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復(fù)蘇凍存的細(xì)胞1.收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落的原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,是因熱脹冷縮的物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。2.冷凍管應(yīng)如何解凍?將冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),必須注意安全,可佩戴防護(hù)眼鏡和手套預(yù)防冷凍管的爆裂。取出冷凍管后,須立即放入37℃水浴環(huán)境中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損害。并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。3.細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí),是否應(yīng)馬上去除DMSO?現(xiàn)在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室會(huì)在解凍細(xì)胞后加培養(yǎng)液將DMSO出去,但也有研究者認(rèn)為除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO敏感的細(xì)胞外,絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞),在解凍之后,可直接放入含有10~15ml新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)角瓶中,待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可,如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附的問(wèn)題。 NEST凍存管管壁是加厚的。蕪湖5mlNEST凍存管
凍存管選用醫(yī)用聚丙烯,主要是為了存放生物體樣品的實(shí)驗(yàn)室材料。在液氮的氣體情況氛圍下,可抗低溫至零下溫度187℃。特殊的外旋設(shè)計(jì)方案防止了交叉式嚴(yán)重污染的概率。管帽內(nèi)裝有硅膠墊以防止液態(tài)泄露,即便在低儲(chǔ)存溫度下也可以保證密閉性,終保證了管內(nèi)樣品的安全。管帽裝有的許多可置入的色標(biāo)便于鑒別。管體上的白色標(biāo)識(shí)區(qū)和清楚的刻度,便于應(yīng)用人做標(biāo)識(shí)與校準(zhǔn)容積。大離心力能夠達(dá)到17000g。全部冷凍管都選用伽馬消毒滅菌,無(wú)DNA酶、無(wú)RNA酶、無(wú)熱源。微生物實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的菌種保藏方法有許多。復(fù)雜性各不相同,實(shí)際效果也差距非常大?,F(xiàn)階段國(guó)內(nèi)的大部分實(shí)驗(yàn)室全是實(shí)驗(yàn)操作工作人員自主制做菌種保藏管,這不但擴(kuò)大了工作強(qiáng)度,而且因?yàn)樵S多條件的限定,菌種保藏實(shí)際效果不可以一直讓人滿意。菌種保藏管的出現(xiàn)促使這種變得極為容易。鹽城0.5mlNEST凍存管圓底可立NEST凍存管是滅菌的嗎?
凍存管又叫離心管,也叫螺帽管,是實(shí)驗(yàn)室里常見(jiàn)的一種實(shí)驗(yàn)室耗材,已經(jīng)成為所有實(shí)驗(yàn)室、工業(yè)和研究領(lǐng)域及日常工作的一個(gè)不可缺少的部分。凍存管主要是配合離心機(jī)使用,在實(shí)驗(yàn)室常用的材質(zhì)有塑料和玻璃。玻璃材質(zhì)的凍存管不能用在高速或者超速離心機(jī)上,因此塑料材質(zhì)的凍存管用的比較多,下面向大家簡(jiǎn)單介紹一下不同的塑料材質(zhì):1、PP(聚丙烯):半透明,化學(xué)及溫度穩(wěn)定性較好,但是在低溫下會(huì)變脆,所以在離心時(shí)不要在4℃以下。2、PC(聚碳酸酯):透明度較好,硬度大,可以高溫消毒,但不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿以及一些有機(jī)溶劑如酒精之類。主要用于5萬(wàn)轉(zhuǎn)以上的超高速離心。3、PE(聚乙烯):不透明,和、醋酸、鹽酸等不反應(yīng),較為穩(wěn)定,高溫下容易變軟。4、PA(聚酰胺):這種材質(zhì)是PP和PE材質(zhì)的聚合物,半透明,化學(xué)性質(zhì)非常穩(wěn)定,單不耐高溫。5、PS(聚苯乙烯):透明,硬度大,對(duì)大多數(shù)的水溶液穩(wěn)定,但是會(huì)被多種有機(jī)物腐蝕,多用于低速離心,而且一般是一次性使用。6、PF(聚氟):半透明,可以低溫使用,如果是-100℃、-140℃下的實(shí)驗(yàn)環(huán)境,就可以用這種材質(zhì)的離心管。7、CAB(醋酸丁酯纖維素):透明,可用于較稀的酸、堿、鹽,以及酒精、蔗糖的梯度測(cè)定。
凍存管在使用過(guò)程中,將細(xì)菌接種在保存管內(nèi),放置于-20℃或-80℃環(huán)境中可長(zhǎng)期保存。(-20℃可保存一年,-80℃可保存兩年)。細(xì)菌菌株的保存始終是實(shí)驗(yàn)室一個(gè)必不可少的工作。長(zhǎng)期以來(lái),形成了平板傳代法、斜面?zhèn)鞔?、凍干法等多種保存方法。隨著可保存時(shí)間的由短到長(zhǎng),保存復(fù)雜程度及對(duì)相應(yīng)設(shè)備的要求也是逐步增加。如何取得可保存時(shí)間與保存復(fù)雜程度之間的比較好關(guān)系,是菌種保存方法的關(guān)鍵。使用步驟:1.直接刮取平皿上生長(zhǎng)的新鮮培養(yǎng)物置入菌種保存管中2.一般一個(gè)平皿的純培養(yǎng)物可保存兩個(gè)菌種保存管3.使用時(shí)用接種針從菌種保存管中取出一個(gè)小瓷珠直接劃線平板或置入相應(yīng)增菌液中。NEST凍存管外旋優(yōu)點(diǎn)是什么?
凍存管使用中的問(wèn)題及解決方案。冷凍保存細(xì)胞的方法?冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃30~60分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序的可程序降溫機(jī)中每分鐘降1~3℃至–80℃以下,再放入液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。–20℃不可超過(guò)1小時(shí),以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入–80℃冰箱中,存活率稍微降低一些。細(xì)胞凍存太多會(huì)不會(huì)浪費(fèi)?每一種細(xì)胞系都應(yīng)有充足的凍存儲(chǔ)備,防止由于細(xì)胞污染等因素造成的細(xì)胞系的絕種,而且每一批次培養(yǎng)的細(xì)胞狀態(tài)都不同,應(yīng)該挑選幾個(gè)狀態(tài)較好的批次凍存保種。另外二倍體細(xì)胞等有限細(xì)胞系如果暫時(shí)不用應(yīng)凍存以免傳代太多,造成細(xì)胞衰老或者發(fā)生改變。 NEST凍存管有哪些類型呢?浙江4mlNEST凍存管
凍存管帶二維碼的這么識(shí)別?蕪湖5mlNEST凍存管
一、如何處理收到的細(xì)胞1.新買(mǎi)的或惠贈(zèng)的細(xì)胞如何處理?不管買(mǎi)的細(xì)胞、惠贈(zèng)的細(xì)胞,剛拿到手應(yīng)趕緊做這幾件事:檢測(cè)瓶子是否破裂;培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁;是否有支原體污染;迅速擴(kuò)增凍存。2.能否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基?不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基,細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無(wú)法存活。3.購(gòu)買(mǎi)的細(xì)胞死亡或存活率不佳可能原因?常見(jiàn)原因可能有:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳;血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳;解凍過(guò)程錯(cuò)誤;冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心;懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞;培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤;培養(yǎng)箱氣體濃度達(dá)不到要求;細(xì)胞置于–80℃太久。使用中問(wèn)題:1.收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落的原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫,是因熱脹冷縮的物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí),均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 蕪湖5mlNEST凍存管
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