SuperFluor活化酯（與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同）SuperFlour系列熒光探針，具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，更廣的pH應(yīng)用范圍（pH4～10）,更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等熒光染料。1．標(biāo)記效率低——計(jì)算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標(biāo)記的熒光團(tuán)少于4mol有以下原因：1）緩沖液中含有痕量伯銨成分，與染料反應(yīng)降低了標(biāo)記效率。如果蛋白已經(jīng)溶于含氨基的緩沖液（如Tris或氨基乙酸），標(biāo)記前用PBS透析。2）蛋白含量較低(≤1mg/mL)會(huì)影響標(biāo)記效率。3）標(biāo)記步驟中加入碳酸氫鈉的作用是將反應(yīng)混合物的pH升高至～8，因?yàn)樵谌鯄A性環(huán)境中標(biāo)記反應(yīng)的效率比較高。如果蛋白溶液的緩沖范圍在低pH，加入重碳酸鹽也無(wú)法將pH調(diào)節(jié)至**適水平。要么加大重碳酸鹽的量，要么將緩沖液換成PBS，或用0.1M碳酸氫鈉透析等。4）研究顯示pH升至9.0～9.4，標(biāo)記效率和標(biāo)記速度（只需10min）明顯改善。5）不同抗體與熒光團(tuán)的反應(yīng)速率不同，染料標(biāo)記后保留的生物活性程度也不同，因此標(biāo)準(zhǔn)步驟也不是總有比較好的標(biāo)記結(jié)果。為增加標(biāo)記率，可以對(duì)同一樣品進(jìn)行再標(biāo)記，或減少蛋白的量加大染料的量重新標(biāo)記。有研究者在室溫孵育1小時(shí)后再4℃孵育過(guò)夜，情況有所改善。非磺化花青類(lèi)染料- 該組中的一些染料包括 cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7 和 cy7.5。內(nèi)蒙古熒光素鉀鹽熒光染料

CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測(cè)和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。它具有出色的熒光性能和良好的生物相容性。Cy5屬于小分子染料，其*大發(fā)射波長(zhǎng)為670nm，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀，檢測(cè)通道一般是FL4通道。除流式細(xì)胞術(shù)外，Cy5同樣適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)。需注意的是，Cy5與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的非特異性結(jié)合多，實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易出現(xiàn)假陽(yáng)性。Cy5.5含有一個(gè)游離胺基,可與多種官能團(tuán)共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。激發(fā)和發(fā)射的最大值分別為678nm和694nm。Cy5.5已應(yīng)用于各種基于熒光的實(shí)驗(yàn)中。Cy5.5是一種遠(yuǎn)紅色(和近紅外)發(fā)射染料,是熒光測(cè)量的理想選擇。Cy5.5具有成本效益,且其標(biāo)記化學(xué)操作簡(jiǎn)單,適合于潛在的***藥物開(kāi)發(fā)Cy5.5標(biāo)記因子VIIa是用來(lái)想象**的。用這些靶向蛋白標(biāo)記的Cy5.5在**異種移植物上特異定位至少14天,但未結(jié)合的Cy5.5不能定位于任何異種移植或***。這種**血管內(nèi)皮細(xì)胞中抗組織因子的成像方法可用于檢測(cè)原發(fā)性**和轉(zhuǎn)移以及監(jiān)測(cè)體內(nèi)***反應(yīng)[1]。pH/溫度敏感磁性納米凝膠結(jié)合Cy5.5標(biāo)記乳鐵蛋白(Cy5.5-Lf-MPNA納米凝膠)是一種有前途的膠質(zhì)瘤術(shù)前MRI和術(shù)中熒光成像的對(duì)比劑[2]內(nèi)蒙古熒光素鉀鹽熒光染料熒光染料可以單獨(dú)使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。

異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）：FITC是應(yīng)用*為***的一種熒光素，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光，*大發(fā)射波長(zhǎng)為525nm。FITC的熒光強(qiáng)度受PH影響較大，常隨著PH的降低而減弱，因此，在使用FITC時(shí)需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質(zhì)檢測(cè)(b)蛋白質(zhì)和肽的微測(cè)序分析(c)使用毛細(xì)管區(qū)帶電泳進(jìn)行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(cè)(e)細(xì)胞和組織切片中的抗原檢測(cè)(f)通過(guò)標(biāo)記DNA片段進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯(lián)物制備外，異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光（由于偶聯(lián)后的大消光系數(shù)和高量子產(chǎn)率），使其成為許多工藝的優(yōu)先染料。在流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光顯微術(shù)中，染料與各種抗體（一抗或二抗）結(jié)合，以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態(tài)。作為熒光素的衍生物，異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán)，這有助于其對(duì)通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。

InvitrogenCy3染料是一種明亮的橙色熒光染料，可使用532nm激光線激發(fā)，并使用TRITC（四甲基羅丹明）濾光片組進(jìn)行可視化。除了免疫細(xì)胞化學(xué)應(yīng)用，Cy3染料通常用于標(biāo)記核酸。發(fā)光說(shuō)明：Cy3熒光團(tuán)也是親脂性神經(jīng)元和長(zhǎng)期DiI細(xì)胞追蹤試劑的基礎(chǔ)，該試劑添加烷基尾(≥12個(gè)碳）添加到**熒光團(tuán)上。Cy3染料是用于成像、流式細(xì)胞術(shù)和基因組應(yīng)用的蛋白質(zhì)和核酸結(jié)合物的傳統(tǒng)橙色熒光標(biāo)簽。它也是經(jīng)典親脂性示蹤劑DiI及其變體的基礎(chǔ)。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)，Cy3可分為普通Cy3（常簡(jiǎn)稱(chēng)Cy3）和磺化Cy3（Sulfo-Cy3）。Cy3水溶性較低，在水相標(biāo)記反應(yīng)時(shí)常常需要使用有機(jī)共溶劑，常用有機(jī)溶劑包括DMF，DMSO和乙腈等?；腔疌y3是在Cy3的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上磺化的產(chǎn)物，附帶2個(gè)或3個(gè)磺酸根離子。由于磺化效應(yīng)，磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮，熒光穩(wěn)定性也提高，可賴受更長(zhǎng)時(shí)間的曝光。磺化Cy3水溶性極高，所以在標(biāo)記反應(yīng)中不需要使用有機(jī)共溶劑，特別適合標(biāo)記蛋白等對(duì)有機(jī)溶劑敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性極好，并且染料分子本身帶電荷，標(biāo)記到蛋白表面后不會(huì)引發(fā)疏水性蛋白聚集，提高熒光標(biāo)記產(chǎn)物的穩(wěn)定性。當(dāng)然，磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇，DMSO，DMF等有機(jī)溶劑，標(biāo)記反應(yīng)也可以在純有機(jī)溶劑中進(jìn)行。熒光染料，由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測(cè)標(biāo)記，其應(yīng)用于熒光探針，細(xì)胞染色等。

小動(dòng)物***成像技術(shù)（invivoimagingtechnology）是利用高靈敏度的光學(xué)檢測(cè)儀器直接檢測(cè)動(dòng)物***體內(nèi)的細(xì)胞活動(dòng)和基因行為研究的一類(lèi)技術(shù)，是近年來(lái)發(fā)展**快的生命科學(xué)研究方法，是**直接觀察細(xì)胞和分子在體內(nèi)行為的新興技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域[1]。***動(dòng)物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是利用熒光素酶報(bào)告基因在***內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。而熒光發(fā)光成像技術(shù)是將熒光物質(zhì)或熒光物質(zhì)標(biāo)記的小分子物質(zhì)如基因、細(xì)胞也可是小分子藥物、抗體、納米材料等導(dǎo)入到***體內(nèi)，通過(guò)小動(dòng)物***成像系統(tǒng)的激發(fā)光源激發(fā)熒光集團(tuán)到達(dá)高能量狀態(tài)，而后產(chǎn)生波長(zhǎng)較激發(fā)光長(zhǎng)的發(fā)射光，然后通過(guò)高靈敏度制冷CCD鏡頭探測(cè)到***內(nèi)的發(fā)射光。通過(guò)***成像技術(shù)可以觀測(cè)***動(dòng)物體內(nèi)**的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移、炎癥的發(fā)生、特定基因的表達(dá)和藥物作用效果等生物學(xué)過(guò)程。羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。神經(jīng)熒光染料藍(lán)色

異硫氰酸熒光素含有一個(gè)異硫氰酸酯反應(yīng)基團(tuán)這有助于其對(duì)通常存在于生物分子中的動(dòng)漫和巰基基團(tuán)具有反應(yīng)性。內(nèi)蒙古熒光素鉀鹽熒光染料

熒光染料在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中具有廣泛的應(yīng)用1、細(xì)胞膜標(biāo)記：可以使用熒光染料標(biāo)記細(xì)胞膜，以觀察和研究細(xì)胞膜的動(dòng)態(tài)和結(jié)構(gòu)變化。2、染色體和DNA標(biāo)記：用熒光染料標(biāo)記染色體或DNA，可以觀察和分析DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、修復(fù)等過(guò)程3、蛋白質(zhì)標(biāo)記：通過(guò)熒光染料標(biāo)記蛋白質(zhì)，可以研究蛋白質(zhì)的相互作用、定位和運(yùn)動(dòng)等特性。4、細(xì)胞器標(biāo)記：使用特定波長(zhǎng)的熒光染料可以標(biāo)記和可視化細(xì)胞中的線粒體、溶酶體等細(xì)胞器。5、神經(jīng)科學(xué)應(yīng)用：熒光染料在神經(jīng)科學(xué)中也有廣泛應(yīng)用，如標(biāo)記神經(jīng)元和突觸，觀察神經(jīng)信號(hào)的傳遞等。6、基因表達(dá)分析：通過(guò)熒光染料標(biāo)記基因表達(dá)產(chǎn)物，可以定量分析基因的表達(dá)水平和細(xì)胞中的分布情況。內(nèi)蒙古熒光素鉀鹽熒光染料