細(xì)胞培養(yǎng)后，需要對(duì)其生長(zhǎng)情況、形態(tài)甚至生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察。由于細(xì)胞小而復(fù)雜，若不借助適當(dāng)?shù)氖侄?，難以觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu)，更難發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。目前，已有多種研究細(xì)胞的技術(shù)，從光學(xué)顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細(xì)胞化學(xué)法到免疫化學(xué)法。細(xì)胞染色是研究細(xì)胞生物學(xué)特征的一種常用手段，然而，對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)新手來(lái)說(shuō)，想要獲得一張漂亮的細(xì)胞染色圖并不容易。染色試劑不會(huì)選、細(xì)胞染色不均勻、染色時(shí)切片脫落等都是很常見(jiàn)的問(wèn)題。

細(xì)胞膜常用染料DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見(jiàn)的細(xì)胞膜染料（見(jiàn)表2），它們是一族親脂性的熒光染料，用于細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究。該系列染料進(jìn)入細(xì)胞膜后，會(huì)在整個(gè)細(xì)胞膜上側(cè)向擴(kuò)散，在比較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高，染色均一，熒光不易猝滅，無(wú)明顯細(xì)胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、造血干祖細(xì)胞等。 小動(dòng)物成像熒光染料能夠選擇性地與目標(biāo)細(xì)胞或組織結(jié)合。中國(guó)臺(tái)灣石家莊熒光染料

除了以上應(yīng)用，吲哚菁綠還可以用于生物識(shí)別和藥物輸送。在生物識(shí)別中，吲哚菁綠可以與特定的生物分子結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)這些分子的檢測(cè)和定量分析。這項(xiàng)技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中有著廣泛的應(yīng)用前景。此外，吲哚菁綠還可以作為藥物輸送系統(tǒng)的一部分，將藥物包裹在其分子結(jié)構(gòu)中，通過(guò)近紅外光***釋放藥物，實(shí)現(xiàn)靶向***。吲哚菁綠作為一種多功能的熒光染料，在醫(yī)學(xué)和生物領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。其綠色溶解度的優(yōu)良性能，使其能夠在水溶液中快速溶解，為其在醫(yī)學(xué)影像學(xué)、光熱***、生物識(shí)別和藥物輸送等方面的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，相信吲哚菁綠在未來(lái)將發(fā)揮更大的潛力，為人類健康事業(yè)做出更大的貢獻(xiàn)。吲哚菁綠作為一種熒光染料，在醫(yī)學(xué)影像學(xué)中的應(yīng)用是**為突出的。它可以通過(guò)靜脈注射進(jìn)入人體血液循環(huán)系統(tǒng)，并在近紅外激光的照射下發(fā)出熒光信號(hào)。這種熒光信號(hào)可以被**的顯像設(shè)備捕獲和記錄，從而形成高分辨率、高對(duì)比度的影像。這樣的影像可以幫助醫(yī)生觀察和分析血管、淋巴系統(tǒng)以及**等病變的情況，提供重要的診斷依據(jù)。遼寧免疫組化熒光染料DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。

5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料，具有廣泛的應(yīng)用，作為抗體和其他探針標(biāo)記，用熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實(shí)驗(yàn)。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性，是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中生物檢測(cè)**常用的熒光標(biāo)記之一。**常用的熒光素包括用于標(biāo)記蛋白質(zhì)（特別是抗體）的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)]，5-FITC和用于標(biāo)記肽和寡核苷酸的羧基熒光素（5-FAM和5(6)-FAM）。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物，以及一系列具有針對(duì)細(xì)胞標(biāo)記和檢測(cè)優(yōu)化的特性的質(zhì)量iFluor?熒光標(biāo)記染料。

為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術(shù)（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)，但使用熒光染料具有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。他們提供：高靈敏度：對(duì)于大多數(shù)分析物，熒光測(cè)量的靈敏度比吸光度測(cè)量高1000倍，即使在使用小樣本時(shí)也可以令人滿意地達(dá)到ppt（萬(wàn)億分之一）的檢測(cè)限。寬線性動(dòng)態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多，分光光度測(cè)量通常會(huì)遇到干擾問(wèn)題。在進(jìn)行熒光測(cè)量時(shí)不會(huì)遇到這個(gè)問(wèn)題，因?yàn)橹挥猩贁?shù)材料具有熒光能力。高通量：熒光測(cè)量具有簡(jiǎn)單而強(qiáng)大的協(xié)議，并且可以自動(dòng)化用于高通量應(yīng)用。Super Flour 系列在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。

本質(zhì)上，有機(jī)染料的特征在于源自在整個(gè)生色團(tuán)上離域的光學(xué)躍遷或源自分子間電荷轉(zhuǎn)移躍遷（從激發(fā)電子態(tài)的分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移）的發(fā)射。在這里，表現(xiàn)出源自在整個(gè)生色團(tuán)上離域的光學(xué)躍遷的發(fā)射的染料被稱為共振染料（介觀染料），而后者被稱為CT染料（電荷轉(zhuǎn)移染料）?；ㄇ?、羅丹明和熒光素是一些最常見(jiàn)的共振染料，其特點(diǎn)是窄的吸收和發(fā)射帶（略微結(jié)構(gòu)化），往往相互鏡像，以及小的、對(duì)溶劑極性不敏感的斯托克斯位移。另一方面，CT染料包括香豆素和丹磺酰熒光團(tuán)等染料，其特點(diǎn)是與共振染料相比，吸收和發(fā)射帶結(jié)構(gòu)無(wú)結(jié)構(gòu)，分離良好，以及更大的斯托克斯位移。同樣，與共振染料相比，CT染料具有更小的摩爾吸收系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率。對(duì)于共振和CT熒光染料，在結(jié)構(gòu)-性質(zhì)關(guān)系眾所周知的情況下，可以通過(guò)精心設(shè)計(jì)的策略來(lái)微調(diào)光譜性質(zhì)。Super Fluor 750（效果同Alexa Fluor 750）熒光染料。蘇州熒光染料藍(lán)色

D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發(fā)光生物體中。中國(guó)臺(tái)灣石家莊熒光染料

三、流式細(xì)胞儀分析1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，接種到孔板，過(guò)夜培養(yǎng)。2、如果要進(jìn)行藥物刺激，在細(xì)胞中加入感興趣的藥物進(jìn)行干預(yù)，繼續(xù)培養(yǎng)一定時(shí)間后，收集細(xì)胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細(xì)胞，37℃避光孵育15min或更長(zhǎng)時(shí)間?！咀⒁狻浚河捎诩?xì)胞種類和實(shí)驗(yàn)體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時(shí)間可以根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)或參考文獻(xiàn)自行調(diào)整。4、用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

四、實(shí)驗(yàn)案例1、取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無(wú)血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細(xì)胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察. 中國(guó)臺(tái)灣石家莊熒光染料