Tris-HCL與HEPES（供注射用）緩沖液應用對比

**常用的緩沖液有很多，如磷酸鹽緩沖液、Tris-HCl緩沖液、HEPES緩沖液、氨基酸緩沖液等。不同的緩沖液差別液很大，***主要來對比兩種**常用的緩沖液：Tris-HCl緩沖液與HEPES緩沖液各自的應用對比。

1、Tris-HCl緩沖液的應用Tris常用于蛋白或者核酸的緩沖液，其在電泳緩沖液中與甘氨酸構(gòu)成緩沖體系，穩(wěn)定電泳過程中的pH，由于其具有弱堿性，水溶液的pH在10.5左右，可通過添加HCl或者NaOH制備不同pH的緩沖液，根據(jù)緩沖理論，Tris緩沖液的有效范圍通常是pH7.0-9.2之間。此外，Tris還可以制備表面活性劑、硫化促進劑和一些藥物（磷霉素等）的中間物，在化妝品、醫(yī)藥、涂料以及合成中均有應用。應用于體內(nèi)時，Tris作為一種不含鈉的氨基緩沖堿，在體液中與H2CO3結(jié)合，生成碳酸氫鹽。因此它能緩沖酸，而且能降低CO2張力，有糾正急性呼吸性酸中毒和代謝性酸中毒雙重效果，其作用較碳酸氫鈉快而強。HEPES緩沖液對細胞無毒性作用，它是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的pH范圍。使用時濃度為10-50mmol/L，一般培養(yǎng)液內(nèi)含20mmol/LHEPES即可達到緩沖能力。在體外診斷、DNA/RNA提取、脂質(zhì)體藥物等方面均有應用。

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1MHEPES緩沖液用注射級水配制,經(jīng)過無菌過濾,其濃度為238.3g/L。HEPES是一種生物緩沖液,化學性質(zhì)穩(wěn)定,對溫度和濃度變化不敏感。在pH7.2-7.6范圍內(nèi),較碳酸氫鈉緩沖液的緩沖能力更強。1.產(chǎn)品用途：常用的緩沖體系的一部分，可作為細胞培養(yǎng)基添加組分，維持pH恒定，推薦濃度為10-25nM。HEPES緩沖液在細胞培養(yǎng)過程中起什么作用？HEPES是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌嗪乙硫磺酸，主要作用是防止培養(yǎng)基PH迅速變動。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細胞時，由于培養(yǎng)基脫離了5%二氧化碳的環(huán)境，培養(yǎng)液中的二氧化碳迅速逸出，導致PH值迅速升高。若培養(yǎng)液加了HEPES,就可以維持在PH7.0左右。一般在進行克隆化培養(yǎng)時要添加HEPES.北京輔料HEPES現(xiàn)貨GMP條件下生產(chǎn)AVT穩(wěn)定供貨注射級HEPES！

HEPES使用方法有兩種：(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中，再過濾除菌。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES，待溶后用lNNaOH調(diào)pH至7.2，濾過除菌后使用。此時HEPES的使用濃度為10mmol/L。(2)亦可配成100x貯存液(lmol/L)，使用前取99ml培養(yǎng)液加入lml貯存液，**終應用濃度仍為10mmol/L。lmol/L(100x)HEPES貯存液配制方法：取23.8gHEPES溶于90ml雙蒸水中，用lNNaOH調(diào)pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，過濾除菌，分裝小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。需要注意的是，HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L，對細胞無毒性作用。一般情況下，濃度為20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力?，F(xiàn)在市售HEPES為約10g包裝的小瓶，大家根據(jù)實際情況正確靈活配制就OK了

各種配制方法總結(jié)如下：一、500ml1MHEPES,pH=7.0Stocksolution的配制119.15gHEPES溶解在400ml蒸餾水中，加0.5~1M的NaOH水溶液調(diào)節(jié)至少所需pH(HEPES的有效pH范圍是6.8~8.2)，然后用蒸餾水定容至500ml，于4攝氏度保存。二、加少量鹽的HEPESBuffer配方(500ml)HEPES6.5g、NaCl8.0g、Na2HPO4.7H2O0.198g、用0.5MNaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值，***定容。三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制將1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucanordextran)和1gHEPES溶解在90ml的蒸餾水，用0.5MNaOH調(diào)節(jié)至所需pH值，再用蒸餾水定容至100ml即可。國內(nèi)AVT穩(wěn)定供貨注射級HEPES！

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生物緩沖劑在生物化學研究中有著重要的意義，在免疫印跡、生物芯片及生物雜交等實驗及體外診斷、生物醫(yī)藥等行業(yè)中的應用非常***。注射級氨丁三醇緩沖液優(yōu)點如下：1.Tris堿的堿性較強，所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液，應用范圍廣；2.Tris緩沖液對生物化學過程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀；3.Tris在水中溶解度高，對很多酶的反應是惰性的；4.Tris緩沖能力高，在pH7.5-9.0之間有較強的緩沖能力；5.Tris緩沖劑應用***，在生物化學、分子生物學、體外診斷、化妝品、涂料等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。上海大批量HEPES批量