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賽默飛高效液相色譜業(yè)務副總裁兼總經理FraserMcLeod表示：“在整個生物制藥的流程中，從藥物研發(fā)到質控的批次放行，數據完整性對于決策是必不可少的。為快速獲取可靠結果，靈敏度和通量非常關鍵。我們開發(fā)出的這套系統(tǒng)展示出在復雜分析應用時的**辨分離和重復性?！?VanquishFlexUHPLC系統(tǒng)采用獨特設計，即便在高通量的情況下，仍可以保證分析物色譜峰擁有尖銳峰形，實現在較短時間內分析更多樣品。該系統(tǒng)良好的穩(wěn)定性和重復性為數據質量提供了可靠保障，確保能夠分析大量的樣品，以供質控分析比較。其重要特點如下：?新型四元梯度泵模塊，設計穩(wěn)健，性能良好，保證高通量的前提下依然可提供方法開發(fā)的靈活性。...

高效液相色譜法介紹基本原理高效液相色譜(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)，是在經典液相色譜法的基礎上，于20世紀60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。與經典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻。因為較小的填充顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，***通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。高效液相色譜作為一種重要的分析方法，***...

高效液相色譜分離原理空間排阻(StericExclusionChromatography)空間排阻色譜法以凝膠(gel)為固定相。它類似于分子篩的作用，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多，一般為數納米到數百納米。溶質在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來進行分離，而是按分子大小進行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質的流動力學體積或分子大小有關。試樣進入色譜柱后，隨流動相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過。在試樣中一些太大的分子不能進入膠孔而受到排阻，因此就直接通過柱子，首先在色譜圖上出現，一些很小的分子可以進入所有膠孔并滲透到顆粒中，這些組分在柱上的保留值比較大，在色譜圖上***出現。線性達 3000 mA...

液相色譜與氣相色譜的比較 液相色譜所用基本概念：保留值、塔板數、塔板高度、分離度、選擇性等與氣相色譜一致。液相色譜所用基本理論：塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致，但由于在液相色譜中以液體代替氣相色譜中氣體作為流動相，而液體和氣體的性質不相同。此外，液相色譜所用的儀器設備和操作條件也與氣相色譜不同，所以，液相色譜與氣相色譜有一定的差別。 主要有以下幾力‘面： ①操作條件及應用范圍不同 ②液相色譜能完成難度較高的分離工作 ③由于液體的擴散性比氣體的小105倍，因此，溶質在液相中的傳質速率慢，柱外效應就顯得特別重要；而在氣相色譜中，由色譜柱外區(qū)域引起的...

高效液相色譜的應用 高效液相色譜應用非常***，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。 (1)分離混合物 高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。 通過與試樣預處理技術相配合，高效液相色譜法所達到的高分辨率和高靈敏度，可分離并同時測定性質上十分相近的物質，能夠分離復雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發(fā)展，還可在充分保持生化物質活性的條件下完成對其的分離。 (2)生化分析 由于高效液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜...

高效液相色譜的應用 高效液相色譜應用非常***，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。 (1)分離混合物 高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。 通過與試樣預處理技術相配合，高效液相色譜法所達到的高分辨率和高靈敏度，可分離并同時測定性質上十分相近的物質，能夠分離復雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發(fā)展，還可在充分保持生化物質活性的條件下完成對其的分離。 (2)生化分析 由于高效液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜...

高效液相色譜分離原理 離子 (Ion Chromatography) 用離子交換樹脂為固定相，電解質溶液為流動相。以電導檢測器為通用檢測器，為消除流動相中強電解質背景離子對電導檢測器的干擾，設置了***柱。試樣組分在分離柱和***柱上的反應原理與離子交換色譜法相同。 以陰離子交換樹脂(R-OH)作固定相，分離陰離子（如Br-）為例。當待測陰離子Br-隨流動相(NaOH)進入色譜柱時，發(fā)生如下交換反應（洗脫反應為交換反應的逆過程）： ***柱上發(fā)生的反應： R-H Na OH- === R-Na H2O R-H Na Br- === ...

串聯 LC 或 LC-MS應用提**析通量 Vanquish Duo系統(tǒng) 串聯 LC 或 LC-MS 的 Vanquish Duo 系統(tǒng)將兩個泵和兩個色譜柱之間的分析分開。一個泵運行分析梯度，而另一個泵運行再生平衡梯度。您可通過該項配置，使用兩個相同的色譜柱更快地運行序列，而不影響數據品質。 串聯 LC 或 LC-MS（Thermo Scientific? Q Exactive? HF 組合型四極桿 Orbitrap? 質譜儀）的Thermo Scientific? Vanquish? Horizon Duo UHPLC 系統(tǒng)的重現性結果，在此顯示了五個總離子流...

高效液相色譜分離原理 空間排阻 (Steric Exclusion Chromatography) 空間排阻色譜法以凝膠(gel) 為固定相。它類似于分子篩的作用，但凝膠的孔徑比分子篩要大得多，一般為數納米到數百納米。溶質在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來進行分離，而是按分子大小進行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質的流動力學體積或分子大小有關。試樣進入色譜柱后，隨流動相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過。在試樣中一些太大的分子不能進入膠孔而受到排阻，因此就直接通過柱子，首先在色譜圖上出現，一些很小的分子可以進入所有膠孔并滲透到顆粒中，這些組分在柱上的保留值比較大，在...

液相色譜類型 液相色譜按其分離機理，可分為四種類型--吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法 分配色譜法 這種色譜的流動相和固定相都是液體，樣品分子在兩個液相之間很快達到平衡分配，利用各組分在兩相中分配系數的差異進行分離，類似于萃取過程。 一般常用的固定液有β,β'-氧二丙腈(ODPN)、聚乙二醇(PEG400～4000)、三甲撐乙二醇(TMG)和角鯊烷(SQ)。采用與氣相色譜(GC)同樣的方法，將固定液涂漬在多孔的載體表面，但在使用中固定液易流失。目前，應用較多的是鍵合固定相。在這種固體相中，固定液不是涂在載體表面，而是通過化學反應在純...

正反色譜 正相色譜法 采用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動相為相對非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節(jié)組分的保留時間。常用于分離中等極性和極性較強的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。 反相色譜法 一般用非極性固定相（如C18、C8)；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、**、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節(jié)保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用**為***，據統(tǒng)計，它占整個HPLC應用的80%左右。 整機兼具一體式系統(tǒng)的耐用...

液相色譜與氣相色譜的比較 液相色譜所用基本概念：保留值、塔板數、塔板高度、分離度、選擇性等與氣相色譜一致。液相色譜所用基本理論：塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致，但由于在液相色譜中以液體代替氣相色譜中氣體作為流動相，而液體和氣體的性質不相同。此外，液相色譜所用的儀器設備和操作條件也與氣相色譜不同，所以，液相色譜與氣相色譜有一定的差別。 主要有以下幾力‘面： ①操作條件及應用范圍不同 ②液相色譜能完成難度較高的分離工作 ③由于液體的擴散性比氣體的小105倍，因此，溶質在液相中的傳質速率慢，柱外效應就顯得特別重要；而在氣相色譜中，由色譜柱外區(qū)域引起的...

液相色譜與氣相色譜的比較 液相色譜所用基本概念：保留值、塔板數、塔板高度、分離度、選擇性等與氣相色譜一致。液相色譜所用基本理論：塔板理論與速率方程也與氣相色譜基本一致，但由于在液相色譜中以液體代替氣相色譜中氣體作為流動相，而液體和氣體的性質不相同。此外，液相色譜所用的儀器設備和操作條件也與氣相色譜不同，所以，液相色譜與氣相色譜有一定的差別。 主要有以下幾力‘面： ①操作條件及應用范圍不同 ②液相色譜能完成難度較高的分離工作 ③由于液體的擴散性比氣體的小105倍，因此，溶質在液相中的傳質速率慢，柱外效應就顯得特別重要；而在氣相色譜中，由色譜柱外區(qū)域引起的...

高效液相色譜相關術語 色譜圖(chromatogram)——樣品流經色譜柱和檢測器，所得到的信號-時間曲線，又稱色譜流出曲線(elution profile)。 基線(base line)——經流動相沖洗，柱與流動相達到平衡后，檢測器測出一段時間的流出曲線。一般應平行于時間軸。 噪音(noise)——基線信號的波動。通常因電源接觸不良或瞬時過載、檢測器不穩(wěn)定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。 漂移(drift)——基線隨時間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動相及流量的不穩(wěn)定所引起，柱內的污染物或固定相不斷被洗脫下來也會產生漂移。 ...

高效液相色譜相關術語 色譜峰(peak)——組分流經檢測器時響應的連續(xù)信號產生的曲線。流出曲線上的突起部分。正常色譜峰近似于對稱形正態(tài)分布曲線（高斯Gauss曲線）。不對稱色譜峰有兩種： 前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。前者少見。 峰底—基線上峰的起點至終點的距離。 峰高(peak height，h)—峰的比較高點至峰底的距離。 峰寬（peak width，W)—峰兩側拐點處所作兩條切線與基線的兩個交點間的距離。W=4σ 半峰寬（peak width at half-height，Wh/2)—峰高一半處的峰...

Vanquish 系統(tǒng)譜寫了**UHPLC的新篇章 該系統(tǒng)不論是單獨使用還是與更新的質譜儀聯用都具有更高的性能、生產率和易用性。其設計以色譜柱和用戶為中心，系統(tǒng)耐壓22,000 psi，整機兼具一體式系統(tǒng)的耐用性和模塊化系統(tǒng)的靈活性，便于維修，是賽默飛所有知識和熱情的結晶，能夠滿足色譜工作者對于**UHPLC的分析需求。值得一提的是，Vanquish系統(tǒng)的高度比原有的模塊化系統(tǒng)降低了25%，從而更加方便亞洲人的操作。此外，Vanquish UHPLC 系統(tǒng)還是一套整合的、生物兼容的系統(tǒng)。不論是單獨使用還是與***的質譜儀聯用，該系統(tǒng)都表現出更高水平的性能、生產率和易用性。上海賽默飛世爾液相色譜...

賽默飛Vanquish超高效液相色譜系統(tǒng)**了色譜領域又一次**性變革，同時譜寫了**UHPLC的新篇章，在Pittcon 2015上，更是以年度*佳分離產品一舉拿下“科學家選擇獎”。賽默飛Vanquish超高效液相色譜系統(tǒng)不論是單獨使用還是與*新的質譜儀聯用都具有更高的性能、生產率和易用性。其設計以色譜柱和用戶為中心，系統(tǒng)耐壓22,000 psi，整機兼具一體式系統(tǒng)的耐用性和模塊化系統(tǒng)的靈活性，便于維修，是賽默飛所有知識和熱情的結晶，能夠滿足色譜工作者對于**UHPLC的分析需求。值得一提的是，的高度比原有的模塊化系統(tǒng)降低了25%，從而更加方便亞洲人的操作。此外，Vanquish UHPLC...

高效液相色譜的歷史 1903年俄國植物化學家茨維特（Tswett）***提出“色譜法”（Chromatography）和“色譜圖”（Chromatogram）的概念。茨維特使用色譜法 chromatography 來描述他的彩色試驗。 1930年以后，相繼出現了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術。 1952年，英國學者Martin和Synge 基于他們在分配色譜方面的研究工作，提出了關于氣－液分配色譜的比較完整的理論和方法，把色譜技術向前推進了一大步，這是氣相色譜在此后的十多年間發(fā)展十分迅速的原因。 1958年，基于Moore和Stein的工作，離...

高效液相色譜相關術語 峰面積(peak area，A)—峰與峰底所包圍的面積。 保留時間(retention time，tR)——從進樣開始到某個組分在柱后出現濃度極大值的時間。 理論塔板數(theoretical plate number，N)——用于定量表示色譜柱的分離效率（簡稱柱效）。 分離度(resolution，R)——相鄰兩峰的保留時間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。R≥1.5稱為完全分離。 《中國藥典》規(guī)定R應大于1.5。 拖尾因子(tailing factor，T)——T=，用...

液相色譜類型 液相色譜按其分離機理，可分為四種類型--吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法 凝膠色譜法 目前，凝膠色譜法既適用于水溶液的體系，又適用于有機溶劑的體系。當所用的洗脫劑為水溶液時，稱為凝膠過濾色譜，凝膠過濾色譜在生物界的應用比較多；采用有機溶劑為洗脫劑時，稱為凝膠滲透色譜，凝膠滲透色譜在高分子領域應用比較多。 四種不同類型的液相色譜，可以依據樣品性質的不同，選擇不同的方法，靈活應用。 可支持三個工作流程。雙梯度流路。同一集成式系統(tǒng)。上海Vanquish液相色譜系統(tǒng)價格 串聯 LC 或 LC-MS應用提**析通量 Van...

反梯度應用 Vanquish Duo 系統(tǒng) 提高定量分析水平，獲取更多未知化合物信息 反梯度的 Vanquish Duo 系統(tǒng)可通過電霧式檢測技術（CAD）為所有檢測分析物提供一致的響應。等度分離可產生一致的 CAD 響應，但某些分離需要采用梯度洗脫導致相應不一致。Vanquish Duo系統(tǒng)通過使用第二個泵對檢測器輸送反向梯度，可實現： ? 采用 CAD 檢測器在梯度洗脫條件下獲得一致的響應 ? 在無標準品的情況下，可靠地定量已知和未知化合物 ? 通過自動反梯度計算功能考查所有系統(tǒng)體積，簡化了方法設置 無論化合物何...

高效液相色譜分離原理 離子對 (Ion Pair Chromatography) 離子對色譜法是將一種 ( 或多種 ) 與溶質分子電荷相反的離子 ( 稱為對離子或反離子 ) 加到流動相或固定相中，使其與溶質離子結合形成疏水型離子對化合物，從而控制溶質離子的保留行為。其原理可用下式表示：X水相Y-水相 === X Y-有機相 式中：X 水相--流動相中待分離的有機離子（也可是陽離子）；Y-水相--流動相中帶相反電荷的離子對（如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等）；X Y---形成的離子對化合物。 當達平衡時： KXY = [X Y-]有機相/[...

高效液相色譜相關術語 色譜峰(peak)——組分流經檢測器時響應的連續(xù)信號產生的曲線。流出曲線上的突起部分。正常色譜峰近似于對稱形正態(tài)分布曲線（高斯Gauss曲線）。不對稱色譜峰有兩種： 前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。前者少見。 峰底—基線上峰的起點至終點的距離。 峰高(peak height，h)—峰的比較高點至峰底的距離。 峰寬（peak width，W)—峰兩側拐點處所作兩條切線與基線的兩個交點間的距離。W=4σ 半峰寬（peak width at half-height，Wh/2)—峰高一半處的峰...

高效液相色譜相對分子質量 對于相對分子質量較低（一般在200以下），揮發(fā)性比較好，加熱又不易分解的樣品，可以選擇氣相色譜法進行分析。相對分子質量在200 ~ 2000的化合物，可用液固吸附、液-液分配和離子交換色譜法。相對分子質量高于2000，則可用空間排阻色譜法。 高效液相色譜溶解度 水溶性樣品比較好用離子交換色譜法和液液分配色譜法；微溶于水，但在酸或堿存在下能很好電離的化合物，也可用離子交換色譜法；油溶性樣品或相對非極性的混合物，可用液-固色譜法。 高效液相色譜化學結構 若樣品中包含離子型或可離子化的化合物，或者能與離子型化合物相互作用的化合物（例如配位體...

高效液相色譜法介紹 基本原理 高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，是在經典液相色譜法的基礎上，于20世紀60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。與經典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻。因為較小的填充顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。 使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，***通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。...

高效液相色譜分離原理 液—固 流動相為液體，固定相為吸附劑（如硅膠、氧化鋁等）。這是根據物質吸附作用的不同來進行分離的。其作用機制是：當試樣進入色譜柱時，溶質分子 (X) 和溶劑分子(S)對吸附劑表面活性中心發(fā)生競爭吸附（未進樣時，所有的吸附劑活性中心吸附的是S)，可表示如下：Xm nSa ====== Xa nSm 式中：Xm--流動相中的溶質分子；Sa--固定相中的溶劑分子；Xa--固定相中的溶質分子；Sm--流動相中的溶劑分子。 當吸附競爭反應達平衡時： K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa] 式中：K為吸附平衡...

高效液相色譜法介紹 基本原理 高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，是在經典液相色譜法的基礎上，于20世紀60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。與經典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻。因為較小的填充顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜。 使用高效液相色譜時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱，通過檢測器得到不同的峰信號，***通過分析比對這些信號來判斷待測物所含有的物質。...

高效液相色譜相關術語 峰面積(peak area，A)—峰與峰底所包圍的面積。 保留時間(retention time，tR)——從進樣開始到某個組分在柱后出現濃度極大值的時間。 理論塔板數(theoretical plate number，N)——用于定量表示色譜柱的分離效率（簡稱柱效）。 分離度(resolution，R)——相鄰兩峰的保留時間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。R≥1.5稱為完全分離。 《中國藥典》規(guī)定R應大于1.5。 拖尾因子(tailing factor，T)——T=，用...

高效液相色譜進樣裝置 ⑴注射器進樣裝置：進樣所用微量注射器及進樣方式與 GC法一樣。進樣壓力150×10^5Pa時，必須采用停流進樣。⑵高壓定量進樣閥：與GC法用的流通法相似，能在高壓下進樣。 高效液相色譜色譜柱 色譜柱是色譜儀**重要的部件（心臟）。通常用厚壁玻璃管或內壁拋光的不銹鋼管制作的，對于一些有腐蝕性的樣品且要求耐高壓時，可用銅管、鋁管或聚四氟乙烯管。柱子內徑一般為1～6 mm。常用的標準柱型是內徑為4.6 或3.9mm ，長度為15 ～30cm 的直形不銹鋼柱。填料顆粒度5 ～10μm ，柱效以理論塔板數計大約 7000 ～10000。 發(fā)展趨勢是減小填...

什么是液相色譜？ 液相色譜是一類分離與分析技術，其特點是以液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術發(fā)展的過程中．為了區(qū)分各種方法，根據固定相的形式產生了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。 經典液相色譜的流動相是依靠重力緩慢地流過色譜柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分離后的樣品是被分級收集后再進行分析的，使得經典液相色譜不僅分離效率低、分析速度慢，而且操作也比較復雜。直到20世紀60年代．發(fā)展出粒度小于10μm的高效固定相，并使用了高壓輸液泵和自動記錄的檢測器，克服了經典液相色譜的缺點，發(fā)展成高效液...