉(zhuǎn)染的敏感性不同。陽離子脂質(zhì)的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物。不同的β-氨基酯聚合物作為納米載體,成功地將hESC(人類胚胎干細(xì)胞)的轉(zhuǎn)染效率提高了四倍,同時保持較低的細(xì)胞毒性。這給我們帶來了希望,納米顆粒能夠與具有所需官能團的其他化合物的必要添加一起形成***有效的核酸遞送平臺。北京合肥轉(zhuǎn)染試劑