在7種轉(zhuǎn)染試劑(DAC-30、DC-30、Lipofectin、LipofectAMINEPLUS、Effectene、FuGene 6和superect)中，F(xiàn)uGene 6轉(zhuǎn)染HASMCs和α-10 SMCs的效率比較高。在這兩種細胞系中，superect產(chǎn)生的細胞毒性作用比較高，其次是DAC-30和Lipofectamine Plus，而FuGene 6被認為對細胞系相對安全。在另一項比較人類和動物來源的不同細胞系轉(zhuǎn)染結(jié)果的研究中，豬氣管上皮細胞(PTE)被Effectene、Lipofectamine Plus和PEI等轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染的效率高于人類氣管上皮細胞(HTE)?；瘜W轉(zhuǎn)染后，轉(zhuǎn)染后的HTE也表現(xiàn)出比PTE更低的活力。兩項被引用研究的綜合結(jié)果認為動物細胞系可能比人類細胞系更有效地轉(zhuǎn)染。懸浮細胞通常被認為比貼壁細胞更難轉(zhuǎn)染，因為轉(zhuǎn)染復合物對細胞的潛在附著減少懸浮細胞表面。然而，一項比較Xfect、Lipofectamine2000、Nanofectamin、TransIT-X2和TransIT-2020效率的研究表明，除了Xfect之外，所有試劑轉(zhuǎn)染懸浮細胞的效率都高于貼壁細胞(Tammetal.，2016)。然而，相反觀察結(jié)果背后的原因在很大程度上仍不清楚，未來可能會進一步探索。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質(zhì)體囊泡中的技術(shù)，開發(fā)出了Gemate系列轉(zhuǎn)染試劑。云南杭州轉(zhuǎn)染試劑

流式細胞術(shù)可以更精確地定量表達特定熒光基因的細胞，以評估轉(zhuǎn)染效率。另一種評估轉(zhuǎn)染效率的方法是通過監(jiān)測轉(zhuǎn)染后的特定蛋白表達。將轉(zhuǎn)基因引入細胞可能會改變由轉(zhuǎn)基因或細胞中其他基因編碼的蛋白質(zhì)的表達。同樣，轉(zhuǎn)染小RNA也可以調(diào)節(jié)宿主細胞中特定下游遺傳靶點的表達。免疫印跡和免疫熒光染色可用于評估轉(zhuǎn)染后蛋白表達的變化。在這兩種方法中，使用特異性抗體結(jié)合靶蛋白是至關(guān)重要的，后者需要使用與一抗結(jié)合的熒光標記二級抗體來檢測感興趣的蛋白質(zhì)。另一方面，在免疫印跡中，可以使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯(lián)的二抗與一抗結(jié)合，進行特異性蛋白檢測。免疫印跡法允許對蛋白質(zhì)表達進行半定量，而免疫熒光染色法允許通過熒光顯微鏡或流式細胞術(shù)進行定量檢測。通過檢查特定蛋白表達來評估轉(zhuǎn)染效率更具可重復性和直接性。然而，使用抗體所固有的非特異性蛋白質(zhì)結(jié)合問題和獲得假陰性結(jié)果的可能性，這可能是由于不及時測定蛋白質(zhì)表達引起的，仍然是使用這些方法的缺點。北京神經(jīng)細胞轉(zhuǎn)染試劑常用的物理/機械轉(zhuǎn)染方法包括電穿孔、聲孔、基因顯微注射和激光照射。

在大腸桿菌細胞中復制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細菌DNA中的頻率相似。CpG免疫刺激的兩個應(yīng)用領(lǐng)域是疫苗接種和腫瘤免疫***。許多出版物表明，免疫刺激CpG基序可以用于疫苗接種策略，包括給藥編碼抗原的pDNA載體或給藥抗原本身。通過不同的給藥途徑給藥含CpG的脂叢可以抑制**生長。這些結(jié)果來源于使用表達促炎細胞因子(如IL-12)的轉(zhuǎn)基因或甚至不含外源轉(zhuǎn)基因的載體的研究。**的生長抑制似乎是由CpG基序引起的，因為這些序列的甲基化否定了這種作用。雖然有***效果，但含CpG基序?qū)?*生長的抑制的確切性質(zhì)尚不清楚。產(chǎn)生的細胞因子對腫瘤細胞和**脈管系統(tǒng)都有多重作用。一個恰當?shù)睦邮荌L-12的能力，在響應(yīng)含CpG基序時產(chǎn)生，引發(fā)抗血管生成反應(yīng)。其他細胞因子，如IFN-g(自身為CpG誘導的細胞因子)誘導的細胞因子，即IP10和Mig，也能夠具有抗血管生成特性。

核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例對轉(zhuǎn)染效率也有影響。在一項涉及原代人成肌細胞的研究中，使用不同的核酸比例來比較轉(zhuǎn)染效率的影響，轉(zhuǎn)染試劑包括FuGENE6、Effectene和ExGen500(一種基于pei的試劑)。該研究的一個***發(fā)現(xiàn)是，轉(zhuǎn)染效率可能不一定與所用試劑的體積直接相關(guān)。例如，2μgDNA與5μLFuGENE6試劑的比例被證明可以產(chǎn)生比較好的轉(zhuǎn)染效率，而更低或更高的DNA與試劑的比例并不能提高效率。在另一項涉及轉(zhuǎn)染人胃腺*細胞系的研究中也觀察到類似的發(fā)現(xiàn)，即在一系列組合中使用比較高轉(zhuǎn)染試劑與DNA比體積測試時，轉(zhuǎn)染效率并未達到比較好。使用不成比例的高轉(zhuǎn)染試劑量會導致不必要的細胞毒性，從而降低整體轉(zhuǎn)染結(jié)果。因此，確定合適的核酸與試劑比例是啟動新的轉(zhuǎn)染研究以實現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率和低細胞毒性的重要步驟。納米顆粒，由于其在DNA轉(zhuǎn)運到細胞中的保護能力，在不久的將來可以用作轉(zhuǎn)基因的非病毒載體。

納米顆粒的尺寸很小，但它們比其他顆粒具有更大的粘附表面，同時具有高穩(wěn)定性。正因為如此，它們能夠成功地穿過細胞膜，進入細胞，并與自然發(fā)生的細胞內(nèi)途徑結(jié)合，具有將特定顆粒帶到預定目標位置的***準確性。由于納米顆粒在細胞內(nèi)運輸和保護化合物方面具有巨大的潛力，可以避免酶的消化或儲存在核內(nèi)體中，因此納米顆粒作為細胞過程成像的工具，作為將藥物攜帶到細胞內(nèi)的各種系統(tǒng)的一部分，或**終用于基因傳遞。納米顆粒通過官能團和非共價鍵之間的特異性和非特異性鍵與核酸結(jié)合的特性類似于體內(nèi)DNA和抑制蛋白之間的自然結(jié)合。在細胞內(nèi)運輸外源DNA的效率受到兩個主要因素的限制:內(nèi)吞作用，穿過細胞膜的方式，或適當?shù)募毎荏w***和內(nèi)體屏障的破壞。研究表明，在細胞內(nèi)，與熒光標記物連接的納米顆粒聚集在靠近細胞核的溶酶體中，但它們不會穿過核膜。事實上，這并沒有干擾特定基因結(jié)構(gòu)編碼的蛋白質(zhì)的表達，這證明了納米顆?？梢詤⑴c內(nèi)體途徑，并可以通過細胞質(zhì)將DNA運輸?shù)郊毎?。不同種類的化學物質(zhì)有不同的納米粒子，它們具有不同的性狀、化學性質(zhì)、物理性質(zhì)和結(jié)構(gòu)。研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。轉(zhuǎn)染試劑好用

利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。云南杭州轉(zhuǎn)染試劑

PEI的分子量對細胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。由于PEI在細胞內(nèi)不可降解，所以分子量越高，細胞毒性越強。此外，具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物，使其更容易轉(zhuǎn)染，但更難在細胞內(nèi)釋放核酸。另一方面，PEI產(chǎn)生的復合物分子量降低，更難以轉(zhuǎn)染;但它更容易釋放核酸。因此，確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實現(xiàn)的。然而，一些改進使PEI在應(yīng)用中更加先進。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián)，可***降低細胞毒性并保持較高的轉(zhuǎn)染效率。通過用丙烯酸乙酯修飾胺，伯胺的乙酰化，或在聚合物結(jié)構(gòu)中引入帶負電荷的丙酸或琥珀酸基團，可以制備出各種無毒的分支PEI衍生物。由此產(chǎn)生的化學物質(zhì)在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。云南杭州轉(zhuǎn)染試劑