正反色譜

正相色譜法

采用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動相為相對非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節(jié)組分的保留時間。常用于分離中等極性和極性較強的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。

反相色譜法

一般用非極性固定相（如C18、C8)；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、**、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節(jié)保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用**為***，據統(tǒng)計，它占整個HPLC應用的80%左右。

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高效液相色譜的應用

高效液相色譜應用非常***，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。

(1)分離混合物

高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。

通過與試樣預處理技術相配合，高效液相色譜法所達到的高分辨率和高靈敏度，可分離并同時測定性質上十分相近的物質，能夠分離復雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發(fā)展，還可在充分保持生化物質活性的條件下完成對其的分離。

(2)生化分析

由于高效液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領域，并已成為解決生化分析問題**有前途的方法。

(3)儀器聯(lián)用

高效液相色譜儀與結構儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。高效液相色譜一質譜聯(lián)用技術受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等：高效液相色譜一紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類等．使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。 湖南Vanquish液相色譜系統(tǒng)廠家直銷使用適合反向梯度的 Vanquish Duo 提高實驗室定量檢測能力。

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液相色譜類型

液相色譜按其分離機理，可分為四種類型--吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法

分配色譜法

這種色譜的流動相和固定相都是液體，樣品分子在兩個液相之間很快達到平衡分配，利用各組分在兩相中分配系數的差異進行分離，類似于萃取過程。

一般常用的固定液有β,β'-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEG400～4000)、三甲撐乙二醇(TMG)和角鯊烷(SQ)。采用與氣相色譜(GC)同樣的方法，將固定液涂漬在多孔的載體表面，但在使用中固定液易流失。目前，應用較多的是鍵合固定相。在這種固體相中，固定液不是涂在載體表面，而是通過化學反應在純硅膠顆粒表面鍵合上某種有機基團。

例如，利用氯代十八烷基硅烷與硅膠表面的羥基(-OH)之間的反應就可以形成一烷基化表面。這種固定液的優(yōu)點是不易被流動相剝蝕。在分配色譜法中，流動相可為純溶劑，也可以采用混合溶劑進行梯度淋洗，其極性應與固定液差別大一些，以避免兩者之間相溶。通常可分為正相分配和反相分配。

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液相色譜理論

發(fā)展簡況

液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。

它與經典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也稱現代液相色譜。