化學(xué)轉(zhuǎn)染的效率在很大程度上取決于幾個(gè)因素，如使用的試劑類型、靶細(xì)胞的來(lái)源和性質(zhì)，以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸，并將其靶標(biāo)傳遞給非分裂細(xì)胞和分裂細(xì)胞，因此在基因***中非常有用。有幾個(gè)因素已被證明可能影響病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率，如靶細(xì)胞類型、使用的啟動(dòng)子類型、載體濃度和使用的轉(zhuǎn)導(dǎo)介質(zhì)條件。在一項(xiàng)評(píng)估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進(jìn)行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的體外研究中，觀察到這兩種病毒在來(lái)自人類、倉(cāng)鼠、貓、狗、馬和豬的不同細(xì)胞系上的不同程度的效率。在大多數(shù)細(xì)胞類型上，使用HIV的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率普遍優(yōu)于EIAV，而這兩種病毒對(duì)嚙齒動(dòng)物細(xì)胞的***性較弱。在同一項(xiàng)研究中，啟動(dòng)子的類型也被認(rèn)為是可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的一個(gè)因素，因此含有替代CMV啟動(dòng)子的內(nèi)部啟動(dòng)子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細(xì)胞上表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。廣東轉(zhuǎn)染試劑效率高

在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達(dá)相對(duì)短暫。靜脈注射脂叢的肺表達(dá)比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達(dá)量每周減少約1log。造成這種現(xiàn)象的機(jī)制可能有以下幾種:(a)產(chǎn)生針對(duì)外源基因產(chǎn)物的新***抗體，(b)細(xì)胞因子介導(dǎo)的啟動(dòng)子關(guān)閉，(c)通過(guò)凋亡、先天或適應(yīng)性免疫反應(yīng)根除表達(dá)細(xì)胞以及（d）表達(dá)基因的細(xì)胞因細(xì)胞凋亡而減少是導(dǎo)致表達(dá)減少。這些機(jī)制具有重要意義，因?yàn)椴豢赡苤貜?fù)給藥，而且轉(zhuǎn)基因凈表達(dá)會(huì)隨著時(shí)間的推移而減少。盡管通過(guò)中和或消除細(xì)胞因子的產(chǎn)生可以提高肺中的基因表達(dá)水平。靜脈給藥引起的毒性可能是由于小鼠轉(zhuǎn)氨酶水平的增加，在相同劑量下，小鼠肝臟出現(xiàn)組織病理學(xué)病變，但肺部沒(méi)有不良反應(yīng)。這種增加可以通過(guò)使用較少的細(xì)胞毒性陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）來(lái)控制。轉(zhuǎn)氨酶的釋放歸因于未甲基化的堿基，如pDNA序列中的胞嘧啶和鳥(niǎo)嘌呤。小鼠轉(zhuǎn)染試劑性價(jià)比高陽(yáng)離子聚合物是一種非病毒載體。

納米顆粒的尺寸很小，但它們比其他顆粒具有更大的粘附表面，同時(shí)具有高穩(wěn)定性。正因?yàn)槿绱耍鼈兡軌虺晒Φ卮┻^(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞，并與自然發(fā)生的細(xì)胞內(nèi)途徑結(jié)合，具有將特定顆粒帶到預(yù)定目標(biāo)位置的***準(zhǔn)確性。由于納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和保護(hù)化合物方面具有巨大的潛力，可以避免酶的消化或儲(chǔ)存在核內(nèi)體中，因此納米顆粒作為細(xì)胞過(guò)程成像的工具，作為將藥物攜帶到細(xì)胞內(nèi)的各種系統(tǒng)的一部分，或**終用于基因傳遞。納米顆粒通過(guò)官能團(tuán)和非共價(jià)鍵之間的特異性和非特異性鍵與核酸結(jié)合的特性類似于體內(nèi)DNA和抑制蛋白之間的自然結(jié)合。在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸外源DNA的效率受到兩個(gè)主要因素的限制:內(nèi)吞作用，穿過(guò)細(xì)胞膜的方式，或適當(dāng)?shù)募?xì)胞受體***和內(nèi)體屏障的破壞。研究表明，在細(xì)胞內(nèi)，與熒光標(biāo)記物連接的納米顆粒聚集在靠近細(xì)胞核的溶酶體中，但它們不會(huì)穿過(guò)核膜。事實(shí)上，這并沒(méi)有干擾特定基因結(jié)構(gòu)編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)，這證明了納米顆?？梢詤⑴c內(nèi)體途徑，并可以通過(guò)細(xì)胞質(zhì)將DNA運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞核。不同種類的化學(xué)物質(zhì)有不同的納米粒子，它們具有不同的性狀、化學(xué)性質(zhì)、物理性質(zhì)和結(jié)構(gòu)。

deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類似物。通過(guò)用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化，這使得它可以自組裝成帶負(fù)電荷核酸的納米顆粒。deae -葡聚糖是***個(gè)用于核酸轉(zhuǎn)染的陽(yáng)離子聚合物。早在20世紀(jì)50年代，它就極大地增強(qiáng)了脊髓灰質(zhì)炎病毒和SV40病毒DNA在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染。隨后，deae -葡聚糖被廣泛應(yīng)用于RNA或DNA的轉(zhuǎn)染。然而，由于以下原因，deae -葡聚糖并沒(méi)有作為比較好候選物:轉(zhuǎn)染效率遠(yuǎn)低于脂質(zhì)體等其他試劑;deae -葡聚糖的細(xì)胞毒性和免疫原性不容忽視。影響物理轉(zhuǎn)染或機(jī)械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。

脂質(zhì)顆粒的加入導(dǎo)致內(nèi)體DNA釋放增加。Delgado等人通過(guò)在腎細(xì)胞中添加魚(yú)精蛋白，設(shè)法提高了固體脂質(zhì)納米顆粒的轉(zhuǎn)染效率，但與不添加魚(yú)精蛋白的對(duì)照組相比，相同的多功能單元，DNA/魚(yú)精蛋白/SLN(固體脂質(zhì)納米顆粒)，降低了HEK 293細(xì)胞系(人胚胎腎細(xì)胞)的轉(zhuǎn)染效率。這給了我們希望，通過(guò)加入必要的配體的可能性，使用納米顆粒的轉(zhuǎn)染可能會(huì)調(diào)整到給定的細(xì)胞類型。Bahrami et al.經(jīng)表明，不同種類的納米顆粒以不同的方式與細(xì)胞膜結(jié)合。形成這些鍵的差異取決于它們的球形或非球形形狀，也取決于不同納米顆粒所表現(xiàn)出的各種粘附電位以及它們進(jìn)入后引起的膜形狀變化。Prabha等人的實(shí)驗(yàn)表明，納米顆粒的大小對(duì)COS-1(非洲綠猴腎細(xì)胞)和HEK 293細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率有***影響:使用較小的納米顆粒時(shí)，轉(zhuǎn)染效率分別是使用較大納米顆粒的27倍和4倍。在兩種分散體中，小顆粒和大顆粒的細(xì)胞攝取、表面電荷和DNA釋放是相同的，這表明使用納米顆粒進(jìn)行基因傳遞的效率受到許多因素的影響，它們的使用應(yīng)該根據(jù)細(xì)胞類型和應(yīng)用條件進(jìn)行具體調(diào)整。此外，用作納米顆粒分散劑的不同物質(zhì)，如十六種不同類型納米顆粒的豬肺表面活性劑和牛血清白蛋白，對(duì)其在溶液中的團(tuán)聚有***影響。人類原代干細(xì)胞是另一種公認(rèn)的難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染這種細(xì)胞類型的挑戰(zhàn)仍然是效率低和細(xì)胞活力低。lipo3000轉(zhuǎn)染試劑便宜

deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類似物。廣東轉(zhuǎn)染試劑效率高

目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無(wú)法深入穿透組織和***，如實(shí)體瘤和大腦。通常情況下，只能到達(dá)并轉(zhuǎn)染細(xì)胞的外層，從而導(dǎo)致***效果不佳。愛(ài)潑斯坦巴爾病毒(EBV)，一種人類**病原體，似乎通過(guò)劫持**微環(huán)境中的外泌體進(jìn)行細(xì)胞間通訊來(lái)克服這一點(diǎn)。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm)，起源于內(nèi)吞。在被釋放到細(xì)胞外環(huán)境后，由于其表面存在細(xì)胞識(shí)別分子，它們可以與鄰近細(xì)胞融合。外泌體外泌體是細(xì)胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號(hào)因子的載體，通過(guò)經(jīng)歷細(xì)胞內(nèi)化和釋放的幾個(gè)周期，能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細(xì)胞分泌，包括腫瘤細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞、上皮細(xì)胞和神經(jīng)元。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。這可以通過(guò)靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯(lián)蛋白)并啟動(dòng)脂質(zhì)體和外泌體之間的融合事件來(lái)實(shí)現(xiàn)。廣東轉(zhuǎn)染試劑效率高