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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-09-20

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細(xì)胞凍存為了減少我們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)時(shí)的細(xì)胞代謝頻率,從而進(jìn)行長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),是細(xì)胞保存的主要方法之一,起到了細(xì)胞保種的作用。那么,細(xì)胞凍存的需要用到哪些細(xì)胞培養(yǎng)耗材,其凍存步驟又是怎樣的呢?利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞凍存需要用到的細(xì)胞培養(yǎng)耗材包括凍存管、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、吸管、移液管等。待凍存細(xì)胞懸液的制備(1)按常規(guī)方法消化處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞培養(yǎng)物,制備單細(xì)胞懸液,并計(jì)算細(xì)胞總數(shù);(2)將細(xì)胞懸液以800~1000r/min離心5min,去上清夜;(3)向細(xì)胞沉淀物中加入冷凍保護(hù)液,輕輕吹打混勻,使細(xì)胞密度達(dá)1×106~1×107個(gè)/ml;(4)按每管1~1.5ml的量分裝于凍存管內(nèi),擰緊管蓋;(5)將凍存管上做好標(biāo)記,包括細(xì)胞代號(hào)及凍存日期。上海4mlNEST凍存管代理凍存管帶二維碼的是不是更好?

凍存管一般指菌種保存管,菌種保存管主要由保存液、保存管和小瓷珠三部分組成,它是一種實(shí)驗(yàn)室保存菌種的容器,用于菌種的保存或者轉(zhuǎn)移,一般菌種保存管內(nèi)有25顆小瓷珠用于細(xì)菌的吸附和保存。使用過(guò)程中,將細(xì)菌接種在保存管內(nèi),放置于-20℃或-80℃環(huán)境中可長(zhǎng)期保存。(-20℃可保存一年,-80℃可保存兩年)。細(xì)菌菌株的保存始終是實(shí)驗(yàn)室一個(gè)必不可少的工作。長(zhǎng)期以來(lái),形成了平板傳代法、斜面?zhèn)鞔?、凍干法等多種。保存方法:隨著可保存時(shí)間的由短到長(zhǎng),保存復(fù)雜程度及對(duì)相應(yīng)設(shè)備的要求也是逐步增加。如何取得可保存時(shí)間與保存復(fù)雜程度之間的比較好關(guān)系,是菌種保存方法的關(guān)鍵。

冷凍保存管在使用過(guò)程中,應(yīng)在保存管內(nèi)接種細(xì)菌,可在-20或-80長(zhǎng)期保存。(可在-20保存一年,在-80保存兩年)。細(xì)菌菌株的保存一直是實(shí)驗(yàn)室的一項(xiàng)基本工作。長(zhǎng)期以來(lái),形成了平板傳代、斜面?zhèn)鞔?、凍干等多種保存方法。隨著存儲(chǔ)時(shí)間的縮短,存儲(chǔ)的復(fù)雜性和對(duì)相應(yīng)設(shè)備的要求也逐漸提高。如何在保存時(shí)間和保存復(fù)雜度之間獲得比較好關(guān)系是菌種保存方法的關(guān)鍵。使用步驟:1。直接刮取平板上生長(zhǎng)的新鮮培養(yǎng)物,放入菌種保存管中;2.一般一個(gè)平板的純培養(yǎng)可以保存兩個(gè)菌種保藏管;3.使用時(shí),用接種針從菌種保存管中取出小瓷珠,直接劃線(xiàn)平板或放入相應(yīng)的菌種增菌液中。NEST凍存管分外旋內(nèi)旋兩種。

凍存管可保存一般細(xì)菌、苛刻菌,霉菌、酵母菌等***也可在低溫條件下通過(guò)菌種保存管保存,因此菌種保存管被廣泛應(yīng)用于臨床領(lǐng)域(臨床藥敏試驗(yàn)菌株的保存)、疾控領(lǐng)域(監(jiān)測(cè)分離到的菌株的保存)、菌種保存中心(菌株的日常取用與保存)以及制藥企業(yè)(陽(yáng)性對(duì)照菌株保存和取用)等領(lǐng)域。從原理上講,所有菌種都可用瓷珠菌種保存管保存。菌種保存的原理是DNA復(fù)制時(shí)自發(fā)突變導(dǎo)致菌種退化,因此要?jiǎng)?chuàng)造代謝不活潑的狀態(tài),干燥、低溫、缺氧、缺營(yíng)養(yǎng)的環(huán)境,創(chuàng)造的環(huán)境越接近此狀態(tài),所保存的菌種的時(shí)間就越長(zhǎng)。但需要注意的是,由于苛刻菌(如流感嗜血桿菌、腦膜炎萘瑟氏菌)等特殊細(xì)菌保存時(shí),需-80℃或更低溫度保存,才可以做到更長(zhǎng)期的保存。NEST凍存管可耐受低溫冷凍和液氮冷凍。閔行區(qū)1.2mlNEST凍存管包裝規(guī)格

NEST凍存管有圓底可立的。上海4mlNEST凍存管代理

凍存管的使用方法1、使用凍存管儲(chǔ)存樣本時(shí),嚴(yán)格要求應(yīng)把凍存管放入液氮的氣相層或冰箱中保存。如果凍存管儲(chǔ)存于液氮液體中,液氮有一定幾率會(huì)滲入凍存管內(nèi)部,復(fù)蘇時(shí)液氮?dú)饣瘜?dǎo)致管內(nèi)外壓力不平衡,這樣極易造成凍存管的炸裂,并具有生物危害性,并導(dǎo)致稀有樣本丟失。2、操作凍存管復(fù)蘇,全程使用安全防護(hù)設(shè)備,建議穿實(shí)驗(yàn)服、戴棉質(zhì)手套且在安全的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上進(jìn)行操作。條件允許情況下,請(qǐng)佩戴護(hù)目鏡或防護(hù)面罩。由于夏季室內(nèi)溫度會(huì)高于冬季,請(qǐng)格外小心。3、凍存細(xì)胞儲(chǔ)存過(guò)程中,凍存管的冷凍溫度須均勻。不均勻的受凍將會(huì)導(dǎo)致冰塞的產(chǎn)生,冰塞會(huì)抑制兩側(cè)的液體溫度傳遞進(jìn)而產(chǎn)生危險(xiǎn)的高壓力并導(dǎo)致凍存管受損。4、凍存的樣本量不要超過(guò)凍存管要求的大工作體積。上海4mlNEST凍存管代理