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聚合酶鏈式反應：Taq(水生棲熱菌)聚合酶耐熱DNA聚合酶的很好活性溫度約為75-80°C(167-176°F),盡管該酶通常使用72°C(162°F)的溫度。在該步驟中，DNA聚合酶通過從反應混合物中添加在5’-至-3’方向上與模板互補的游離DNA鏈來合成與...

膜片鉗電生理紀錄系統(tǒng)及記錄方法：細胞膜由雙層脂膜組成，具有密封絕緣的特性，因此當紀錄 電極接觸到細胞膜時電阻會開始上升，然后以人工方式對紀錄電極內(nèi)施加一個負壓，可以讓電極與胞膜之間吸附得更為緊密而電阻也會加速上升，當紀錄電極的電阻達到千兆歐姆(Giga Ω)時...

血清的安全風險因素主要有以下方面：地理因素，地理因素包括血清產(chǎn)地的流行病學趨勢、基礎(chǔ)設(shè)施情況以及血源供應量。措施得當可以預防能避免的動物疾病，同時產(chǎn)地國穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)設(shè)施，對保證供應鏈的安全也十分必要。血源是否充足則決定了血清是否可源源不斷地持續(xù)供應。生產(chǎn)，生...

添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液，因為如果培養(yǎng)液有沉淀的存在，會使得其中培養(yǎng)的細胞產(chǎn)生大量的黑點，除此之外，細胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質(zhì)，總之出現(xiàn)這樣的情況會極其不利于細胞的正常生長。那么為了較為大程度減少血清的損失，可以把所有有沉淀的血清...

根據(jù)在體光纖成像記錄成像方式的不同, 在體生物發(fā)光成像主要有生物發(fā)光成像,和生物發(fā)光斷層成像兩種。其中,輸出是二維圖像, 即生物體外探測器上采集的光學信號，其原理簡單、 使用方便快捷, 適用于 定性分析及簡單的定量計算, 但無法獲得生物體內(nèi)發(fā)光光源的深度信息,...

光纖成像技術(shù)具有損耗低、成本低等優(yōu)勢，因此，光纖成像技術(shù)較多應用于生物醫(yī)學、激光技術(shù)等領(lǐng)域。早期的光纖成像系統(tǒng)采用多根單模光纖組成的光纖束收集圖像，每一根單模光纖用于收集一個像素點的圖像。包含較多的單模光纖，導致光纖束的直徑較大，因此，為了提高光纖成像系統(tǒng)的微...

聚合酶鏈反應的一個主要限制是，為了產(chǎn)生允許其選擇性擴增的引物，需要關(guān)于目標序列的先前信息。這意味著，通常情況下，PCR用戶必須知道兩個單鏈模板中每個模板上目標區(qū)域上游的精確序列，以確保DNA聚合酶正確結(jié)合引物-模板雜交體，并隨后在DNA合成過程中產(chǎn)生整個目標區(qū)...

光纖成像系統(tǒng)，所述光纖成像系統(tǒng)包括：激光器，圖像采集裝置，首先一多模光纖，第二多模光纖，光纖耦合器和第三多模光纖；所述光纖耦合器包括兩個首先一端口和一個第二端口，兩個首先一端口位于所述光纖耦合器的一側(cè)，所述第二端口位于所述光纖耦合器的另一側(cè)；所述首先一多模光纖...

加工是對采集到的很好胎牛血清進行解凍，在這個過程中溫度及環(huán)境指標的控制至關(guān)重要，解凍的過程是整個流程中較為容易產(chǎn)生細菌累積的步驟，精確控溫的分步解凍可以極大的減少這個步驟的細菌累積。解凍后的血清會被送到制劑室進行分離，分離后的血清需經(jīng)過多次過濾以去除生物污染。...

聚合酶鏈式反應準備：引物內(nèi)部不應出現(xiàn)互補序列。兩個引物之間不應存在互補序列，尤其是避免3 ′端的互補重疊。引物與非特異擴增區(qū)的序列的同源性不要超過70%，引物3′末端連續(xù)8個堿基在待擴增區(qū)以外不能有完全互補序列，否則易導致非特異性擴增。引物3‘端的堿基，特別是...

研制小動物三維在體光纖成像記錄，該成像設(shè)備以雙光子激發(fā)成像模態(tài)為中心，有機融合光片照明顯微成像模態(tài)，從細胞分子、結(jié)構(gòu)圖譜和功能回路多個層面系統(tǒng)多方面地提供生物體的神經(jīng)回路信息。圍繞小動物三維在體神經(jīng)回路成像設(shè)備研制這一中心目標，將會涉及到成像設(shè)備、圖像算法、軟...

膜片鉗技術(shù)原理：膜片鉗技術(shù)的建立，對生物學科學特別是神經(jīng)科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的（或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯(lián)系在一起，同時又將神經(jīng)科學的不同分野必...

聚合酶鏈式反應的試驗污染：實驗室中克隆質(zhì)粒的污染：在分子生物學實驗室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對照的檢驗室，這個問題也比較常見。因為克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞內(nèi)的質(zhì)粒，由于活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的...

膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細胞模式的胞質(zhì)滲漏問題,有學者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導電性孔道,借此對全細胞膜電流進...

聚合酶鏈式反應準備：10×擴增緩沖液、4種dNTP混合物（終濃度）、引物（終濃度）、模板DNA、Taq DNA聚合酶、Mg2+（終濃度）、補加雙蒸水等。其中dNTP、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶以及Mg2+的加量（或濃度）可根據(jù)實驗調(diào)整，以上表格只提...

在體光纖成像記錄分辨率和對比度是成像質(zhì)量的重要組成部分，分辨率指成像系統(tǒng)所能重現(xiàn)的被測物體細節(jié)的數(shù)量，對比度則是成像系統(tǒng)所產(chǎn)生的被測物體與其背景之間的灰度差別。攝像頭、鏡頭和燈光是決定分辨率和對比度的重要因素。成像系統(tǒng)所需較小像素分辨率可由下式計算：較小分辨率...

膜片鉗技術(shù)原理：膜片鉗技術(shù)的建立，對生物學科學特別是神經(jīng)科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的（或多個的離子通道分子活動的技術(shù)。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯(lián)系在一起，同時又將神經(jīng)科學的不同分野必...

膜片鉗技術(shù)：膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來，由于電極與細胞膜的高阻封接，在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離，因此，此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管，用一個極為敏感的電流監(jiān)...

對血清的成分和作用的研究雖有很大進展，但仍存在一些問題。主要是：血清的成份可能有幾百種之多，對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子、和脂類等尚未充分認識，這給研究工作帶來許多困難；血清都是批量生產(chǎn)，各批量之間差異很大，而且血清...

在體光纖成像記錄與傳統(tǒng)的醫(yī)學顯微成像系統(tǒng)相結(jié)合，已形成光纖OCT成像系統(tǒng)、光纖共焦顯微成像系統(tǒng)、關(guān)聯(lián)成像、光纖多光子成像技術(shù)以及三維成像等技術(shù)，發(fā)揮了原有顯微系統(tǒng)的長處，可應用到更多原來儀器所無法使用的場合。經(jīng)過近10年的發(fā)展，單光纖成像技術(shù)在成像機理、成像質(zhì)...

在體光纖成像記錄光學相干是濾除散射光的物理機制。反射光可以作為相干光，而由于散射光散射的位置不同，造成光路長度的差異，再加上光源的相干長度極短，使得散射光失去了相干的性質(zhì)。在光學相干斷層掃描設(shè)備中，光學干涉儀被用來檢測相干光。從原理上說，在體光纖成像記錄可以將...

血清的主要作用：對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞，如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被較廣用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成...

膜片鉗技術(shù)基本原理與特點：膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細胞膜面積不同，進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因...

血清的主要作用：提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細胞生長必須的物質(zhì)。提供和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)（氫化可的松、）、類固醇（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。提供結(jié)...

聚合酶鏈式反應的常見問題：陰性：需注意的是有時忘加Taq酶或溴乙錠。引物：引物質(zhì)量、引物的濃度、兩條引物的濃度是否對稱，是PCR失敗或擴增條帶不理想、容易彌散的常見原因。有些批號的引物合成質(zhì)量有問題，兩條引物一條濃度高，一條濃度低，造成低效率的不對稱擴增，對策...

為何血清會存在批間差？如何避免此影響？因為血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，每個批號的組分和組分含量都是不固定的，因此批間差異是可能存在的。為了避免批間差異對細胞的影響，XP建議先進行批號測試，篩選合適的批號，備好庫存（血清未開封時，在-20℃下可保...

聚合酶鏈反應有許多優(yōu)點。它很容易理解和使用，并迅速產(chǎn)生結(jié)果。這項技術(shù)非常敏感，有可能產(chǎn)生數(shù)百萬到數(shù)十億份特定產(chǎn)品的拷貝，用于測序、克隆和分析。qRT-PCR具有與PCR相同的優(yōu)點，同時還具有定量合成產(chǎn)物的優(yōu)點。因此，它可以用于分析病癥、微生物或其他疾病狀態(tài)中基...

膜片鉗芯片技術(shù)是繼細胞芯片之后的又一種嶄新的分析細胞電生理參數(shù)的芯片技術(shù).由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準確性特點外,還具有高通量、自動化以及細胞多通道參數(shù)和細胞網(wǎng)絡(luò)參數(shù)在線和實時檢測等優(yōu)點.因此,該芯片技術(shù)將很大促進細胞離子通道、細胞網(wǎng)絡(luò)傳導以及藥...

聚合酶鏈式反應的特點：靈敏度高：PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12）量級的起始待測模板擴增到微克（μg=-6）水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位）；在細菌學中很小檢...

膜片鉗技術(shù)是通過微玻管電極（膜片電極或膜片吸管）接觸細胞膜，用千兆歐姆以上的阻抗使之封接，在電學上分隔和電極尖開口處相接的細胞膜的小區(qū)域（膜片）以及其周圍，在此基礎(chǔ)上固定點位，對這膜片上的離子通道的離子電流（pA級）進行監(jiān)測記錄的方法。測量回路的中心部分是使用...