在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢(shì)，在開(kāi)放式的培養(yǎng)條件中，若加入HEPES，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。HEPES分子量為238.31，化學(xué)名：4-羥乙基哌嗪乙磺酸，分子式:C8H18N2O4S。HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長(zhǎng)時(shí)間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mmol/L。關(guān)于HEPES緩沖溶液的配制，不同的文獻(xiàn)資料有不同的說(shuō)法。根據(jù)用途，一種是單純的HEPES+NaOH，另一種是HEPES+鹽。GMP條件下生產(chǎn)AVT穩(wěn)定供貨注射級(jí)HEPES。山東輔料HEPES現(xiàn)貨供應(yīng)

外源基因?qū)胝婧思?xì)胞的方法有很多種，如磷酸鈣轉(zhuǎn)染法、DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染法、脂質(zhì)體法、電穿孔法、顯微注射法等。2×HEPES緩沖鹽溶液主要用于磷酸鈣轉(zhuǎn)染，其主要成分為HEPES，HEPES是一種非離子兩性緩沖劑，能有效控制pH在范圍，尤其在pH具有較好的緩沖能力，終濃度一般為mmol/L，培養(yǎng)液內(nèi)含mmol/LHEPES 即可達(dá)到較好的緩沖能力。Leagene HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS)是一種常用的細(xì)胞轉(zhuǎn)染溶液，主要由HEPES、氯化鈉、磷酸鹽等組成，其**適pH值為，經(jīng)過(guò)濾除菌處理。影響磷酸鈣轉(zhuǎn)染效率的因素主要有沉淀中DNA含量、DNA 在細(xì)胞上停留的時(shí)間、休克時(shí)間。Leagene 2xHeBS要求DNA濃度在為宜，Hela、BALB等細(xì)胞沉淀放置，CHO、DUKX、BⅡ等細(xì)胞可以通過(guò)甘油、DMSO進(jìn)行熱休克處理以提高轉(zhuǎn)染效率。山東輔料HEPES現(xiàn)貨供應(yīng)GMP條件下生產(chǎn)注射級(jí)HEPES。

儲(chǔ)存方法：HEPES緩沖液在2-8℃下可保存1年。注意事項(xiàng)：HEPES緩沖液運(yùn)輸時(shí)需要加冰袋。但儲(chǔ)存時(shí)避免冷凍，否則會(huì)有鹽類物質(zhì)析出。N-三(羥甲基)甲基甘氨酸Tricine，CAS是5704-04-1，是一種兩性離子緩沖液，名字由Tris和glycine衍生而來(lái)，結(jié)構(gòu)類似于Tris，但是高濃度具有比Tris更弱的抑制性，也是“Good”緩沖液之一，**初開(kāi)發(fā)用于提供葉綠體反應(yīng)的緩沖體系。Tricine的有效pH緩沖范圍為7.4-8.8，pKa=8.1（25℃），常用做電泳緩沖液，以及用來(lái)重懸細(xì)胞沉淀。Tricine具有低負(fù)電荷和高離子強(qiáng)度的特性，非常適用于電泳分離1~100kDa的低分子量蛋白?；谖灮鹣x(chóng)熒光素酶的ATP分析實(shí)驗(yàn)中，比較10種常見(jiàn)的緩沖液，Tricine（25mM）表現(xiàn)出比較好的檢測(cè)效果。另外，在自由基誘導(dǎo)的膜損傷實(shí)驗(yàn)中，Tricine還是一種有效的羥自由基清除劑。作者：泰安格林化工鏈接：

（5）緩沖溶液在穩(wěn)定性方面各顯利弊：①Tris-HCl緩沖溶液pH值受外界影響較大，一般現(xiàn)用現(xiàn)配。同時(shí)需要注意Tris是一級(jí)脂肪胺，分子結(jié)構(gòu)中的氨基易與醛類化合物發(fā)生縮合反應(yīng)，是一些生化實(shí)驗(yàn)的抑制劑。②硼酸鹽緩沖液有一定毒性，不宜用做注射液或者口服液的緩沖液。③雖然磷酸鹽緩沖溶液穩(wěn)定性很好，但磷酸根具有一定的絡(luò)合能力會(huì)抑制一些與金屬離子有關(guān)的生化反應(yīng)。④HEPES緩沖溶液是較理想的生物緩沖劑，但其有多種生物學(xué)效應(yīng)，如：縮短血液凝固時(shí)間、減緩平滑肌收縮頻率以及阻斷細(xì)胞膜上的陰離子通道等，在一定程度上會(huì)影響患者身體狀態(tài)，使用時(shí)應(yīng)需注意。國(guó)內(nèi)艾偉拓注射用HEPES已登記。

2021年全球HEPES緩沖液市場(chǎng)銷售額達(dá)到了億美元，預(yù)計(jì)2028年將達(dá)到億美元，年復(fù)合增長(zhǎng)率（CAGR）為%（2022-2028）。地區(qū)層面來(lái)看，中國(guó)市場(chǎng)在過(guò)去幾年變化較快，2021年市場(chǎng)規(guī)模為百萬(wàn)美元，約占全球的%，預(yù)計(jì)2028年將達(dá)到百萬(wàn)美元，屆時(shí)全球占比將達(dá)到%。消費(fèi)層面來(lái)說(shuō)，目前地區(qū)是全球比較大的消費(fèi)市場(chǎng)，2021年占有%的市場(chǎng)份額，之后是和，分別占有%和%。預(yù)計(jì)未來(lái)幾年，地區(qū)增長(zhǎng)**快，2022-2028期間CAGR大約為%。生產(chǎn)端來(lái)看，和是比較大的兩個(gè)生產(chǎn)地區(qū)，2021年分別占有%和%的市場(chǎng)份額，預(yù)計(jì)未來(lái)幾年，地區(qū)將保持**快增速，預(yù)計(jì)2028年份額將達(dá)到%。注射級(jí)，低內(nèi)***、國(guó)產(chǎn)化穩(wěn)定供應(yīng)、高性價(jià)比注射級(jí)HEPES找AVT！山東高純HEPES使用注意事項(xiàng)

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(1)hepes緩沖液可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中,再過(guò)濾除菌.每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES,待溶后用lNNaOH調(diào)pH至7.2,濾過(guò)除菌后使用.此時(shí)HEPES的使用濃度為10mmol/L.(2)亦可配成100x貯存液（lmol/L），使用前取99ml培養(yǎng)液加入lml貯存液，**終應(yīng)用濃度仍為10mmol/L。lmol/L（100x）hepes緩沖液配制方法:取23.8gHEPES溶于90ml雙蒸水中,用lNNaOH調(diào)pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,過(guò)濾除菌,分裝小瓶（2ml/瓶）,4℃或-20℃保存.作者：知乎用戶0mmkBe山東輔料HEPES現(xiàn)貨供應(yīng)

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