高效液相色譜相對(duì)分子質(zhì)量
對(duì)于相對(duì)分子質(zhì)量較低(一般在200以下),揮發(fā)性比較好,加熱又不易分解的樣品,可以選擇氣相色譜法進(jìn)行分析。相對(duì)分子質(zhì)量在200 ~ 2000的化合物,可用液固吸附、液-液分配和離子交換色譜法。相對(duì)分子質(zhì)量高于2000,則可用空間排阻色譜法。
高效液相色譜溶解度
水溶性樣品比較好用離子交換色譜法和液液分配色譜法;微溶于水,但在酸或堿存在下能很好電離的化合物,也可用離子交換色譜法;油溶性樣品或相對(duì)非極性的混合物,可用液-固色譜法。
高效液相色譜化學(xué)結(jié)構(gòu)
若樣品中包含離子型或可離子化的化合物,或者能與離子型化合物相互作用的化合物(例如配位體及有機(jī)螯合劑),可首先考慮用離子交換色譜,但空間排阻和液液分配色譜也都能順利地應(yīng)用于離子化合物;異構(gòu)體的分離可用液固色譜法;具有不同官能團(tuán)的化合物、同系物可用液液分配色譜法;對(duì)于高分子聚合物,可用空間排阻色譜法。 可支持三個(gè)工作流程。雙梯度流路。同一集成式系統(tǒng)。新疆液相色譜系統(tǒng)
液相色譜類(lèi)型
液相色譜按其分離機(jī)理,可分為四種類(lèi)型--吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法
吸附色譜法
吸附色譜法的固定相為吸附劑,色譜的分離過(guò)程是在吸附劑表面進(jìn)行的,不進(jìn)入固定相的內(nèi)部。與氣相色譜不同,流動(dòng)相(即溶劑)分子也與吸附劑表面發(fā)生吸附作用。在吸附劑表面,樣品分子與流動(dòng)相分子進(jìn)行吸附競(jìng)爭(zhēng),因此流動(dòng)相的選擇對(duì)分離效果有很大的影響,一般可采用梯度淋洗法來(lái)提高色譜分離效率。
在聚合物的分析中,吸附色譜一般用來(lái)分離添加劑,如偶氮染料、抗氧化劑、表面活性劑等,也可用于石油烴類(lèi)的組成分析。
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Vanquish Duo 系統(tǒng)可采用多種分析檢測(cè)器,包括質(zhì)譜(MS)、二極管陣列檢測(cè)(DAD)、電霧式檢(CAD)、可變波長(zhǎng)檢測(cè)(VWD)和熒光檢測(cè)(FLD)。
提供強(qiáng)大的分離性能
采用兩個(gè)相似的或者不同的色譜柱運(yùn)行樣品以提高通量或盡可能提**析效率。也可以額外選配一個(gè)柱溫箱,以分別進(jìn)行色譜柱的溫度控制。
簡(jiǎn)化操作
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高效液相色譜的應(yīng)用
高效液相色譜應(yīng)用非常***,幾乎遍及定量定性分析的各個(gè)領(lǐng)域。
(1)分離混合物
高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動(dòng)相可選擇的范圍寬,固定相的種類(lèi)繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。
通過(guò)與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,高效液相色譜法所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度,可分離并同時(shí)測(cè)定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì),能夠分離復(fù)雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發(fā)展,還可在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成對(duì)其的分離。
(2)生化分析
由于高效液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機(jī)分析等各種領(lǐng)域,并已成為解決生化分析問(wèn)題**有前途的方法。
(3)儀器聯(lián)用
高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等:高效液相色譜一紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快,如在環(huán)境污染分析測(cè)定水中的烴類(lèi)等.使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。 使用可用于所有主要移動(dòng)平臺(tái)的 Chromeleon App,直接從平板電腦方便控制和監(jiān)測(cè)您的實(shí)驗(yàn)。
賽默飛高效液相色譜業(yè)務(wù)副總裁兼總經(jīng)理Fraser McLeod表示:“在整個(gè)生物制藥的流程中,從藥物研發(fā)到質(zhì)控的批次放行,數(shù)據(jù)完整性對(duì)于決策是必不可少的。為快速獲取可靠結(jié)果,靈敏度和通量非常關(guān)鍵。我們開(kāi)發(fā)出的這套系統(tǒng)展示出在復(fù)雜分析應(yīng)用時(shí)的**辨分離和重復(fù)性?!?
? Vanquish Flex UHPLC系統(tǒng)采用獨(dú)特設(shè)計(jì),即便在高通量的情況下,仍可以保證分析物色譜峰擁有尖銳峰形,實(shí)現(xiàn)在較短時(shí)間內(nèi)分析更多樣品。該系統(tǒng)良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性為數(shù)據(jù)質(zhì)量提供了可靠保障,確保能夠分析大量的樣品,以供質(zhì)控分析比較。其重要特點(diǎn)如下:
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高效液相色譜分離原理
離子對(duì)
(Ion Pair Chromatography)
離子對(duì)色譜法是將一種 ( 或多種 ) 與溶質(zhì)分子電荷相反的離子 ( 稱(chēng)為對(duì)離子或反離子 ) 加到流動(dòng)相或固定相中,使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水型離子對(duì)化合物,從而控制溶質(zhì)離子的保留行為。其原理可用下式表示:X水相Y-水相 === X Y-有機(jī)相
式中:X 水相--流動(dòng)相中待分離的有機(jī)離子(也可是陽(yáng)離子);Y-水相--流動(dòng)相中帶相反電荷的離子對(duì)(如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等);X Y---形成的離子對(duì)化合物。
當(dāng)達(dá)平衡時(shí):
KXY = [X Y-]有機(jī)相/[ X ]水相[Y-]水相
根據(jù)定義,分配系數(shù)為:
DX= [X Y-]有機(jī)相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相
[討論:DX與保留值的關(guān)系]
離子對(duì)色譜法(特別是反相)解決了以往難以分離的混合物的分離問(wèn)題,諸如酸、堿和離子、非離子混合物,特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等分離。
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