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胎牛血清-血清的主要成分：血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機(jī)物等...

如何區(qū)別真假胎牛血清：主要技術(shù)指標(biāo)，1、內(nèi)的毒性，標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。內(nèi)的毒性是細(xì)菌破碎后細(xì)胞壁的成分，因此內(nèi)的毒性含量的高低可表現(xiàn)出采的血到生產(chǎn)一系列過程中的無菌操作情況。目前，國產(chǎn)血清基本都能達(dá)到這一要求，很多進(jìn)口胎牛血清內(nèi)的毒性含量反而更高，只要求...

胎牛血清：解凍胎牛血清時(shí)，請(qǐng)按照規(guī)定的的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若胎牛血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍胎牛血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。請(qǐng)勿將胎牛血清置于37℃太久。若...

胎牛血清的處理方法有：熱滅活，F(xiàn)BS的常見處理方法是熱滅活，其中將FBS在56°C的水浴中加熱30分鐘，偶爾搖晃。目的是滅活FBS中存在的補(bǔ)體系統(tǒng)的任何成分，以及其他潛在的未知細(xì)胞生長抑制劑。以前熱滅活也是為了去除支原體污染，這不再是一個(gè)問題，因?yàn)楝F(xiàn)在所有的血...

胎牛血清的生產(chǎn)工藝：胎牛血清適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)（同位素標(biāo)記研究細(xì)胞代謝）適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選，避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎(chǔ)上進(jìn)行加工的。胎牛血清在無菌條件下要經(jīng)過0.1微米膜三重過濾，要進(jìn)行一系列的檢測(cè)，包括理化性質(zhì)檢查（如滲透...

胎牛血清制備：用止血鉗夾住血管，切開1厘米左右的切口進(jìn)行插管，插好管后打開血管的止血鉗，讓牛血順采的血管流入另一個(gè)潔凈房間內(nèi)的瓶中。采的血瓶采的血前經(jīng)干烤滅菌（180℃2小時(shí)）后，按無菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口，于采的血前半小時(shí)放入3...

胎牛血清如何采取?在牛屠宰過程中，如發(fā)現(xiàn)母牛懷孕，就應(yīng)立即將生殖系統(tǒng)從尸體中分離出來，在無菌條件下從子宮中取出小牛，進(jìn)行臍帶打結(jié)處理，清理羊水并消毒。在胎兒兩肋之間直接插入一根針頭到心臟，在真空的條件下，血液通過導(dǎo)管被抽入無菌的血液收集袋內(nèi)。在沒有真空泵時(shí)，也...

一種提高膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的方法與流程：膜片鉗技術(shù)是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細(xì)胞膜上離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。是用來研究單個(gè)離體的活細(xì)胞、組織切片或細(xì)胞膜片離子流的電生理實(shí)驗(yàn)技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)在可興奮細(xì)胞如神經(jīng)元、心肌細(xì)胞、肌纖維和胰腺細(xì)胞的研究中起至關(guān)重要...

胎牛血清與其它牛血清有何區(qū)別？胎牛血清（FoetalBovineSerum，簡稱FBS）：胎牛血清是指懷孕3-8個(gè)月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完全的胎牛心臟密閉穿刺采的血后，通過一系列工藝處理獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長發(fā)育因子，一旦胚胎發(fā)育完全這些因子會(huì)自動(dòng)...

胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用：1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長的Hormone，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有...

所謂real-timeQ-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，之后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在real-time技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）TaqDNA多聚酶的5′核...

如何區(qū)別真假胎牛血清：1、血紅蛋白，標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl，顏色越紅，數(shù)值越高，反之，數(shù)值越低。2、pH，國產(chǎn)血清，大多高于7.5，進(jìn)口胎牛血清，大多低于7.5，具體原因未知，可能和牛齡有關(guān)，這也能用來初步鑒別血清的來源。3、微生物。包括細(xì)菌、霉菌、支原體...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DN段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的很大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液，只要能分離出一...

Real-time PCR探針法適用于：1、具有高適應(yīng)性和可靠性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定重複性好，特異性更高。2、適用于擴(kuò)增序列專一的體系的檢測(cè)。3、樣品中靶基因含量過低的定量PCR檢測(cè)。4、靶基因的特異序列較短，無論怎樣較佳化引物設(shè)計(jì)條件都不能解決。5、存在與靶基因同...

胎牛血清都有哪些重要的指標(biāo)：一、內(nèi)的毒性，內(nèi)的毒性是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的特有成分。當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時(shí)，才表現(xiàn)其毒性。內(nèi)的毒性直接參與細(xì)胞凋亡，血清中內(nèi)的毒性含量越低，對(duì)細(xì)胞毒性越小，越利于細(xì)胞的生長和傳代；內(nèi)的毒性含量過高，會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)...

實(shí)時(shí)定量PCR的系統(tǒng)構(gòu)成及工作原理：熒光定量檢測(cè)系統(tǒng)由實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，實(shí)時(shí)熒光定量試劑，通用電腦，自動(dòng)分析軟件等構(gòu)成。設(shè)備由熒光定量系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)組成，用來監(jiān)測(cè)循環(huán)過程的熒光。與實(shí)時(shí)設(shè)備相連的計(jì)算機(jī)收集熒光數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實(shí)時(shí)分析軟件以圖表的形式顯示。...

胎牛血清的生產(chǎn)工藝：透析胎牛血清，顧名思義，需經(jīng)過透析。它是在4°C下用特定的透析膜對(duì)血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過，在滲透壓的作用下，這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10kDa以下的小分子有化...

胎牛血清：胎牛血清(FBS)，胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量...

胎牛血清中沉淀物該如何處理?胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。所有胎牛...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的試驗(yàn)污染：PCR反應(yīng)的很大特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與極高的靈敏性，但令人腦袋不適的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。污染原因：標(biāo)本間交叉污染：標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染，或標(biāo)本放置時(shí)，由于密封不嚴(yán)溢于容器外，或容器外粘有標(biāo)...

胎牛血清：胎牛血清用于細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)超過半個(gè)世紀(jì)了，20世紀(jì)50年代末TheodorePuck在細(xì)胞和組織培養(yǎng)中初次加入胎牛血清（FBS）來刺激細(xì)胞生長。后來人們發(fā)現(xiàn)，由于胎牛未進(jìn)食過母乳，所以IgG的含量極低，不會(huì)阻礙細(xì)胞生長，而且胎牛血清中含有豐富的促進(jìn)細(xì)胞...

胎牛血清中沉淀物該如何處理?胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質(zhì)量。所有胎牛...

血清中絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?1.將冷凍保存的血清取出后，置4℃冰箱靜止過夜；2.待血清融化后，上下顛倒，輕輕混勻，繼續(xù)4℃2-3小時(shí)；3.輕輕吸取上層血清，分裝，余底下50ml左右；4.低速離心5分鐘，去掉沉淀。若解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該怎么處...

所謂real-timeQ-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，之后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在real-time技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）TaqDNA多聚酶的5′核...

Real-time PCR操作流程：1、收集樣品。2相關(guān)試劑總RNA提取試劑TREzolReagent(RNA提取試劑),M-MLV（cDNA逆轉(zhuǎn)錄酶）,RNA純化試劑,RealqPCRMasterMix（螢光定量PCR預(yù)混試劑）。3實(shí)驗(yàn)儀器螢光定量PCR儀;...

Real-time PCR原理：基于探針的化學(xué)法，Real-time PCR應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；依賴熒光能量共振傳遞（FRET）檢測(cè)特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，單單檢測(cè)特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，DNA及RNA定量；基因表達(dá)驗(yàn)證；等位基因鑒別；SN...

Real-time PCR-傳統(tǒng)定量PCR：1）內(nèi)參照法：在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電...

Real-time PCR反應(yīng)：多重連接依賴探針擴(kuò)增（MLPA):允許用單個(gè)引物對(duì)擴(kuò)增多個(gè)靶標(biāo)，從而避免多重PCR的分辨率限制。多重聚合酶鏈反應(yīng):由單個(gè)PCR混合物中的多個(gè)引物組組成，以產(chǎn)生對(duì)不同DNA序列特異的不同大小的擴(kuò)增子。通過同時(shí)靶向多個(gè)基因，可以從單...

Real-time PCR的染料法和探針法的選擇：進(jìn)行mRNA表達(dá)量的測(cè)定，采用染料法是比較經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的；染料法可以通過比較熔解曲線的熔解峰位置得到產(chǎn)物特異性的情況；目的基因和內(nèi)參基因分管檢測(cè)，染料法可以選用Realtime染料PCRPreMIX，探針法主要應(yīng)用...

Real-time PCR螢光染料摻入法:在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR螢光染料，SYBR螢光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射螢光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何螢光信號(hào)，從而保證螢光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。此方法適用于：...