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膜片鉗電生理記錄技術：膜片鉗技術的基本原理：膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級，因此封接范圍內細胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位，測量單個離子通道開放產(chǎn)生的微小電流，這種...

膜片鉗使用的注意事項：工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質分子對相應離子通透難易程度等特性的一種實驗技術。它的基本原理是以一個光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細胞的膜接觸，之后對微電極另一端開口處施加適當?shù)呢搲河秒姌O的纖細開口...

膜片鉗使用的基本方法是，把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下，與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接，導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來，由于電性能隔離與微電極的相對低電阻（1～5MΩ），只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制，從微電極引...

Real-time PCR鏈反應的常見問題分析與解決方法：反應緩沖液未完全融化或未充分混勻。確保反應緩沖液融化完全并徹底混勻。引物特異性差。利用BLAST檢查引物特異性或重新設計引物。引物量過多。減少反應體系中引物的用量。模板量過多。質粒DNA的用量應

膜片鉗電生理技術服務只適用于藥物的初篩和二次篩選，且對樣本有很高的選擇性，而傳統(tǒng)的膜片鉗技術可適用于各種樣本，應用范圍廣，能夠分析檢測所有的離子通道類型，同時能夠分析離子通道的動力學特征。因此目前，傳統(tǒng)膜片鉗技術仍然是不可替代的。在進行膜片鉗實驗時，玻璃電極給...

膜片鉗技術是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜上離子通道分子活動的技術。是用來研究單個離體的活細胞、組織切片或細胞膜片離子流的電生理實驗技術。這項技術在可興奮細胞如神經(jīng)元、心肌細胞、肌纖維和胰腺細胞的研究中起至關重要的作用，也可用于研究特殊制備的巨型球...

為了便于對所檢測樣本進行比較，在real-timeQ-PCR反應的指數(shù)期，首先需設定一定熒光信號的域值，一般這個域值（threshold）是以PCR反應的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號（baseline），熒光域值的缺省設置是3～15個循環(huán)的熒光信號的...

膜片鉗實驗常見問題及解決方法：膜片鉗技術是電生理記錄的常用手段，目前在科學研究中使用越來越普遍。但在具體膜片鉗實驗操作的過程中，總會遇到各種各樣的問題，對實驗人員造成很多困擾。本次講座主要從實驗角度出發(fā)，以簡單，實用的原則，著重講解實驗中遇到的各種問題，以及解...

引物的設計對于這個實驗至關重要，因為Real-time PCR的檢測靈敏度比較高，所以相應的對引物設計的要求就很高。普通的要求規(guī)則大家都知道，還有幾點必須注意：1，引物的錯配率（引物錯配形成引物二聚體，但是SYBR照樣能嵌入進去，結果導致實驗結果的誤差很大，重...

膜片鉗記錄的幾種形式：細胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細胞膜表面上，形成高阻封接，在細胞膜表面隔離出一小片膜，既而通過微管電極對膜片進行電壓鉗制，高分辨測量膜電流，稱為細胞貼附膜片。由于不破壞細胞的...

膜片鉗操作實驗：膜片鉗放大器是整個實驗系統(tǒng)中的中心，它可用來作單通道或全細胞記錄，其工作模式可以是電壓鉗，也可以是電流鉗。從原理來說，膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結構形式，即電阻反饋式和電容反饋式，前者是一種典型的結構，后者因用反饋電容取代了...

很好的胎牛血清：好的血清應是透明清亮，土黃色或棕黃色，無沉淀或極少沉淀，比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁，不透明，含許多沉淀物，說明血清污染或血清中的蛋白質變性；若棕紅色，說明血清中的血紅蛋白含量太高，有溶血現(xiàn)象。胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高，說明...

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、、無機物等，這些物質對促進細胞生長...

胎牛顧名思義就是指還在母牛身體里的小牛，所以胎牛血清的采集工作，便是先從懷孕中的母牛身體里取出胎牛（通常5-8個月胎齡），之后對未發(fā)育完全的胎牛的心臟穿刺取血，完成的工作以后便再通過一系列的工藝處理獲得胎牛血清。而新生牛血清主要是采集已出生10天內的小牛，而且...

胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時之內的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。顯然，胎牛血清是品質較為高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分較...

熱滅活：一般是以56℃，30分鐘來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活化，而補體所參與的反應有：溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和。有必要做熱滅活嗎?實驗顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅清，對大多...

胎牛血清和新生牛血清的區(qū)別是什么？取血年齡不同：牛血清按照牛取血時間或牛齡可進行區(qū)分。胎牛血清指的是取自未出生，母牛剖腹得來的胎牛。國產(chǎn)胎牛血清（并無明確定義，但通常以此稱）的指的是出生4-6小時，且未進行哺乳進食的牛，有時還稱作國產(chǎn)新生牛。 新生牛血清指的是...

很好的胎牛血清：微生物，包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原毒等。隨著國內血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高，細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經(jīng)過0.1μm過濾，大多也能消除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的，主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入，又無法...

較為低血清試驗的要求。內有毒的檢測：內有毒的，又叫脂多糖（LPS）或脂寡糖（LOS），存在于革蘭氏陰性菌的細胞外膜。臨床上，內有毒的作為一些革蘭氏陰性菌的診斷提示，如腦膜炎球菌。動物體內，內有毒的能夠導致發(fā)熱或者誘導炎癥反應；細胞培養(yǎng)中，內有毒的能夠誘導細胞反...

國內科研人員購買胎牛血清的現(xiàn)狀：難辨真假。 原因很多，一方面是國內血清市場這幾年是愈發(fā)的混亂了，很多商家都盯上了這塊“蛋糕”，現(xiàn)在國內市場能見到的各種來源的血清品牌大于50種，使用者在不了解國家政策和相關知識的前提下很難去辨別和選擇安全、穩(wěn)定、合規(guī)的胎牛血清。...

血清的保存應該注意：熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻，此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活，除非必須，一般不建議作此熱處理，因為熱處理會造成血清沉淀物明顯增多，而且還會影響血清的質量，補體參與反...

小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項？來源不同：胎牛血清 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、及其他活性物質等組份與比例不同，用途與用法不同...

購買回來的血清都是冰凍狀態(tài),使用時需要融化,融化過程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進行,待溶解完成,我們觀察到的胎牛血清會表現(xiàn)出黃色或紅色。并不是越紅越好,也不是越黃越好,淡黃色到淡紅色才是比較正常的顏色范圍。很多培養(yǎng)細胞的寶寶會發(fā)現(xiàn)進口血清有沉淀,從而懷疑血清的質量...

除了對血清進行檢測，有何更直觀的方式分辨血清質量？目測法，我們可根據(jù)血清的顏色，沉淀，澄清度等進行區(qū)分。顏色：顏色根據(jù)血清蛋白含量的不同，可表現(xiàn)出黃色或者紅色。進口血清質量較為好的呈現(xiàn)出淡黃、微紅色，較差質量呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。熱滅清或保存不當?shù)?，由于血紅蛋...

胎牛血清參與細胞培養(yǎng)實驗為細胞生長提供必要的營養(yǎng)成分，對于研究細胞的科學人士來說，血清都不會陌生，其中胎牛血清是實驗操作的?？?。一般而言，胎牛血清是指懷孕5-8個月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完全的胎牛心臟穿刺后，通過一系列工藝處理獲得。此時胎牛血中含有特殊的生長發(fā)...

胎牛血清的合規(guī)血源產(chǎn)地對于細微差異即可決定成敗的細胞培養(yǎng)技術來說，選擇來源安全、品質優(yōu)良的胎牛血清至關重要。作為牛肉制品的副產(chǎn)品，胎牛血清的傳統(tǒng)產(chǎn)地包括澳大利亞，新西蘭， 美國， 南美（烏拉圭&巴西）以及歐洲等畜牧業(yè)發(fā)達的區(qū)域。業(yè)內通常會根據(jù)不同產(chǎn)地的牛情況，...

聚合酶鏈式反應的試驗污染：PCR擴增產(chǎn)物污染：這是PCR反應中很主要很常見的污染問題。因為PCR產(chǎn)物拷貝量大（一般為1013拷貝/ml），遠遠高于PCR檢測數(shù)個拷貝的極限，所以極微量的PCR產(chǎn)物污染，就可形成假陽性。還有一種容易忽視，很可能造成PCR產(chǎn)物污染的...

除了對血清進行檢測，有何更直觀的方式分辨血清質量？目測法，我們可根據(jù)血清的顏色，沉淀，澄清度等進行區(qū)分。顏色：顏色根據(jù)血清蛋白含量的不同，可表現(xiàn)出黃色或者紅色。進口血清質量較為好的呈現(xiàn)出淡黃、微紅色，較差質量呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。熱滅清或保存不當?shù)?，由于血紅蛋...

聚合酶鏈式反應：Taq(水生棲熱菌)聚合酶耐熱DNA聚合酶的很好活性溫度約為75-80°C(167-176°F),盡管該酶通常使用72°C(162°F)的溫度。在該步驟中，DNA聚合酶通過從反應混合物中添加在5’-至-3’方向上與模板互補的游離DNA鏈來合成與...

胎牛血清參與細胞培養(yǎng)實驗為細胞生長提供必要的營養(yǎng)成分，對于研究細胞的科學人士來說，血清都不會陌生，其中胎牛血清是實驗操作的?？?。一般而言，胎牛血清是指懷孕5-8個月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完全的胎牛心臟穿刺后，通過一系列工藝處理獲得。此時胎牛血中含有特殊的生長發(fā)...